劉晨，張炳遠

（青島大學附屬醫(yī)院，山東青島266000）

Git2在膽管癌組織中的表達和意義

劉晨，張炳遠

（青島大學附屬醫(yī)院，山東青島266000）

目的探討Git2在膽管癌組織中的表達。方法采用免疫組化技術(shù)檢測Git2在膽管癌和膽管癌癌旁組織中的表達。所獲數(shù)據(jù)采用χ2檢驗。結(jié)果膽管癌組織中的Git2陽性表達率（72.90%）明顯高于膽管癌癌旁組織（50.80%)(P<0.01)。在膽管癌組中Git2在低、中、高分化癌組織中陰性表達率分別為88.9%（24/27）、75%（15/20）、33%（4/12），三者均有顯著差異，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中Git2陽性表達率為85.60%（33/39），高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的組織50.00%（10/20），差異有顯著性（P< 0.05）。結(jié)論Git2可能與膽管癌的病理分化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

G蛋白偶聯(lián)受體激酶結(jié)合蛋白2；膽管癌

膽管癌是一種上皮細胞惡性腫瘤，病發(fā)于膽管。根據(jù)膽管癌的發(fā)病部位不同，Blumgart[1]指出膽管癌可以分為肝內(nèi)膽管癌和肝外膽管癌兩種形式。沿膽管壁浸潤式增長是膽管癌轉(zhuǎn)移的主要方式，同時可伴隨周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。膽管癌多局部性生長，遠處轉(zhuǎn)移幾率小，惡性程度高，預后差。

目前對腫瘤的研究主要在腫瘤的激活及抑癌基因的研究。細胞粘附和細胞運動在很多生理和病理過程中起到了重要的作用，能夠?qū)毎l(fā)育、腫瘤侵襲和細胞轉(zhuǎn)移等產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。G蛋白偶聯(lián)受體激酶結(jié)合蛋白2（Git）分子能夠與PIX或樁蛋白結(jié)合，與ARF6和PAK等發(fā)生作用，在腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。N-α-乙酰轉(zhuǎn)移酶10（NAA10）是一種重要的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因子，可以對PIX-GIT-Paxillin復合物產(chǎn)生干擾，抑制腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移過程[2]，表明Git蛋白能夠促進腫瘤轉(zhuǎn)移。細胞極性蛋白Scribble能夠與PIX和Git結(jié)合，促進甲狀腺激素受體內(nèi)吞作用的形成[3]，增強PAK和Rac的活性[4]。細胞極性蛋白Scribble出現(xiàn)功能和結(jié)構(gòu)異常會導致哺乳動物腫瘤的出現(xiàn)，提出GIT可能促進腫瘤的產(chǎn)生[5]。雖然上述研究表明GIT蛋白能夠促進腫瘤的轉(zhuǎn)移，但是關(guān)于腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移過程的調(diào)節(jié)機制尚未明確，需要進一步的研究。本實驗采用免疫組織化學S-P法檢測Git2在膽管癌組織及癌旁組織中的表達率分析的表達情況；結(jié)合膽管癌的臨床病理參數(shù)：病理分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，評價Git2與膽管癌的發(fā)生、發(fā)展是否相關(guān)；并探討其在膽管癌的發(fā)病風險、預后中的作用。

1 臨床資料

1.1 一般資料將來自于2011年7月—2013年9月青島大學附屬醫(yī)院手術(shù)切除的59例膽管癌患者的石蠟組織標本，進行連續(xù)切片，切片厚4μm。經(jīng)HE染色后確認其分化的程度，結(jié)合臨床的資料確定腫瘤的部位及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移，選出59例膽管癌組織石蠟標本。所有取材的膽管癌組織石蠟標本，患者手術(shù)前均無化療及放療。年齡26～79歲，平均年齡55歲。男性43例，女性17例。高分化27例，中20例、低分化12例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者39例，無轉(zhuǎn)移者20例。腫瘤部位肝內(nèi)17例，肝外42例。取59例膽總管癌旁組織（距腫瘤邊緣1cm的膽總管組織）作對照組。

