張躍駿，李靜，李飛翔，毛愛國，陳方良，韋云芳，汪斌，唐樹生，萬九生

（公安部昆明警犬基地云南昆明650204）

Zhang Yuejun,Li Jing,Li Feixiang,Mao Aiguo,Chen Fangliang,Wei Yunfang,Wang Bin, Tang Shusheng*,Wan Jiusheng**

（Kunming police dog base,Ministry of public security,Kunming Yunnan 650204,）

外源激素誘導(dǎo)母犬同期發(fā)情和排卵試驗(yàn)

張躍駿，李靜，李飛翔，毛愛國，陳方良，韋云芳，汪斌，唐樹生*，萬九生**

（公安部昆明警犬基地云南昆明650204）

為取得良好的同期發(fā)情效果和排卵率，采用PMSG和HCG激素聯(lián)合使用誘導(dǎo)母犬發(fā)情和排卵。采用外部觀法和公犬試情的發(fā)情鑒定方法，觀察PMSG和HCG對(duì)犬誘導(dǎo)發(fā)情的影響，結(jié)果：PMSG連用5 d的Ⅱ?qū)嶒?yàn)組和連用7 d的Ⅲ實(shí)驗(yàn)組均表現(xiàn)出100%的發(fā)情率，并且均高于連用3 d的Ⅰ試驗(yàn)組的發(fā)情率（40%）和空白對(duì)照組的發(fā)情率（0%）。同時(shí)，利用外科手術(shù)的方法觀察發(fā)情母犬排卵情況，結(jié)果：Ⅴ組和Ⅵ組2個(gè)實(shí)驗(yàn)組均獲得了100%發(fā)情率，發(fā)情母犬分別獲得55%和75%的排卵率，且排卵率兩者差異顯著（P＜0．05）。試驗(yàn)證明外源使用PMSG和HCG可以有效誘導(dǎo)乏情期母犬同期發(fā)情和排卵。

工作犬；外源激素；同期發(fā)情；誘導(dǎo)排卵

Zhang Yuejun,Li Jing,Li Feixiang,Mao Aiguo,Chen Fangliang,Wei Yunfang,Wang Bin, Tang Shusheng*,Wan Jiusheng**

（Kunming police dog base,Ministry of public security,Kunming Yunnan 650204,）

近年來，隨著中國經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展水平的不斷提高，對(duì)寵物犬、工作犬需求也大幅提升，尤其是對(duì)工作犬提出了更高的質(zhì)量要求。由于犬存在特殊的生殖生理特性和繁殖規(guī)律，犬雖為多胎生動(dòng)物，但是發(fā)情周期比較長，通常在126～240 d（4～8個(gè)月，平均為6個(gè)月）[1-2]，若錯(cuò)過發(fā)情期或發(fā)情期未受孕，產(chǎn)仔數(shù)就會(huì)大大減少。試驗(yàn)借鑒在豬牛羊等大家畜領(lǐng)域應(yīng)用較為廣泛的采用PMSG+HCG外源激素處理方法，結(jié)合犬在生殖生理上的特殊性，針對(duì)本地區(qū)氣候條件下的乏情期母犬進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)情，并觀察誘導(dǎo)發(fā)情犬排卵效果，旨在建立一種適合于本地區(qū)氣候條件的、具有實(shí)踐價(jià)值的誘導(dǎo)工作犬同期發(fā)情的技術(shù)體系，以縮短工作犬的繁殖周期或?qū)崿F(xiàn)同期、統(tǒng)一配種繁殖，達(dá)到提高工作犬繁殖力，實(shí)現(xiàn)訂單式高效益工作犬繁育的目的。同時(shí)，可靠的同期發(fā)情誘導(dǎo)在犬的胚胎移植中的作用也是至關(guān)重要的。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1．1．1 試驗(yàn)動(dòng)物

選擇公安部昆明警犬基地健康母犬，包括昆明犬、馬里努阿犬2個(gè)犬種，年齡1～2歲，未經(jīng)產(chǎn)處于間情期。犬只開始試驗(yàn)時(shí)進(jìn)行集中飼養(yǎng)統(tǒng)一管理，每天飼喂2次，自由飲水，使試驗(yàn)在同一水平進(jìn)行。

1．1．2 試驗(yàn)地點(diǎn)與時(shí)間

本試驗(yàn)均在云南省昆明市盤龍區(qū)黑龍?zhí)豆膊坷ッ骶貎?nèi)完成。試驗(yàn)一：2013年8月15日至2013月9月5日；試驗(yàn)二：2013年9月10日至2013月9月30日。

