康偉，陳永泰，方葵，林志雄，陳增榮，陳文生

(1.廣州出入境檢驗(yàn)檢疫局廣東廣州510000;2.廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心廣東廣州510000; 3.增城出入境檢驗(yàn)檢疫局廣東廣州51000）

原產(chǎn)地隔離檢疫對(duì)進(jìn)口種牛疫病傳入的風(fēng)險(xiǎn)控制

康偉1，陳永泰1，方葵1，林志雄2，陳增榮1，陳文生3

(1.廣州出入境檢驗(yàn)檢疫局廣東廣州510000;2.廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心廣東廣州510000; 3.增城出入境檢驗(yàn)檢疫局廣東廣州51000）

1 概況

原產(chǎn)地隔離檢疫，是指在原產(chǎn)地國(guó)隔離檢疫場(chǎng)對(duì)預(yù)備出口中國(guó)的種用動(dòng)物進(jìn)行多個(gè)步驟的臨床檢疫和實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物疫病檢測(cè)，排查動(dòng)物傳染病，將健康的優(yōu)良種畜引進(jìn)回國(guó)的檢疫手段。原產(chǎn)地隔離檢疫具體分為隔離檢疫前的農(nóng)場(chǎng)檢疫和原產(chǎn)地隔離檢疫兩個(gè)部分[1]。

農(nóng)場(chǎng)檢疫流程為：先從目的農(nóng)場(chǎng)選購(gòu)大于引種企業(yè)要求數(shù)量的種用動(dòng)物，按照協(xié)議規(guī)定檢疫的相關(guān)動(dòng)物疫病，全部采血進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，如果實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率過(guò)高，就要考慮是否有必要繼續(xù)從該國(guó)家引進(jìn)動(dòng)物；如果陽(yáng)性率較低，符合國(guó)家有關(guān)規(guī)定，則在剔除陽(yáng)性動(dòng)物后，初步篩選出符合進(jìn)口要求的動(dòng)物，進(jìn)入出口前隔離場(chǎng)檢疫階段。

將農(nóng)場(chǎng)期檢疫合格的動(dòng)物投放入隔離檢疫場(chǎng)，中、大型動(dòng)物的隔離檢疫期一般為30～45 d。在隔離檢疫期間，獸醫(yī)官員每天例行對(duì)此批動(dòng)物進(jìn)行臨床檢疫，并采集血液樣本送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，審核檢測(cè)結(jié)果。若實(shí)驗(yàn)室報(bào)告陽(yáng)性率大于農(nóng)場(chǎng)檢疫時(shí)的陽(yáng)性率，說(shuō)明此批動(dòng)物潛在的疫情疫病較多，情況較為復(fù)雜，應(yīng)暫停進(jìn)口任務(wù)；若檢測(cè)結(jié)果符合我國(guó)的進(jìn)口要求，則繼續(xù)該批動(dòng)物的進(jìn)口工作，經(jīng)過(guò)這次產(chǎn)地嚴(yán)格檢疫把關(guān)，優(yōu)中選優(yōu)，外派獸醫(yī)官員最后批準(zhǔn)經(jīng)過(guò)臨床和實(shí)驗(yàn)室檢疫合格的優(yōu)良種畜出口中國(guó)[2]。在原產(chǎn)地國(guó)的港口，我方外派獸醫(yī)官員還需對(duì)批準(zhǔn)進(jìn)口我國(guó)的動(dòng)物做裝載前最后一次臨床體格檢查。

所有進(jìn)口的動(dòng)物在出口前都需要在原產(chǎn)地進(jìn)行隔離檢疫，本文通過(guò)某公司向新西蘭進(jìn)口種牛的原產(chǎn)地隔離檢疫實(shí)例，對(duì)原產(chǎn)地隔離檢疫實(shí)施手段和整個(gè)流程加以論述和說(shuō)明。

