王松，胡斌，雍軍，馮娟，王玲玲，阿依恒·曲庫(kù)爾汗

新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科，新疆 烏魯木齊 830054

BER通路中XRCC1多位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與新疆不同民族喉癌易感性相關(guān)性研究

王松1，胡斌2，雍軍3，馮娟3，王玲玲3，阿依恒·曲庫(kù)爾汗1

新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科，新疆 烏魯木齊 830054

背景與目的：影響腫瘤遺傳易感性的修復(fù)基因主要存在修復(fù)通路堿基切除修復(fù)(base excision repair，BER)途徑，而X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(X-ray repair cross complementing group 1，XRCC1)是BER通路中的核心基因。近幾年，國(guó)內(nèi)外開展了許多有關(guān)基因多態(tài)性和喉癌易感性的研究。探討B(tài)ER通路DNA修復(fù)基因XRCC1多位點(diǎn)單核甘酸多態(tài)性與新疆不同民族喉癌易感性關(guān)系。方法：采用患者組與對(duì)照組的研究方法，選擇58例喉癌(經(jīng)病理證實(shí)為鱗狀細(xì)胞癌)患者和120名體檢正常的健康人對(duì)照，應(yīng)用Multiplex SNaPshot技術(shù)檢測(cè)DNA堿基切除修復(fù)基因XRCC1的Gln632Gln(rs3547)、Arg399Gln(rs25487)、Arg280His(rs25489)、Arg194Trp(rs1799782)位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)在患者組和正常對(duì)照組中的分布情況。結(jié)果：喉癌患者組中XRCC1 Arg280His(rs25489)C/T(雜合型)及T/T(突變型)基因型的比例與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。喉癌患者組中XRCC1的其余3個(gè)位點(diǎn)Gln632Gln(rs3547)C/T(雜合型)及T/T(突變型)基因型、Arg399Gln(rs25487) C/T(雜合型)及T/T(突變型)基因型、Arg194Trp(rs1799782)G/A(雜合型)及A/A(突變型)基因型的比例明顯高于對(duì)照組(P＜0.01)。其中漢、維、哈3個(gè)民族患者組Gln632Gln(rs3547)C/T(雜合型)及T/T(突變型)基因型、Arg399Gln(rs25487)C/T(雜合型)及T/T(突變型)基因型、Arg194Trp(rs1799782)G/A(雜合型)及A/A(突變型)基因型比例顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，攜帶(rs3547)C/T及T/T基因型、(rs25487)C/T及T/T基因型、(rs1799782)G/A及A/A基因型個(gè)體較攜帶XRCC1(rs3547)C/C基因型、(rs25487)C/C基因型、(rs1799782)G/G基因型的個(gè)體患喉鱗狀細(xì)胞癌的風(fēng)險(xiǎn)升高了分別為0.96倍、1.74倍、1.39倍；1.47倍、1.32倍、0.77倍，1.49倍、1.51倍、1.56倍。結(jié)論：漢、維、哈3個(gè)民族的XRCC1 Gln632Gln、Arg399Gln、Arg280His、Arg194Trp位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性可能與喉癌遺傳性有關(guān)聯(lián)且有差異，XRCC1基因中的Gln632Gln、Arg399Gln、Arg194Trp位點(diǎn)的突變將導(dǎo)致喉癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)升高。而XRCC1基因中的Arg280His位點(diǎn)突變與喉癌發(fā)病的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能該位點(diǎn)的突變與喉癌發(fā)病無關(guān)。

堿基切除修復(fù)通路；X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因；單核苷酸多態(tài)性；喉癌；易感性

