劉琳琳,方斌,李翔,葉國軍,李國明

2013年武漢市呼吸道病毒感染病原譜分析研究

劉琳琳,方斌,李翔,葉國軍,李國明

目的了解2013年武漢市呼吸道疾病病毒性病原譜構(gòu)成。方法采用實時熒光定量PCR(Real-Time PCR)方法對200份流感樣病例標(biāo)本進(jìn)行16種病毒性病原體的檢測。結(jié)果共檢測出13種病毒陽性,總陽性率為43%;單病毒感染陽性率排名前3位的為鼻病毒(8.5%)、腺病毒(7.0%)、呼吸道合胞病毒A(4.5%);混合感染的比例占陽性病例的19.77%;性別對病毒感染陽性率并無明顯影響;5歲以下嬰幼兒是呼吸道病毒的主要感染人群,0～歲和1～5歲年齡組病毒陽性率較高,分別為40.6%和61.8%,60～歲年齡組病毒陽性率最低,為25.0%,且不同年齡組感染的優(yōu)勢病原有所差別;不同病毒感染季節(jié)性不同,有的病毒表現(xiàn)出嚴(yán)格的季節(jié)性,但總體而言冬春季病毒感染率較高。結(jié)論2013年武漢市上呼吸道感染的病原體以病毒為主,尤其在低齡幼兒組,鼻病毒、腺病毒及呼吸道合胞病毒感染為其上呼吸道感染的主要病原體。

呼吸道疾病;病毒性;病原譜

呼吸道病毒是侵犯呼吸系統(tǒng)、誘發(fā)呼吸道局部病變及引起呼吸道組織器官病變的一種病毒[1]。研究顯示,呼吸道病毒為人類發(fā)病與死亡的主要危險因素之一,已經(jīng)引起了廣泛的關(guān)注[2-3]。流感樣病例(influenza like illness,ILI),即發(fā)熱(體溫≥38℃),伴咳嗽或咽痛之一者。呼吸道病毒性疾病的表現(xiàn)主要以類流感樣癥狀為主。為了解武漢市呼吸道病毒性疾病感染的病原譜,本研究對2013年武漢市兩家流感監(jiān)測哨點醫(yī)院的病例標(biāo)本進(jìn)行了16種病毒性病原體的檢測。

1 材料與方法

1.1 實驗對象

本研究選擇武漢市2所國家級流感監(jiān)測哨點醫(yī)院中的流感樣病例標(biāo)本作為實驗對象,共收集發(fā)病3天內(nèi)未使用過抗病毒藥物的流感樣病例標(biāo)本200份。

1.2 實驗方法

采用實時熒光定量PCR方法(Real-Time PCR)對標(biāo)本進(jìn)行檢測,共檢測16種常見呼吸道病毒,即流感病毒A(IVA)、流感病毒B(IVB)、人副流感病毒1(HPIV1)、人副流感病毒2(HPIV2)、人副流感病毒3(HPIV3)、人副流感病毒4(HPIV4)、鼻病毒(RHV)、人腺病毒(h Adv)、呼吸道合胞病毒A(RSVA)、呼吸道合胞病毒B(RSVB)、偏肺病毒(h MPV)、冠狀病毒OC43型、NL63型、229E型及HKU1型(coronavirus OC43、NL63、229E、HKU1)、人博卡病毒(Hbov)。實驗所需引物探針序列由中國疾控中心傳染病監(jiān)測技術(shù)平臺項目提供。

1.3 試劑與儀器

選用AB life公司Real-Time PCR檢測試劑盒,儀器為ABI公司熒光定量PCR儀7300型。

1.4 統(tǒng)計分析

利用Excel 2007建立數(shù)據(jù)庫,采用SPSS 11.0版本對監(jiān)測數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析,繪制流行病學(xué)曲線圖及表格。

2 結(jié)果

2.1 基本情況

納入本次研究的200例ILI病例的年齡分布中,0～歲嬰兒32例(占16%),1～5歲幼兒68例(占34%),18歲以上中青年96例(占48%),60歲以上老年人4例(占2%)。