2 材料與方法

2.1材料

2.1.1檢疫動(dòng)物進(jìn)口企業(yè)從新西蘭110多個(gè)農(nóng)場(chǎng)選購(gòu)5 352頭青年母牛，2007年在新西蘭專供出口的種牛農(nóng)場(chǎng)采集全部備選種牛血清，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)地點(diǎn)為新西蘭國(guó)家疾病調(diào)查中心(NCDI)動(dòng)物衛(wèi)生參考實(shí)驗(yàn)室。檢疫目的為剔除牛傳染性鼻氣管炎陽(yáng)性奶牛。隨后對(duì)排除牛傳染性鼻氣管炎陽(yáng)性的4 150頭準(zhǔn)備參加農(nóng)場(chǎng)期檢疫的牛只，再進(jìn)行挑選，因外傷、眼病、發(fā)育不良、其他普通疾病等原因淘汰281頭，實(shí)際參加農(nóng)場(chǎng)期結(jié)核菌素皮試的動(dòng)物是3869頭。2007年6月15日-20日在新西蘭專供出口的種牛農(nóng)場(chǎng)進(jìn)行結(jié)核菌素變態(tài)反應(yīng)皮試實(shí)驗(yàn)，檢疫目的為剔除結(jié)核和副結(jié)核陽(yáng)性奶牛。經(jīng)過(guò)牛傳染性鼻氣管炎以及結(jié)核副結(jié)核病篩查工作后，剩下的3 758頭牛參加原產(chǎn)地農(nóng)場(chǎng)期實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。對(duì)農(nóng)場(chǎng)期實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)合格的3 685頭有資格進(jìn)入出口前隔離場(chǎng)的牛繼續(xù)篩選，由于體形、體表性狀、生殖器性狀、外傷等其他非傳染病原因淘汰了485頭牛，最終確定有3 198頭牛進(jìn)入出口前隔離場(chǎng)接受隔離檢疫[3]。

2.1.2實(shí)驗(yàn)試劑

1）牛傳染性鼻氣管炎檢測(cè)和結(jié)核菌素皮試實(shí)驗(yàn)所需試劑：檢測(cè)牛傳染性鼻氣管炎ELISA試劑盒（新西蘭國(guó)家疾病調(diào)查中心提供）；牛型提純結(jié)核菌素規(guī)格為5 mL/瓶，凍干型；禽型提純結(jié)核菌素規(guī)格為2 mL/瓶，凍干型。

2）農(nóng)場(chǎng)期實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)主要試劑：補(bǔ)體、溶血素、副結(jié)核補(bǔ)反抗原、標(biāo)準(zhǔn)牛副結(jié)核陰性/陽(yáng)性對(duì)照血清、3%綿羊紅細(xì)胞、超純水、生理鹽水、溶血素、牛結(jié)核病檢測(cè)ELISA試劑盒、牛傳染性鼻氣管炎檢測(cè)ELISA試劑盒、牛地方性白血病病毒瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)抗原、蠟脂板、標(biāo)準(zhǔn)牛地方性白血病陰性/陽(yáng)性對(duì)照血清、牛藍(lán)舌病檢測(cè)ELISA試劑盒、滅菌巴比妥緩沖液、牛傳染性胸膜肺炎補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)抗原、牛傳染性胸膜肺炎補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)陰性/陽(yáng)性血清、60a綿羊紅細(xì)胞懸浮液。

3）隔離期實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)主要試劑：同“2）農(nóng)場(chǎng)期實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)主要試劑”。

2.1.3實(shí)驗(yàn)器材酶標(biāo)儀、單道或多道移液器、玻璃試管、96孔U型微量反應(yīng)板、恒溫箱等。

2.2實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1牛傳染性鼻氣管炎血清抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法

牛傳染性鼻氣管炎（IBR）抗體檢測(cè)應(yīng)用ELISA檢測(cè)試劑盒，采用阻斷ELISA進(jìn)行檢測(cè)。

2.2.2牛結(jié)核和副結(jié)核病變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)方法用1 mL一次性注射器進(jìn)行皮內(nèi)注射，上部注射牛型結(jié)核菌素，下部注射禽型結(jié)核菌素。每頭牛各注射0.1 mL。在注射牛型、禽型提純結(jié)核菌素后72 h后，進(jìn)行觀察，實(shí)測(cè)。依據(jù)GB/T18645-2002的判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定。皮厚差≥4 mm為反應(yīng)結(jié)果陽(yáng)性，2 mm≤皮厚差＜4 mm為可疑。皮厚差＜2 mm為陰性。如果禽型結(jié)核菌素的反應(yīng)大于牛型結(jié)核菌素，兩種菌素之間的皮厚差≥2 mm，即為可能感染了禽結(jié)核菌或副結(jié)核菌。