喉癌是耳鼻咽喉頭頸外科常見的惡性腫瘤，其確切的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道其發(fā)病可能為遺傳和環(huán)境多種危險(xiǎn)因素(幽門螺桿菌、吸煙、酗酒)等綜合所致［1-2］。DNA修復(fù)系統(tǒng)通過不同的修復(fù)通路促使DNA中損傷的、不合適的或者錯(cuò)配的堿基恢復(fù)原來的特性，以維持遺傳物質(zhì)穩(wěn)定。堿基切除修復(fù)(base excision repair，BER)是DNA修復(fù)系統(tǒng)中最主要的一種修復(fù)途徑，已有研究表明與人類多種惡性腫瘤發(fā)病有關(guān)［3-6］。X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(X-ray repair cross complementing group 1，XRCC1)作為通路中一個(gè)常見基因，其多態(tài)性可改變修復(fù)酶的結(jié)構(gòu)從而影響其腫瘤易感性［7］。研究表明，XRCC1位點(diǎn)多態(tài)性與多種腫瘤如肺癌、胃癌、淋巴瘤及甲狀腺癌等［8-14］的易感性有關(guān)。本研究在問卷基礎(chǔ)上應(yīng)用Multiplex SNaPshot技術(shù)(多重單堿基延伸反應(yīng)技術(shù))檢測(cè)XRCC1多位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性在新疆不同民族喉癌患者和健康人群中的分布和遺傳變異發(fā)生率，探討基因與環(huán)境相互作用，為篩查不同民族易感個(gè)體以及最終的個(gè)體化防治提供理論依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 研究對(duì)象

采用患者組與對(duì)照組1∶2配對(duì)方法，選擇新疆各大醫(yī)院耳鼻咽喉科2009年6月—2011年1月，經(jīng)病理證實(shí)為喉鱗狀細(xì)胞癌患者，為患者組58例，男性49例，女性9例(包括漢族28例，維吾爾族16例，哈薩克族14例)，平均年齡(62.00±6.75)歲。按1987年UICC分期標(biāo)準(zhǔn)可分為T1N0M018例，T2N0-1M015例，T3N0-2M017例，T4N0-2M08例；聲門型21例，聲門上型26例，聲門下型7例，分期、分型不明4例。選擇同時(shí)期體檢正常人群120名為對(duì)照組，平均年齡(58.00±7.14)歲。喉癌患者組與對(duì)照組采用Hardy-weinberg平衡檢驗(yàn)及Logistic回歸，使上述兩組之間有可比性，配對(duì)的兩組間性別構(gòu)成比一致，年齡相差在5歲以內(nèi)。經(jīng)同意對(duì)每位受試者均取外周靜脈血約4 mL，同時(shí)進(jìn)行問卷調(diào)查，收集研究對(duì)象的既往史、個(gè)人史、家族史、吸煙史、飲酒史、居住環(huán)境、特殊嗜好、飲食習(xí)慣、工作環(huán)境等資料。采用全血基因組提取試劑盒(天根生化科技北京有限公司提供：血液基因組DNA提取試劑盒離心柱型，型號(hào)：DP318-03)。在常溫下快速提取血液基因組DNA。

1.2 主要試劑及儀器

全血基因組提取試劑盒購(gòu)自天根生化科技北京有限公司，DK-8D型電熱恒溫水槽購(gòu)自上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，凝膠成像儀購(gòu)自上海培清科技有限公司，Centrifuge5810R購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司，BG-Power 300電泳儀購(gòu)自北京百晶生物科技有限公司，引物購(gòu)自上海生工，PCR緩沖液購(gòu)自日本Takara公司，PCR Marker購(gòu)自NEW ENGLAND Biolabs，BIOWEST瓊脂糖購(gòu)自上海夏夷實(shí)業(yè)有限公司，SNaPshot Multiplex購(gòu)自美國(guó)ABI公司，5X Sequencing Buffer購(gòu)自美國(guó)ABI公司，SAP購(gòu)自美國(guó)Promega公司，DNA聚合酶購(gòu)自德國(guó)Qiagen公司。

1.3XRCC1基因Gln632Gln(rs3547)、Arg399Gln(rs25487)、Arg280His(rs25489)、Arg194Trp(rs1799782)多態(tài)性的檢測(cè)