1.2 檢測方法Git2單克隆抗體、SP試劑盒、AEC顯色試劑盒均為福建福州邁新生物技術(shù)有限公司。實驗中皆按照試劑盒使用說明進行操作?？瞻讓φ眨河肞BS代替一抗作為陰性對照；陽性對照：Git2用公司提供陽性切片作為對照。Git2陽性表達為染色后在細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒。采用雙盲法觀察陽性試驗，由經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)師獨立觀察并切片，切片放置于光學顯微鏡下，觀察視圖中組織免疫學染色。位于細胞核中的Git2蛋白的陽性表達為棕黃色顆粒，選擇樣本在10倍視野下觀察，對細胞染色程度和陽性率進行分析并作出評分：1）染色不強未染色者記0分；染色淡黃者記1分；染色呈黃色者記2分；染色呈棕褐色者記3分。2）陽性染色率：染色率小于1%者記0分；染色率為1%～10%者記1分；染色率為11%～50%者記2分；染色率大于50%者記3分。根據(jù)染色程度評分和染色陽性率的評分相乘，若結(jié)果大于4，則為陽性表達，若結(jié)果在0～3分之內(nèi)，則為陰性表達。

1.3 統(tǒng)計學處理應用SPSS13.0軟件分析，所獲數(shù)據(jù)采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

Git2與膽管癌的臨床病理關(guān)系：1）Git2在膽管癌組織及膽管癌癌旁組織中的陽性表達率分別為72.90%和50.80%。顯微鏡下陽性染色主要是膽管癌的細胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒，如圖1；而Git2表達陰性的膽管癌癌旁組織在細胞核中未見到類似的棕黃色顆粒，或者陽性細胞數(shù)少，如圖2。2）性別男25例，陽性19例，占76.0%；女34例，陽性24例，占70.6%。>55歲35例，陽性27例，占77.10%；<55歲24例，陽性16例，占66.7%。腫瘤位肝內(nèi)者17例，陽性11例，占64.7%，肝外42例，陽性32例，占76.2%。肝管癌組織59例，陽性43例，占72.9%；癌旁組織59例，陽性30例，占50.8%。按照病理組織學分級，Git2在低、中、高分化癌組織中陰性表達率分別為88.9%（24/27）、75%（15/20）、33%（4/12），三者均有顯著差異，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中Git2陽性表達率為85.60%（33/39），高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的組織50.00%（10/ 20），差異有顯著性（P<0.05），這表明Git2的陽性表達與膽管癌的轉(zhuǎn)移也存在顯著相關(guān)。以上結(jié)果提示，當Git2表達上升時，促進早期腫瘤的進展及淋巴轉(zhuǎn)移。

圖1

圖2

3 討論

Premont是最早發(fā)現(xiàn)G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白2，并對其作用進行了分析和探索。G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白2，簡稱Git2，存在于人類染色體12q24.1區(qū)域，缺乏C端結(jié)構(gòu)域[6]，是一種廣泛存在的多結(jié)構(gòu)蛋白，組織分布范圍廣泛，在免疫組織中存在，有多種剪接體形式表達。在肌動蛋白細胞骨架的組裝過程中Git2也起到了重要的作用[7,8]，并且在細胞內(nèi)信號傳遞過程中有重要的調(diào)節(jié)作用[6]。GIT分子能夠與GPK相互作用在G蛋白偶聯(lián)受體通路中調(diào)節(jié)受體的功能，減弱β腎上腺素受體信號的強度[7]，同時改變PAKs定位，重塑粘附斑發(fā)生[9]。以上研究皆提示Git2參與調(diào)節(jié)細胞的運動。本次研究發(fā)現(xiàn)，Git2在不同的膽管癌病理分級是明顯不同，分化越差，陽性率越高。研究發(fā)現(xiàn)，GIT2在肝癌，肺癌，乳腺癌，子宮內(nèi)膜癌，惡性淋巴瘤中等腫瘤組織中都有表達且Git2可以通過調(diào)節(jié)NF-κB的激活，從而對腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移發(fā)揮重要的作用[10]。本次研究提示Git2在膽管癌中也有異常表達。并且當有淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移時Git2表達增強，提示Git2與膽管癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。提示Git2可能參與了膽管癌的病理分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其過度表達在判斷膽管癌患者預后中有一定的臨床意義。

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R735.8；R446.61

A

1008-4118（2015）03-0038-03

10.3969/j.issn.1008-4118.2015.03.014

2015-05-20

張炳遠。E-mail:bingyuanzhang@126.com。