陳 燕 張麗華

濕疹是一種由各種內(nèi)外因素引起的過(guò)敏性炎癥性皮膚病，臨床上以皮膚丘疹、水皰、滲出、糜爛為主，呈多形性改變，易反復(fù)發(fā)病。其組織學(xué)特征為表皮細(xì)胞間水腫，伴有不同程度的棘層肥厚及淺表血管周?chē)馨徒M織細(xì)胞浸潤(rùn)［1］。癥見(jiàn)自覺(jué)性皮膚瘙癢，易引起睡眠紊亂，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量。目前濕疹治療主要以糖皮質(zhì)激素藥物為主，需長(zhǎng)期用藥，不良反應(yīng)較大［2］。近年來(lái)，中醫(yī)藥治療對(duì)濕疹具有相當(dāng)重要的作用，其療效顯著，不良反應(yīng)少，受到皮膚科醫(yī)生的重視［3］。

苦參(Sophora Flavescens)是豆科植物苦參的根，含苦參堿、氧化苦參堿、槐花醇、金雀花堿等多種生物堿，具有抑菌、抗炎、抗過(guò)敏、調(diào)節(jié)免疫等多種藥理作用［4-5］，主要用于治療濕疹、瘙癢癥等風(fēng)熱、濕熱之皮膚病等病癥，在治療各種以變態(tài)反應(yīng)為特征的皮膚炎癥性疾病中取得較為明顯的療效［6-7］。因其具有清熱燥濕、止癢安神的功效而歷來(lái)為中醫(yī)治療皮膚病所推崇。本實(shí)驗(yàn)主要探討苦參水提物對(duì)濕疹豚鼠皮膚炎癥的影響，并觀察皮膚腫脹度改變情況及其病理變化情況。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

純白短毛豚鼠，雄性，體重(250 ±20)g，由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(粵)2013 -0002。

1.2 儀器

電子天平，BS -600L，友聲衡器有限公司生產(chǎn);金屬打孔器(6 mm)，廣州正宏醫(yī)療器械設(shè)備有限公司。

1.3 藥品及試劑

苦參(杏林藥業(yè)有限公司，20131203);復(fù)方醋酸地塞米松乳膏(東康藥業(yè)有限公司，批號(hào):130909);2，4 -二硝基氯苯(2，4 -dinitrochlorobenzene ，DNCB)(上海試劑一廠，批號(hào)890901);丙酮(AR，大茂化學(xué)試劑廠)。

1.4 方法

1.4.1 藥物的制備 苦參水提物的制備:苦參飲片1 kg，加5 倍水，浸泡2 h，煎煮1 h，過(guò)濾，藥渣再加3 倍水煎煮30 min，過(guò)濾，合并濾液濃縮至含生藥5 g/ml。取適量含生藥5 g/ml 的苦參水提物，用純水適當(dāng)稀釋?zhuān)謩e得到含生藥2.5 g/ml，1.25 g/ml 的苦參水提物。最后經(jīng)熱壓滅菌后冷藏保存留用。致敏劑及激發(fā)溶液的制備:精密稱取DNCB 2.5 g，用丙酮溶解，并定容到50 ml 容量瓶中，制成5%的DNCB 致敏溶液。取0.5%的DNCB 致敏溶液1 ml，用丙酮稀釋并定容到50 ml 容量瓶中，制得0.1% DNCB 激發(fā)溶液。

1.4.2 豚鼠濕疹模型的建立 建立40 只豚鼠慢性濕疹模型。每只豚鼠頸背部剪毛2 cm ×2 cm 大小，5%DNCB 溶液25 μl 外涂致敏。2 周后. 每只豚鼠右耳內(nèi)側(cè)涂0.1%DNCB溶液100 μl 作為激發(fā)。每周1 次，連續(xù)4 次。

1.4.3 實(shí)驗(yàn)分組、給藥與取材 將濕疹模型豚鼠隨機(jī)分為A、B、C、D、E 五組，每組8 只。于第4 次激發(fā)72 h 后，對(duì)上述各組進(jìn)行濕疹部位皮膚涂抹給藥治療，每日2 次。A 組為模型對(duì)照組，給予生理鹽水;B 組為陽(yáng)性對(duì)照組，按說(shuō)明書(shū)給予復(fù)方醋酸地塞米松乳膏;C、D、E 組分別為苦參水提物高、中、低濃度組，含苦參生藥濃度分別為5.00 g/ml、2.50 g/ml 和1.25 g/ml，分別按2.0、1.0 和0.5 g/kg 給藥。各組均連續(xù)給藥14 天，隨后停藥1 天，用直徑6 mm 的打孔器切下雙耳等面積的同部位，精密天平稱重。

1.4.4 觀察指標(biāo)

1.4.4.1 腫脹度和腫脹抑制率 以左、右耳片重量之差作為皮膚炎癥腫脹程度評(píng)價(jià)指標(biāo)，按下式計(jì)算各組腫脹度，并求出腫脹抑制率(%)。

腫脹度= 炎癥皮膚重量(右耳)-健康皮膚重量(左耳)