DNA樣本取1 μL 1% agarose電泳對(duì)其樣本進(jìn)行質(zhì)量檢查以及濃度估計(jì)，然后根據(jù)估計(jì)的濃度將樣本稀釋到工作濃度5～10 ng/μL。

1.3.1 PCR檢測(cè)

P C R引物包括r s 1 7 9 9 7 8 2順義鏈：3’-CCAGCCCCCTCTACCCTCA-5’，反義鏈：3’-TTGGCCAGTTCCGTGTGAAG-5’；rs25489順義鏈：3’-GAAGGATCTTCCC CAGCTCCTC-5’，反義鏈：3’-GTTGACCCCC AGTGGTGCTAAC-5’；rs25487順義鏈：3’-TTGCCCAGCACAGGATAAGGA-5’，反義鏈：3’-TGCCAACACCCCCAAGTACAG-5’；rs3547順義鏈：3’-ACGGAGGTGCCCAGCATTCTT-5’，反義鏈：3’-TCGTCCCCGATGGATCTACAGT-5’。

反應(yīng)體系(10 μL)包含1×GC BufferⅠ(TAKARA)，3.0 mm，Mg2+，0.3 mmol/L dNTP，1 U HotStarTaq polymerase(Qiagen Inc.)，1 μL樣本DNA和1 μL多重PCR引物。多重PCR各引物濃度分別為rs25487F/R 1 μmol/L、rs3547F/R 1.5 μmol/L、rs25489F/R 2 μmol/L、rs1799782F/R 1 μmol/L。

PCR循環(huán)程序：95 ℃預(yù)變性2 min；11個(gè)循環(huán)(94 ℃變性20 s，64.5 ℃退火40 s，72 ℃延伸 90 s)；24個(gè)循環(huán)(94 ℃變性20 s，59 ℃退火30 s，72 ℃延伸1.5 min)；72 ℃延伸 2 min；4 ℃終延伸。

PCR產(chǎn)物純化：在10 μL PCR產(chǎn)物中加入1 U SAP酶和1 U Exonuclease I酶，37 ℃溫浴1 h，然后75 ℃滅活15 min。

1.3.2 SNaPshot多重單堿基延伸反應(yīng)檢測(cè)

延伸引物包括：r s 2 5 4 8 7反義鏈：3’-C G T C G G C G G C T G C C C T C-5’，3’-rs3547反義鏈：3’-TTTTTTTTTCTATGG GGTGGTGCCGCA-5’，rs25489順義鏈：3’-TTTTTT TTTTTTTGGGGCTGTGGCTGGGGTA-5’，rs1799782反義鏈：3’-TTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGGGGGCTC TCTTCTTCAGC-5’。

延伸反應(yīng)：延伸反應(yīng)體系(10 μL)包括5 μL SNaPshot Multiplex試劑盒(購(gòu)自美國(guó)ABI公司)，2 μL 純化后多重PCR產(chǎn)物，1 μL延伸引物混合物，2 μL超純水。延伸引物混合物中各條延伸引物的濃度分別為：rs3547反義鏈0.8 μmol/L、rs25487SR 0.8 μmol/L、rs25489SF 0.8 μmol/L、rs1799782SR 1.6 μmol/L。

PCR循環(huán)程序：96 ℃預(yù)變性1 min；28 個(gè)循環(huán)(96 ℃變性10 s，50 ℃退火5 s，60 ℃延伸30 s)；4 ℃延伸。

延伸產(chǎn)物純化：在10 μL延伸產(chǎn)物中加入1 U SAP酶，37 ℃溫浴1 h，然后75 ℃滅活15 min。

延伸產(chǎn)物上3130XL(購(gòu)自美國(guó)ABI公司)測(cè)序儀：取0.5 μL純化后的延伸產(chǎn)物，與0.5 μL Liz120 SIZE STANDARD，9 μL Hi-Di混勻，95 ℃變性5 min后上ABI3130XL測(cè)序儀檢測(cè)。