2.2.3原產(chǎn)地農(nóng)場(chǎng)期實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法 ①結(jié)核病，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法；②副結(jié)核，采用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)；③牛傳染性鼻氣管炎，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法；④牛地方流行性白血病，采用瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)；⑤牛傳染性胸膜肺炎，采用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)方法；⑥牛藍(lán)舌病，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法。

2.2.4原產(chǎn)地隔離檢疫期檢疫方法

1）臨床檢查法：臨床檢查主要以感觀檢查為主，觀察動(dòng)物的各種表現(xiàn)（靜、動(dòng)、起、臥、精神、飲水、食欲等）是否正常，體溫、脈博、呼吸是否在正常生理指標(biāo)范圍內(nèi)，排泄、排遺產(chǎn)物是否正常，常規(guī)臨床檢查包括群體檢查和個(gè)體檢查。

①每天至少兩次定時(shí)對(duì)全群動(dòng)物采取感觀檢查為主的臨床觀察；②發(fā)現(xiàn)異常動(dòng)物及時(shí)隔離，剖檢動(dòng)物尸體，做病理學(xué)檢查，采集動(dòng)物樣本送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，如有檢出疫病，需對(duì)全群動(dòng)物做該種疫病血清學(xué)檢測(cè)；③根據(jù)臨床檢疫情況及時(shí)做出相應(yīng)處理措施。

2）病理學(xué)檢查法：如果隔離動(dòng)物猝死，可以剖檢，做病理學(xué)檢查，患疫病而死亡的動(dòng)物尸體，常呈現(xiàn)一定的病理變化，有的還有其特征性病理變化，可作為診斷的依據(jù)之一。

3）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法：同“2.2.3原產(chǎn)地農(nóng)場(chǎng)期實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法”。

3 結(jié)果與分析

5 352頭備選種牛經(jīng)過(guò)ELISA法檢測(cè)后，檢出牛傳染性鼻氣管炎（IBR）陽(yáng)性牛1 100頭，陽(yáng)性率為20.5%，疑似陽(yáng)性牛102頭，可疑率為2%。淘汰全部陽(yáng)性牛及疑似陽(yáng)性牛只共1 202頭。

新西蘭為IBR的高發(fā)國(guó)家，IBR在新西蘭普遍存在，陽(yáng)性檢出率平均達(dá)20%～30%。據(jù)資料統(tǒng)計(jì)，在新西蘭的南島和北島上的18月齡牛群中，血清抗體陽(yáng)性率為19%和41%[4]。此次進(jìn)口的奶牛，收集自新西蘭國(guó)內(nèi)100多個(gè)牧場(chǎng)，可以設(shè)想，其中會(huì)有IBR的存在。因此IBR隨此批種牛傳入我國(guó)內(nèi)地的風(fēng)險(xiǎn)較大，首次IBR檢測(cè)就從5 352頭牛中檢出1 202頭陽(yáng)性及疑似陽(yáng)性病牛，為接下來(lái)的農(nóng)場(chǎng)檢疫及原產(chǎn)地隔離檢疫打下良好的基礎(chǔ)。在農(nóng)場(chǎng)檢疫前對(duì)引種國(guó)存在的高發(fā)動(dòng)物疫病做針對(duì)性篩查和剔除工作有效控制了該動(dòng)物疫病傳入我國(guó)境內(nèi)的風(fēng)險(xiǎn)[5]。

參加結(jié)核菌素皮試反應(yīng)種牛總數(shù)為3 869頭，檢出結(jié)核和副結(jié)核陽(yáng)性頭數(shù)為98頭，陽(yáng)性率為2.532%，檢出可疑動(dòng)物數(shù)量為13頭，可疑率為0.336%。陽(yáng)性動(dòng)物和可疑動(dòng)物總計(jì)111頭均被淘汰，經(jīng)過(guò)結(jié)核和副結(jié)核病篩查后，牛群動(dòng)物數(shù)量為3 758頭。