2.2 多病原檢測總體結(jié)果

用PCR方法對200例咽拭子樣本進(jìn)行16種病毒的病原體檢測,共檢出13種病毒陽性,共計陽性標(biāo)本86例,病毒陽性檢出率為43.00%;其中混合感染17例,占陽性結(jié)果的19.77%。陰性樣本114例,占總樣本量57.00%。

2.3 各呼吸道病毒感染比例

檢出的13種病原體中,單一病毒感染病例的檢出率由高到低排列依次為:RHV、h Adv、RSVA、IVA、RSVB、IVB、Hbov、OC43、HPIV2、HPIV3、HPIV4、h MPV及NL63;而HPIV、229E及HKU1型未被檢出。見圖1。共檢測出17例病毒混合感染病例(占總體的8.50%,占陽性病例的19.77%),全部為雙重感染。混合感染以RHV、RSVA、h Adv聯(lián)合其他病毒為主。見表1。

表1 ILI標(biāo)本多病毒混合感染情況 n,%

2.4 不同性別病毒感染情況

200例ILI咽拭子標(biāo)本患者中,男性101例,女性99例,男女比例1.02∶1。86份病毒陽性標(biāo)本中,男性病毒陽性標(biāo)本39份,男性病毒陽性檢出率為38.6%(39/101),女性病毒陽性標(biāo)本47例;女性病毒陽性檢出率為47.5%(47/99)。性別陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2＝1.602,P＝0.253),男性和女性總體病毒感染率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

圖1 單一病毒感染陽性率分布圖

2.5 不同人群病毒檢出陽性率

本實驗檢測顯示,5歲以下嬰幼兒是呼吸道病毒的主要感染人群,0～歲和1～5歲年齡組病毒陽性率較高,分別為40.6%(13/32)和61.8%(42/68),60～歲年齡組病毒陽性率最低,為25.0%(1/4)。不同年齡組的陽性檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2＝15.779,P＝0.001),0～歲組共檢測出6種病毒,未檢出h MPV、NL63型、各型流感病毒和副流感病毒;1～5歲組檢出病毒種類最多,共檢測出13種,其中HPIV3 和HPIV4型僅在混合感染病例標(biāo)本中檢出;18～歲組共檢測出10種病毒,未檢出hBov、NL63型和RSVB;60歲以上組僅檢測出h Adv 1種,其他病毒未檢出。hBov陽性標(biāo)本全部來自5歲以下的嬰幼兒,RHV陽性標(biāo)本主要集中在0～歲嬰兒組,HAdv陽性較多出現(xiàn)在1～5歲幼兒組,各型流感病毒和副流感病毒全部分布在1～5歲兒童和18～歲中青年人群。

2.6 不同人群感染的優(yōu)勢病原略有不同

0～歲組以RHV、RSVA多見;1～5歲組以h Adv、RHV、RSVB、IVA多見;18～組以RHV、RSVA、IVA較為多見。見表2。

表2 不同年齡組病毒感染陽性率比較 %

2.7 不同呼吸道病毒感染的時間分布

結(jié)合單一病毒感染病例和混合感染病例的病毒感染情況,IVA主要集中出現(xiàn)在秋冬季節(jié)9－12月,2月、3月和6月偶有出現(xiàn),出現(xiàn)的多為H1N1pam。IVB主要出現(xiàn)在6月份和11－12月;冠狀病毒感染主要集中在夏秋季7－11月;hBov和h MPV感染均表現(xiàn)出嚴(yán)格的季節(jié)性,hBov出現(xiàn)在夏季6－8月份,h MPV出現(xiàn)在冬春季1－3月;RSV在1－3月和7－ 11月均可檢出,但其高峰在秋冬季節(jié)9－11月;RHV 和h Adv幾乎全年都可檢測到,沒有明顯的季節(jié)性。見表3。