ABI3130XL測(cè)序儀上收集的原始數(shù)據(jù)用GeneMapper 4.0(美國(guó)Applied Biosystems公司)來分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，喉癌患者組中XRCC1的4個(gè)位點(diǎn)基因型與對(duì)照組位點(diǎn)基因型采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并計(jì)算病例組中XRCC1位點(diǎn)基因型(突變型+雜合型)與對(duì)照組基因型比值比(OR)及其95%可信區(qū)間(95%CI)。

2 結(jié) 果

2.1 漢族、維吾爾族、哈薩克族患者3個(gè)民族XRCC1多位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性與喉癌易感性關(guān)聯(lián)分析

喉癌患者組中XRCC1 Arg280His(rs25489) C/T(雜合型)及T/T(突變型)基因型的比例與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05，表1)。喉癌患者組中XRCC1的其余3個(gè)位點(diǎn)Gln632Gln (rs3547) C/T(雜合型)及T/T(突變型)基因型、Arg399Gln(rs25487)C/T(雜合型)及T/T(突變型)基因型、Arg194Trp(rs1799782)G/A(雜合型)及A/A (突變型)基因型的比例明顯高于對(duì)照組(P＜0.01)。其中喉癌患者組Gln632Gln(rs3547) C/T(雜合型)及T/T(突變型)基因型、Arg399Gln(rs25487)C/T(雜合型)及T/T(突變型)基因型、Arg194Trp(rs1799782)G/A(雜合型)及A/A (突變型)基因型比例顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，攜帶(rs3547)C/T及T/T基因型、(rs25487)C/T及T/T基因型、(rs1799782)G/A及A/A基因型個(gè)體較攜帶XRCC1(rs3547)C/C基因型、(rs25487)C/C基因型、(rs1799782)G/G基因型的個(gè)體患喉鱗狀細(xì)胞癌的風(fēng)險(xiǎn)分別升高了0.96、1.74和1.39倍，1.47、1.32和0.77倍，1.49、1.51和1.56倍(表2～4)。

表1 XRCC1位點(diǎn)rs25489單核苷酸多態(tài)性與喉癌易感性關(guān)聯(lián)分析Tab. 1 Site rs25489 XRCC1 SNP associated with laryngeal cancer susceptibility analysis

表2 XRCC1位點(diǎn)rs25487單核苷酸多態(tài)性與喉癌易感性關(guān)聯(lián)分析Tab. 2 Site rs25487 XRCC1 SNP associated with laryngeal cancer susceptibility analysis

2.2 3個(gè)民族的XRCC1多個(gè)SNP位點(diǎn)的基因的單倍型分析

對(duì)3個(gè)民族的XRCC1多個(gè)SNP位點(diǎn)做了基因LD圖，從圖中可以看到，XRCC1在漢族和哈族中，rs25487、rs25489、rs1799782存在連鎖，在維族中，rs3547、rs25487、rs25489存在連鎖。單倍型分析只針對(duì)連鎖的位點(diǎn)有意義，所以，進(jìn)行了上述連鎖區(qū)域的單倍型分析，其中推導(dǎo)單倍型使用了Phase，進(jìn)行Logistic回歸分析使用了SNPStats軟件，以頻率最高的類型為參照。單倍型分析并未找到頻率較高的單倍型同時(shí)有陽(yáng)性結(jié)果。得到的結(jié)果中，漢族在XRCC1 SNP位點(diǎn)表現(xiàn)出一定陽(yáng)性，而維族和哈族均沒有，也說明了3個(gè)民族的差異性。(圖1)。該結(jié)果是使用SPSS進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。從結(jié)果可以看出，漢族和維族或哈族的差異非常大，XRCC1多位點(diǎn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，在進(jìn)行病例對(duì)照分析時(shí)，需要將3個(gè)民族分開進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，以避免民族之間本身就存在的頻率差異被誤認(rèn)為是病例組和對(duì)照組之間的差異(所以，3個(gè)民族患者組之間的比較和總體對(duì)照組和患者組之間的比較是沒有意義的，即使有陽(yáng)性結(jié)果，也極有可能是民族之間本身存在的頻率差異導(dǎo)致)。其次，對(duì)3個(gè)民族，按對(duì)照和患者分組的2種情況下性別和年齡的分布是否一致進(jìn)行了檢驗(yàn)，其中，性別是使用SPSS 13.0進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，年齡是采用當(dāng)其為連續(xù)的數(shù)值變量使用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。在性別差異檢驗(yàn)的結(jié)果中，除了哈薩克族病例組和對(duì)照組之間比較接近，漢族和維族各自的病例組和對(duì)照組之間差異都比較大(P=0.081和P=0.003)；在年齡差異的結(jié)果中，3個(gè)民族各自的病例組和對(duì)照組之間的差異非常大(P＜0.05)。由此可見，分組之間性別和年齡不是很配對(duì)，可在后續(xù)的分析中進(jìn)行性別和年齡的校正，否則如果性別和年齡本身對(duì)喉癌有一定影響，如不進(jìn)行校正，檢測(cè)到的陽(yáng)性結(jié)果可能只是由于病例組和對(duì)照組之間性別年齡不匹配導(dǎo)致，會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。