1．1．3 主要試劑與藥物

孕馬血清促性腺激素(PMSG)，由寧波第二激素廠生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：130422；人絨毛膜促性腺激素（HCG），由寧波第二激素廠生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：130408。

1.2 試驗(yàn)方法

1．2．1 激素處理

試驗(yàn)一：將40只供試犬隨機(jī)分成4組，每組10只，每組均是8只昆明犬，2只馬里努阿犬。3個(gè)實(shí)驗(yàn)組，1個(gè)對(duì)照組。按表1所示方式給藥處理，觀察和統(tǒng)計(jì)犬只的發(fā)情情況。

表1 人工誘導(dǎo)發(fā)情藥物程序篩選

試驗(yàn)二：將40只供試犬隨機(jī)分成2組，每組20只，每組均是18只昆明犬，2只馬里努阿犬。按表2所示方式給藥處理。觀察和統(tǒng)計(jì)犬只的發(fā)情情況，利用手術(shù)剖腹的方法觀察適配發(fā)情犬卵泡發(fā)育和排卵情況。

表2 人工誘導(dǎo)發(fā)情用藥程序優(yōu)化

1．2．2 誘導(dǎo)犬發(fā)情的鑒定方法

1.2.2.1 外陰和行為變化

發(fā)情犬的陰門水腫變大，陰門下角懸垂有小滴，陰道出現(xiàn)血樣分泌物時(shí)說明犬進(jìn)入發(fā)情前期，此時(shí)犬表現(xiàn)不安及激動(dòng)，有的母犬相互爬跨，但公犬試情不接受爬跨；當(dāng)陰唇水腫非常明顯，尾偏向一側(cè)，陰門開張，陰道分泌物由血紅色變?yōu)闊o色透明或淡黃色，此時(shí)為發(fā)情期；從發(fā)情前期至發(fā)情期母犬的陰唇橫徑急劇增大，至發(fā)情期則變得柔軟，在排卵前陰唇橫徑急劇縮小，之后再度增大。當(dāng)陰門水腫迅速消失，陰道僅有少量黏液排出，母犬表現(xiàn)安靜、松弛，對(duì)公犬的吸引作用降低為發(fā)情后期；陰門無任何腫大，外部看發(fā)情周期的任何變化為間情期。

1.2.2.2 公犬試情法

每天觀察母犬的外觀表現(xiàn)及外生殖器的變化，當(dāng)發(fā)現(xiàn)陰門流出的黏性分泌物中含有血時(shí)，用性欲旺盛的具有交配經(jīng)驗(yàn)的公犬進(jìn)行試情。每天早晨7:00和晚上19:00試情兩次。試情所用的公犬要求有交配經(jīng)驗(yàn)，已實(shí)施過輸精管切除術(shù)，性欲旺盛的公犬。母犬和公犬嬉戲，當(dāng)公犬陰莖接觸母犬外陰部時(shí)，母犬將尾巴歪向一側(cè)，接受公犬爬跨。此時(shí)期將人的手指插入母犬陰道時(shí)，母犬不表現(xiàn)抵抗，則判定為發(fā)情期。1.2.2.3排卵情況鑒定

對(duì)通過發(fā)情鑒定判斷為最適配種時(shí)間的發(fā)情母犬，采用手術(shù)剖腹的方法觀察卵泡發(fā)育情況，以“處于發(fā)情期卵巢肉眼可見多個(gè)直徑約1～10 mm大小不等的透亮卵泡分布，形狀為球形或半球形，邊界清晰，明顯突出卵巢表面，剛剛排出卵母細(xì)胞的卵泡破裂后呈血紅色，并明顯可見一凸出略外翻的小孔，繼而已排空的卵泡將由紅體發(fā)育為黃體”為標(biāo)準(zhǔn)，來判斷誘導(dǎo)發(fā)情母犬是否排卵。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用SPSS 2.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

發(fā)情率：母犬應(yīng)用藥物處理后，計(jì)算發(fā)情母犬?dāng)?shù)所占的百分比；

發(fā)情率=發(fā)情犬只數(shù)/藥物處理的犬只數(shù)× 100%；

誘導(dǎo)排卵成功率=排卵犬只數(shù)/發(fā)情犬只數(shù)× 100%；

2 結(jié)果

2.1 試驗(yàn)一：外部觀察法及試情法的測(cè)定結(jié)果

從表3可以看出，經(jīng)PMSG+HCG外源激素處理試驗(yàn)犬只誘導(dǎo)發(fā)情率均高于空白對(duì)照組，且發(fā)情犬只表現(xiàn)出了一定的發(fā)情癥狀及行為表現(xiàn)，表明該外源激素對(duì)犬只的誘導(dǎo)同情發(fā)情具有明顯作用。并且Ⅱ組和Ⅲ組處理的試驗(yàn)犬在激素處理完后的5～7 d都表現(xiàn)出100%的發(fā)情率，均高于Ⅰ組40%的發(fā)情率，說明其激素處理方案均優(yōu)于Ⅰ組。