農(nóng)場(chǎng)期實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)檢出牛副結(jié)核、牛傳染性鼻氣管炎、牛傳染性胸膜肺炎、牛地方流行性白血病、藍(lán)舌病等5種動(dòng)物疫病，陽(yáng)性牛只73頭，總陽(yáng)性率為1.942%。其中檢出牛副結(jié)核病35頭，陽(yáng)性率為0.924%，牛傳染性鼻氣管炎7頭，陽(yáng)性率為0.186%，牛地方流行性白血病2頭，陽(yáng)性率為0.05%，牛傳染性胸膜肺炎28頭，陽(yáng)性率為0.745%，藍(lán)舌病1頭，陽(yáng)性率為0.025%。淘汰陽(yáng)性動(dòng)物，剩余3 658頭種牛有資格進(jìn)入原產(chǎn)地隔離檢疫。

隔離檢疫期間，臨床檢疫未發(fā)現(xiàn)染疫動(dòng)物，但是在進(jìn)行臨床觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)部分牛有牛皮癬的癥狀，皮癬是牛常見(jiàn)的體外寄生蟲(chóng)病，會(huì)影響到動(dòng)物的外表，嚴(yán)重時(shí)會(huì)影響動(dòng)物的攝食和免疫力。為了保障進(jìn)口商的利益和我國(guó)生物安全，對(duì)經(jīng)治療仍未徹底康復(fù)的185頭種牛禁止裝船出口。

隔離檢疫期間的臨床檢疫是動(dòng)物檢疫中一種常用的檢疫方法，具有直觀性和快速性，能夠迅速發(fā)現(xiàn)疑似病例或者異常動(dòng)物，而且，臨床檢疫具有持續(xù)性，臨床檢疫延伸至進(jìn)口動(dòng)物在港口裝運(yùn)前。此外，對(duì)裝運(yùn)動(dòng)物耳牌號(hào)碼及動(dòng)物數(shù)量的核對(duì)也尤為關(guān)鍵，如：2002年9月，澳大利亞在向中國(guó)出口的1 950頭小乳牛中，我國(guó)檢疫官員共發(fā)現(xiàn)41頭有癬疾的牲畜，并把這些病畜和健康牲畜隔離。然而，澳大利亞的出口商試圖將帶有疾病的牲畜裝船運(yùn)往中國(guó)，把被查出有疾病的牲畜送回到準(zhǔn)備出口的健康牲畜中，并額外增加了157頭牲畜。當(dāng)雙方獸醫(yī)再次進(jìn)行檢疫時(shí)，發(fā)現(xiàn)總共多出198頭牲畜，其中有部分?；加邪_疾，并有2頭牛呈現(xiàn)IBR陽(yáng)性反應(yīng)。中國(guó)外檢官員在臨床監(jiān)管中及時(shí)發(fā)現(xiàn)這一情況，我方立即取消這批動(dòng)物的進(jìn)口計(jì)劃。在對(duì)新西蘭種牛的臨床檢疫中，雖然沒(méi)有檢出傳染性疫病，但是剔除了185頭癬疾種牛。癬疾由寄生蟲(chóng)引起，攜帶寄生蟲(chóng)的癬疾病牛如被引入我國(guó)，對(duì)我國(guó)的生物安全會(huì)產(chǎn)生危害。

4 討論

4.1選定高發(fā)疫病先進(jìn)行篩查工作

農(nóng)場(chǎng)期實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)IBR、結(jié)核與副結(jié)核結(jié)果表明檢出陽(yáng)性動(dòng)物及陽(yáng)性率較之農(nóng)場(chǎng)期前均顯著下降（見(jiàn)表1）。

表1 結(jié)核副結(jié)核病和IBR剔除工作與農(nóng)場(chǎng)期實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)檢出情況比較

選定某些高發(fā)疫病先進(jìn)行篩查工作是有非常積極的意義的，篩查疫病的工作能檢出大部分染疫動(dòng)物，再通過(guò)農(nóng)場(chǎng)期實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)檢測(cè)加以補(bǔ)充，能夠大幅度提高檢出疫病的效率。農(nóng)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)前先做指定動(dòng)物疫病的篩查，盡早檢出陽(yáng)性動(dòng)物，避免染疫動(dòng)物污染整個(gè)動(dòng)物種群。