表3 XRCC1位點(diǎn)rs3547單核苷酸多態(tài)性與喉癌易感性關(guān)聯(lián)分析Tab. 3 Site rs3547 XRCC1 SNP associated with laryngeal cancer susceptibility analysis

表4 XRCC1位點(diǎn)rs1799782單核苷酸多態(tài)性與喉癌易感性關(guān)聯(lián)分析Tab. 4 Site rs1799782 XRCC1 SNP associated with laryngeal cancer susceptibility analysis

2.3 3個(gè)民族的XRCC1多個(gè)SNP位點(diǎn)膠電泳及單位點(diǎn)分型峰形圖分析

用SNaPshot方法對(duì)XRCC1 rs25487、rs25489、rs1799782和rs3547位點(diǎn)進(jìn)行SNP分型試驗(yàn)可得出XRCC1的3個(gè)位點(diǎn)rs3547 C/T(雜合型)及T/T(突變型)基因型、rs25487 C/T(雜合型)及T/T(突變型)基因型、rs1799782 G/A(雜合型)及A/ A(突變型)基因型所代表的峰值明顯高于野生型(P＜0.05)，rs25489 C/T基因型與C/C基因型差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述XRCC1多個(gè)SNP位點(diǎn)膠電泳及單位點(diǎn)分形峰型與分別對(duì)各民族修復(fù)基因多位點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果基本一致(圖2)。

圖2 位點(diǎn)膠電泳及單位點(diǎn)分型峰形圖Fig. 2 Gel electrophoresis and unit type dotted peak shape

3 討 論

目前，喉癌發(fā)病的確切原因尚不十分清楚，但吸煙及飲酒為喉癌發(fā)病的重要危險(xiǎn)因素這一結(jié)論已得到普遍認(rèn)可［15-16］。但處于相同或相似的環(huán)境條件下的吸煙與飲酒人群，卻只有極少數(shù)的危險(xiǎn)因素暴露者發(fā)生喉癌。這一事實(shí)提示，除了上述危險(xiǎn)因素的影響外，其它因素可能對(duì)喉癌也起著重要的作用?；蚺c環(huán)境的共同作用可能才是喉癌以及其它腫瘤的發(fā)病原因。