表3 不同病毒的不同月份感染情況比較 n

3 討論

呼吸道感染是嚴(yán)重威脅人類健康的疾病之一[4],尤其是對于5歲以下兒童,根據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計,每年全球約有100萬5歲以下兒童死于呼吸道感染[5];我國急性下呼吸道感染也是5歲以下兒童死亡是首要原因,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于腹瀉和意外窒息等死因[6],而病毒是引起呼吸道感染的常見病原[7]。

本次研究采用Real-Time PCR方法對具備典型呼吸道感染癥狀的人群進(jìn)行16種病毒病原體檢測,標(biāo)本采集時間均勻分布至全年,病例的年齡分布主要集中在嬰幼兒及青壯年。經(jīng)過檢測發(fā)現(xiàn),2013年武漢市人群呼吸道感染最易感染年齡段為1～5歲幼兒組,這與文獻(xiàn)報道一致[8]。分析其原因主要有以下2個方面:①1歲以下的嬰幼兒可通過母乳從母體獲得被動的抗體,抵抗病毒感染;5歲以后,隨著年齡的增長,其自身機(jī)體免疫功能趨于完善,病毒感染率下降。而1～5歲的兒童恰好處于兩者間的過渡期,此時機(jī)體免疫力較低,極易遭受病毒感染。②此時期的兒童認(rèn)知欲望強(qiáng)烈,活動頻繁,日常易接觸具有潛在危害的傳染源,且個人衛(wèi)生意識淡薄。本研究顯示,不同人群病毒感染的病原譜有所區(qū)別,幼兒組較易受到病毒感染,且感染病毒主要為鼻病毒、呼吸道合胞病毒及腺病毒,這與文獻(xiàn)報道一致[9],并且混合感染也以這3種病毒聯(lián)合其他病毒感染陽性率較高,說明武漢市2013年上呼吸道感染病原譜前3位的病毒為鼻病毒、呼吸道合胞病毒及腺病毒;不同病毒感染季節(jié)性不同,有的病毒表現(xiàn)出嚴(yán)格的季節(jié)性,但總體而言冬春季病毒感染率較高。

通過本次研究,較為全面地揭示了2013年武漢市上呼吸道感染的病毒性病原譜,為臨床醫(yī)師用藥、疫苗宣傳接種時機(jī)和傳染性疾病防控提供了具有導(dǎo)向意義的實驗室資料,便于克服臨床濫用抗生素等現(xiàn)象,可提高診斷的準(zhǔn)確性和治療的及時性。

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The Study on Pathogen Spectrum of Respiratory VirusInfection in Wuhan City,2013

LIU Linlin,FANG Bin,LI Guoming,et al.The Center for Disease Control and Prevention of Hubei Province,Wuhan,430079,China

ObjectivesTo learn the virus pathogen spectrum of respiratory diseases in Wuhan city,2013.MethodsThe Real-Time PCR was used to detect 16 kinds of virus pathogens in 200 samples.ResultsAltogether there were 13 kinds of virus detected positive and the total positive rate was 43%.The top three highest positive rate of single virus were RHV(8.5%),h Adv(7.0%)and RSVA(4.5%).The proportion of mixed infection was 19.77%.There was no significant effect on the sex to virus infection positive rate.The main infected crowd of respiratory virus was children below 5,and the top two high positive rate were the groups of below 1 and the 1～5 groups,which was 40.6%and 61.8%respectively.The lowest positive rate was up 60 group,which was 25%.There appeared different seasonal outbreak among different virus,and some viruses showed strict seasonal distribution.However,the infection positive rate in winter and spring were higher altogether.ConclusionsThe most proportion of up-respiratory infection was virus infection in Wuhan city,2013.Especially in young children groups,the infection of RHV,h Adv and RSV were the most common pathogens.

Respiratory disease;Virus;Pathogen spectrum

R373.1

ADOI:10.3969/j.issn.1673-5625.2015.05.025

2015-03-31)(本文編輯 楊婷婷)

湖北省醫(yī)學(xué)領(lǐng)軍人才培養(yǎng)工程專項資助

湖北省疾病預(yù)防控制中心病原微生物檢測中心,湖北武漢,430079

李國明