4.2對(duì)高發(fā)動(dòng)物疫病進(jìn)行多次實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

新西蘭是IBR高發(fā)國(guó)家，經(jīng)過(guò)三個(gè)階段的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，檢出IBR陽(yáng)性動(dòng)物數(shù)量和陽(yáng)性率都逐漸減少和下降，農(nóng)場(chǎng)期前疫病剔除工作檢出陽(yáng)性動(dòng)物高達(dá)1 100頭，陽(yáng)性率20.5%，農(nóng)場(chǎng)期實(shí)驗(yàn)室檢疫檢出陽(yáng)性動(dòng)物7頭，陽(yáng)性率0.186%，在隔離檢疫期的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中，僅檢出1頭陽(yáng)性動(dòng)物，陽(yáng)性率僅為0.031%，足以見(jiàn)得在多輪次的檢疫中，牛群中IBR陽(yáng)性動(dòng)物被剔出殆盡，因而降低IBR傳入我國(guó)的風(fēng)險(xiǎn)。

4.3多個(gè)階段反復(fù)篩查動(dòng)物疫病

多階段反復(fù)的疫病篩查工作，是原產(chǎn)地隔離檢疫控制動(dòng)物疫病風(fēng)險(xiǎn)傳入的重要因素。原產(chǎn)地隔離檢疫開(kāi)始前，有待檢動(dòng)物5 352頭，到隔離檢疫結(jié)束時(shí)有資格裝運(yùn)出口的動(dòng)物僅有3 000頭，因疫病、動(dòng)物表現(xiàn)性狀不佳等因素淘汰了2 352頭，淘汰率高達(dá)44%，其中因疫病因素淘汰1 284頭，淘汰率為24%。從農(nóng)場(chǎng)期前IBR、結(jié)核病的剔除工作到農(nóng)場(chǎng)和隔離場(chǎng)實(shí)驗(yàn)室檢疫階段，每一輪檢疫都淘汰部分不合格的動(dòng)物，健康動(dòng)物進(jìn)入下一輪繼續(xù)篩選。各個(gè)檢疫環(huán)節(jié)緊密連接，多種檢疫手段綜合應(yīng)用，保障了檢疫效率和檢疫的準(zhǔn)確率，顯著降低動(dòng)物疫病隨進(jìn)口動(dòng)物入境的風(fēng)險(xiǎn)（見(jiàn)圖1）。

圖1各檢疫階段牛群數(shù)量的比較

原產(chǎn)地隔離檢疫廣義上包括特定動(dòng)物疫病的篩查、農(nóng)場(chǎng)期實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)、農(nóng)場(chǎng)檢疫后進(jìn)入出口隔離檢疫場(chǎng)的動(dòng)物檢疫這幾檢疫流程，原產(chǎn)地隔離檢疫是隔離檢疫體系中非常重要的組成部分，可通過(guò)多個(gè)檢疫流程的流水線嚴(yán)密篩查以及多種檢疫手段的共同運(yùn)用以此來(lái)達(dá)到控制動(dòng)物疫病傳入風(fēng)險(xiǎn)的目的。原產(chǎn)地隔離檢疫也是隔離檢疫體系在國(guó)外的延伸和主動(dòng)防御，能夠?qū)?dòng)物疫病御之國(guó)門以外?！觯ň庉嫞撼５希?/p>

[1] 康偉,陳增榮.進(jìn)口大中動(dòng)物隔離檢疫體系的建立[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫,2011,(9):65.

[2] 康偉,陳增榮.淺淡進(jìn)境動(dòng)物隔離場(chǎng)防疫工作規(guī)范[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫,2011,(2):70.

[3] 康偉,陳增榮.淺談隔離檢疫期間豬鏈球菌病的防治[J].廣東畜牧獸醫(yī)科技,2011,(2):21.

[4] 贠秋安.談赴新西蘭執(zhí)行進(jìn)口種牛檢疫[J].中國(guó)檢驗(yàn)檢疫,2008, (10):22-24.

[5] 李樹(shù)根,黎兆滾,陳博文.由新西蘭進(jìn)口奶牛爆發(fā)傳染性牛鼻氣管炎報(bào)告[J].獸醫(yī)科技雜志,1984,20(3):32-34.