近幾年來隨著分子遺傳學(xué)水平的不斷發(fā)展，對(duì)于腫瘤發(fā)病的分子遺傳機(jī)制以及基因-環(huán)境的交互作用成為研究的一個(gè)熱點(diǎn)?；蛲蛔兪悄[瘤發(fā)生、發(fā)展的起始階段，基因的變異可致基因功能表達(dá)異常，如DNA修復(fù)基因的突變就可能會(huì)導(dǎo)致DNA修復(fù)能力的改變，從而在不同環(huán)境危險(xiǎn)因素作用下導(dǎo)致個(gè)體間修復(fù)能力的差異, 并進(jìn)一步導(dǎo)致機(jī)體DNA修復(fù)基因的突變。近年來通過對(duì)基因多態(tài)性的研究，可以了解到基因多態(tài)性在不同人群中的分布，從而幫助我們從遺傳學(xué)角度認(rèn)識(shí)腫瘤在不同地域、種族中的發(fā)病率，從而為進(jìn)一步闡明腫瘤的發(fā)病機(jī)制，為預(yù)防、治療腫瘤提供科學(xué)依據(jù)。

腫瘤是環(huán)境因素與遺傳因素互相作用導(dǎo)致的一類疾病，是細(xì)胞中多種基因突變累積的結(jié)果，這些基因突變主要發(fā)生在3類基因，即癌基因、抑癌基因和DNA錯(cuò)配修復(fù)基因［17-18］。其中絕大多數(shù)腫瘤的基因都是體細(xì)胞變異，包括突變、擴(kuò)增、重排、缺失或甲基化狀態(tài)的改變［19］。一般而言，生物體基因突變的發(fā)生有兩種原因：一是外源化學(xué)物質(zhì)的長(zhǎng)期低濃度刺激致使機(jī)體的遺傳物質(zhì)發(fā)生了不可逆的變異；另一種原因就是生物群體中不同個(gè)體的遺傳背景的差異，即基因多態(tài)性的存在?；蚨鄳B(tài)性是指人群染色體中同一個(gè)基因座位上的≥2個(gè)的等位基因，其在群體中的分布頻率至少為1%，即認(rèn)為該基因座位具有多態(tài)性［20］?；蚨鄳B(tài)性可引起編碼氨基酸的改變，進(jìn)而可使其表達(dá)的蛋白質(zhì)(酶)數(shù)量或活性發(fā)生改變。因此，在相同或相似環(huán)境條件下，由于基因多態(tài)性的存在可致不同個(gè)體對(duì)化學(xué)物質(zhì)的反應(yīng)能力產(chǎn)生差異。

XRCC1是第一個(gè)被分離出的影響細(xì)胞對(duì)電離輻射敏感性的哺乳動(dòng)物基因，是一種重要的DNA修復(fù)基因，在DNA polB聚合酶、連接酶(Lig Ⅲ)、聚磷酸腺苷-核糖聚合酶(PARP)等的DNA損傷修復(fù)過程中起一個(gè)支架作用，共同參與BER和單鏈斷裂修復(fù)［21］。它廣泛參與DNA的損傷修復(fù)［22］。本研究主要探討DNA修復(fù)基因XRCC1多位點(diǎn)SNP與喉癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。

許多文獻(xiàn)顯示XRCC1多位點(diǎn)基因多態(tài)性與肺、胃、肝癌、甲狀腺癌等腫瘤發(fā)病相關(guān)聯(lián)。余紅平等［23］研究表明：DNA堿基切除修復(fù)基因XRCC1 Gln399Gln突變純合子基因型者患肺癌風(fēng)險(xiǎn)增加。衛(wèi)國(guó)榮等［24］對(duì)XRCC1密碼子194多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系進(jìn)行研究，結(jié)果顯示：DNA修復(fù)基因XRCC1密碼子194的多態(tài)性可能與肺癌的易感性有關(guān)，且在吸煙者中，Trp/Trp基因型可使肺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著提高，提示XRCC1可能通過遺傳因素及遺傳因素與環(huán)境致癌因素的交互作用影響肺癌的危險(xiǎn)性。Kowalski等［25］在研究XRCC1多位點(diǎn)的SNP與頭頸部鱗狀細(xì)胞癌結(jié)果表明：XRCC1位點(diǎn)Arg194Trp、Arg399Arg突變作為頭頸部鱗狀細(xì)胞癌發(fā)病的一個(gè)高發(fā)危險(xiǎn)因素。Audun等［26］研究表明XRCC1中Arg194Trp、Arg280His和Arg399Gln共3個(gè)位點(diǎn)突變引起蛋白與BRCT1結(jié)構(gòu)域改變從而引發(fā)癌癥。同時(shí)研究XRCC1中Gln632Gln(rs3547)、Arg399Gln(rs25487)、Arg280His(rs25489)、Arg194Trp(rs1799782)4個(gè)位點(diǎn)與喉癌易感性的關(guān)系在國(guó)內(nèi)、外還未有相關(guān)報(bào)道。因此，該文研究了DNA修復(fù)基因XRCC1上述位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與新疆不同民族喉癌易感性的關(guān)系。