抑制率(%)=(模型對(duì)照組腫脹度-藥物組腫脹度)/模型對(duì)照組腫脹度 ×100%。

1.4.4.2 病理變化 用4%多聚甲醛固定右耳組織塊，HE常規(guī)染色，制作組織病理切片，光鏡下觀察各組的病理變化。

1.4.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS 13.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組之間的比較采用方差分析，p ＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 豚鼠慢性濕疹模型

0.1%DNCB 溶液第一次激發(fā)48 小時(shí)后，右耳廓開(kāi)始出現(xiàn)腫脹，與未激發(fā)的左耳相比，有明顯區(qū)別，第二次、第三次激發(fā)后，腫脹增厚進(jìn)一步加劇，并出現(xiàn)少許脫屑;第4 次激發(fā)后右耳腫脹、增厚明顯，表面出現(xiàn)結(jié)痂，與人慢性濕疹的臨床表現(xiàn)相近似，表明造模成功。

2.2 腫脹度及腫脹抑制率

與模型對(duì)照組相比，苦參水提物高、中濃度組豚鼠皮膚腫脹度明顯減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p ＜0.05)，與陽(yáng)性對(duì)照組比較，苦參水提物高濃度組的豚鼠皮膚腫脹度明顯減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p ＜0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 苦參水提物對(duì)2，4 -二硝基氯苯所致豚鼠皮膚腫脹的影響 (±s，n=8)

表1 苦參水提物對(duì)2，4 -二硝基氯苯所致豚鼠皮膚腫脹的影響 (±s，n=8)

注:各組與模型對(duì)照組比較，1)p ＜0. 05;與陽(yáng)性對(duì)照組比較，2)p ＜0. 05

組別 藥物 腫脹度/mg 抑制率/%模型對(duì)照組(A) 生理鹽水45.82 ±9.47 -陽(yáng)性對(duì)照組(B) 復(fù)方醋酸地塞米松乳膏 28.46 ±3.281) 37.89高濃度組(C) 苦參水提物高濃度組(5.00 g/ml) 19.92 ±4.201)2) 56.52中濃度組(D) 苦參水提物高濃度組(2.50 g/ml) 27.33 ±5.171) 40.35低濃度組(E) 苦參水提物高濃度組(1.25 g/ml)35.15 ±7.33 23.29

2.3 病理切片觀察結(jié)果

模型對(duì)照組:組織被覆復(fù)鱗狀上皮，表面可見(jiàn)厚層角化物，上皮表層角化不全或角化過(guò)度，顆粒層、棘層增厚，真皮水腫伴炎細(xì)胞浸潤(rùn)，符合皮膚濕疹改變，表明濕疹模型造模成功;高濃度組、中濃度組及陽(yáng)性對(duì)照組病理切片可見(jiàn):真皮水腫消退，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，尤其是高濃度組真皮內(nèi)炎癥改善最明顯(p ＜0. 05);與模型對(duì)照組相比，低濃度組真皮水腫及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)改善不明顯(p ＞0. 05)。

3 討論

治療濕疹目前常用的藥物有皮質(zhì)類(lèi)固醇激素、組胺拮抗類(lèi)、鈣劑、維生素等，它們控制濕疹癥狀效果良好，但停藥后易復(fù)發(fā)，且不良反應(yīng)較多?？鄥⒓捌淇偵飰A治療急性、亞急性濕疹用藥安全，無(wú)抗組胺藥物的嗜睡及皮質(zhì)激素的不良反應(yīng)，具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景［4］?？鄥⑿晕犊?、寒，歸心、肝、胃、大腸、膀胱經(jīng)，具有清熱燥濕、祛風(fēng)殺蟲(chóng)止癢之功效，歷來(lái)為中醫(yī)治療皮膚病所推崇。其有效成分苦參堿和氧化苦參堿，易溶于水，是苦參水提物的主要成分，具有抗炎作用，可降低過(guò)敏介質(zhì)的釋放，具有免疫抑制作用［8-9］，還能殺滅和抑制體表多種細(xì)菌和真菌生長(zhǎng)［10］，還可誘導(dǎo)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞SM-106 凋亡［11］，具有抗腫瘤作用，與順鉑聯(lián)合使用，在增加抑瘤作用的同時(shí)，可適度減少順鉑的副作用［12］，肝癌肝動(dòng)脈化療栓塞后使用苦參素能明顯改善患者肝功能及免疫功能［13］，故現(xiàn)在臨床中亦用于腫瘤、惡性胸腔積液［14-15］等。

現(xiàn)階段研究關(guān)于濕疹的報(bào)道卻多見(jiàn)于療效報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)利用經(jīng)典的豚鼠濕疹模型對(duì)苦參水提物抗?jié)裾钏幚碜饔眠M(jìn)行了評(píng)價(jià)。與模型對(duì)照組相比，苦參水提物高、中濃度組豚鼠皮膚腫脹度明顯減輕(p ＜0.05)，且真皮水腫和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況明顯改善(p ＜0.05)，與陽(yáng)性對(duì)照組比較，苦參水提物高濃度組的豚鼠皮膚腫脹度、真皮水腫和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況亦明顯減輕(p ＜0.05)，其效果優(yōu)于復(fù)方醋酸地塞米松乳膏。因此，苦參水提物對(duì)豚鼠濕疹模型有明顯的改善作用，值得進(jìn)一步深入研究，為以后開(kāi)發(fā)采用中藥苦參治療濕疹的外用制劑提供依據(jù)。

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