本研究結(jié)果顯示，喉癌患者組中XRCC1基因的3個(gè)位點(diǎn)Gln632Gln(rs3547)C/T(雜合型)及T/T(突變型)基因型、Arg399Gln(rs25487) C/T(雜合型)及T/T(突變型)基因型、Arg194Trp(rs1799782)G/A(雜合型)及A/A(突變型)基因型的比例明顯高于對(duì)照組(P＜0.01)，這一結(jié)果與Kowalski等［25］在研究XRCC1基因多位點(diǎn)Arg194Trp、Arg399Arg多態(tài)性與頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中所得出的結(jié)果基本一致。且與Audun等［26］研究X R C C 1多位點(diǎn)A rg 1 9 4 Tr p、Arg399Gln突變所致癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的結(jié)果一致，但本研究XRCC1 Arg280His位點(diǎn)突變與喉癌發(fā)病的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。與Audun等［26］研究XRCC1位點(diǎn)Arg280His突變?yōu)榘┌Y的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)所得出的結(jié)果不相符，此陰性結(jié)果可能與本研究患者數(shù)少有關(guān)。

本研究中3個(gè)民族患者組Gln632Gln(rs3547) C/T(雜合型)及T/T(突變型)基因型、Arg399Gln(rs25487)C/T(雜合型)及T/T(突變型)基因型、Arg194Trp(rs1799782)G/A (雜合型)及A/A(突變型)基因型比例顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，攜帶(rs3547)C/T及T/T基因型、(rs25487)C/T及T/T基因型、(rs1799782)G/A及A/A基因型個(gè)體較攜帶XRCC1(rs3547)C/C基因型、(rs25487)C/C基因型、(rs1799782)G/G基因型的個(gè)體患喉鱗狀細(xì)胞癌的風(fēng)險(xiǎn)升高了分別為0.96、1.74和1.39倍，1.47、1.32和0.77倍，1.49、1.51和1.56倍。這可能是由于XRCC1上述位點(diǎn)位于BRCT1結(jié)構(gòu)域內(nèi)，BRCT是DNA修復(fù)和細(xì)胞周期調(diào)控蛋白中蛋白-蛋白結(jié)合模塊，BRCT結(jié)構(gòu)域在XRCC1中央部分與多聚(ADP-核糖)聚合酶的兩個(gè)區(qū)域相互作用，多聚(ADP-核糖)聚合酶是DNA鏈斷裂修復(fù)末端連接所需的多核苷酸激酶。因此，XRCC1多位點(diǎn)多態(tài)性可能改變BRCT1結(jié)構(gòu)構(gòu)象，其編碼蛋白活性出現(xiàn)改變，從而導(dǎo)致修復(fù)環(huán)境因子致DNA損傷的能力降低，因而導(dǎo)致喉癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增高。

喉癌的發(fā)病可能與我們未曾研究的多基因多位點(diǎn)的SNP有關(guān)，Bogela等［27］已對(duì)DNA修復(fù)基因XRCC1前期的小樣本的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示在基因型、基因型頻率等方面漢族與新疆本地民族維吾爾族和哈薩克族有著很大差異。故準(zhǔn)備下一步采用高通量全組基因測(cè)序法對(duì)罕見基因及位點(diǎn)測(cè)定來進(jìn)一步研究與喉癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。由于3個(gè)民族長(zhǎng)期的隔離有各自的SNP頻率和復(fù)雜疾病致病因素，所以分析時(shí)應(yīng)該分開進(jìn)行，且在研究中患者組中XRCC1 Arg280His(rs25489) C/T(雜合型)及T/T(突變型)基因型的比例與對(duì)照組與喉癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩者關(guān)系可能需增大樣本量進(jìn)一步研究。本研究患者數(shù)較少，無法通過這次的結(jié)果來做出結(jié)論，待患者數(shù)增加需要進(jìn)一步研究。

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Studying on BER pathways of XRCC1 site SNP and laryngeal cancer susceptibility of different nations in Xinjiang

WANG Song1, HU Bing2, YONG Jun3, FENG Juan3, WANG Lingling3, AYIHENG Qukuerhan1(Department of Otolaryngology, The First Affiliated Hospital, Xinjiang Medical University, Urumqi Xinjiang 830054, China)

AYIHENG Qukuerhan E-mail: ayhen979@sina.com

Background and purpose:Major repair genes that affect the tumor genetic susceptibility exists in repair pathways base excision repair (BER) approach, X-ray repair cross complementing group 1(XRCC1) gene, respectively is the core of BER pathway. At home and abroad in recent years, has carried out many studies of genetic polymorphism and laryngeal cancer susceptibility. Researching on the base excision repair (BER) pathway of DNA repair gene XRCC1 bases mononuclear nucleotide polymorphism and the relationship between different ethnic groups laryngeal cancer susceptibility in xinjiang.Methods:A case-control study was performed on 58 patient with laryngealsquamous cell carcinoma and 120 random healthy control group. Multiplex SNaPshot technic was used to detect DNA base excision repair gene XRCC1 Gln632Gln (rs3547), Arg399Gln (rs25487), Arg280His (rs25489), Arg194Trp (rs1799782) loci single nucleotide polymorphism distribution in the case group and normal control group.Results:Three sites of the rest of the cases of XRCC1 Gln632Gln (rs3547) C/T (hybrid) and T/T (mutant) genotype, Arg399Gln (rs25487) C/T (hybrid) and T/T (mutant) genotype, Arg194Trp (rs1799782) G/A (hybrid) and A/A (mutant) genotype is notably higher than that of control group (P＜0.01). Gln632Gln (rs3547) C/T (hybrid) and T/T (mutant) genotype, Arg399Gln (rs25487) C/T (hybrid) and T/T (mutant) genotype, Arg194Trp (rs1799782) G/A (hybrid) and A/A (mutant) genotype ratio is signifcantly higher than control group (P＜0.05) in cases of Han,Uygur and Kazakh nations, carrying (rs3547) C/T and T/T genotype, (rs25487) C/T and T/T genotype, (rs1799782) G/A and A/A genotype individual risk of laryngeal squamous cell carcinoma are added to the 0.96, 1.74 and 1.39 times; 1.47, 1.32 and 0.77 times; 1.49, 1.51 and 1.56 times than XRCC1 (rs3547) C/C genotype, (rs25487) C/C genotype, (rs1799782) G/G genotype.Conclusion:In the 3 nations, XRCC1 Gln632Gln, Arg399Gln, Arg280His and Arg194Trp loci polymorphism may be associated with laryngeal cancer genetic and there are differences, XRCC1 Gln632Gln, Arg399Gln, Arg194Trp locus mutation will lead to an elevated risk of throat cancer. XRCC1 Arg280His locus mutation has no statistically signifcant difference with the onset of throat cancer, may have nothing to do with the onset of laryngeal cancer on the site of mutation.

Base excision repair pathways; X-ray repair cross complementing group 1; SNP; Laryngeal cancer; Susceptibility

10.3969/j.issn.1007-3969.2015.02.007

R739.65

A

1007-3639(2015)02-0119-10

2014-04-29

2014-07-05）

新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2013211A098)。

阿依恒?曲庫(kù)爾汗 E-mail:ayhen979@sina.com