表3 PMSG+HCG對(duì)母犬誘導(dǎo)發(fā)情的作用及效果觀察

2.2 試驗(yàn)二：外源激素誘導(dǎo)工作犬同期發(fā)情及排卵的效果觀察

按表2的方式對(duì)試驗(yàn)犬只進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)情處理，2個(gè)組別的犬只均獲得100%發(fā)情率，然后通過對(duì)發(fā)情犬只誘導(dǎo)排卵情況觀察及鑒定，Ⅴ組有55%的發(fā)情犬只成功誘導(dǎo)排卵，Ⅵ組有75%的發(fā)情犬只成功誘導(dǎo)排卵，并且Ⅵ試驗(yàn)處理組誘導(dǎo)排卵成功率顯著高于Ⅴ組排卵成功率（P＜0.05，差異顯著），詳見表4。

表4 PMSG+HCG對(duì)母犬誘導(dǎo)發(fā)情及排卵效果的觀察

3 討論與結(jié)論

犬雖是多胎動(dòng)物，但母犬非季節(jié)性單次發(fā)情，發(fā)情間隔時(shí)間長，有一個(gè)較長的乏情期，期間卵巢是處于靜止?fàn)顟B(tài)的[3]。而公犬本身不受季節(jié)的限制，只要母犬允許，任何時(shí)候都可以進(jìn)行交配[4]。母犬較長時(shí)間的乏情期就降低了母犬的受孕和繁殖幾率[5]。在犬的乏情期，對(duì)繁殖機(jī)能正常的母犬應(yīng)用外源性激素誘導(dǎo)母犬同期發(fā)情，再結(jié)合外界因素如提高環(huán)境質(zhì)量、優(yōu)化飼養(yǎng)狀況等方法，可以縮短母犬的發(fā)情間隔，提高繁殖效率[6]。另外通過激素處理，誘導(dǎo)母犬在同一段相對(duì)集中時(shí)期內(nèi)集中發(fā)情并排卵[7]，這對(duì)于規(guī)?；B(yǎng)殖中的配種、產(chǎn)仔、培育、斷奶和防疫等工作的統(tǒng)一管理都具有重要意義。本試驗(yàn)旨在探討在云南昆明這一特定的地理環(huán)境和氣候條件下，利用PMSG結(jié)合HCG對(duì)昆明犬和馬里努阿犬進(jìn)行同期發(fā)情，以期為本地規(guī)?；姆敝秤N提供參考。

從試驗(yàn)一和試驗(yàn)二供試犬的外觀表現(xiàn)和試情來看,Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅴ組和Ⅵ組的母犬在1～2 d內(nèi)出現(xiàn)相對(duì)集中的發(fā)情表現(xiàn)，且發(fā)情率及同期發(fā)情率均高于相同條件下自然發(fā)情的母犬，這表明本試驗(yàn)選用的PMSG+HCG激素和使用程序能很好地誘導(dǎo)工作犬同情發(fā)情及排卵。這主要可能是因?yàn)镻MSG對(duì)母犬具有催情并促使其排出成熟卵子的作用，而HCG具有使卵泡成熟和排卵的作用，與PMSG聯(lián)合使用，從而促使母犬卵母細(xì)胞發(fā)育成熟，排出更多的成熟卵子。對(duì)照組未經(jīng)激素處理則均無發(fā)情表現(xiàn)，激素處理組的發(fā)情率與發(fā)情同期率相對(duì)于空白對(duì)照組均較高。

從試驗(yàn)開展的時(shí)間分析，試驗(yàn)一是在夏季，試驗(yàn)二是在秋季，夏季屬于犬只發(fā)情較零散的季節(jié)，而秋季屬于犬只發(fā)情較集中的季節(jié)[12]，但經(jīng)外源激素處理后2個(gè)試驗(yàn)均獲得了理想的發(fā)情率（100%），這證明本試驗(yàn)建立的使用外源激素PMSG+HCG誘導(dǎo)工作犬同期發(fā)情技術(shù)和方法是可行的，具有普遍推廣應(yīng)用的價(jià)值。

另外，從本試驗(yàn)還可以看出，誘導(dǎo)發(fā)情的工作犬，經(jīng)發(fā)情排卵鑒定和觀察，其誘導(dǎo)排卵成功率普遍較低，原因可能是由于PMSG的強(qiáng)烈刺激導(dǎo)致母犬的正常卵泡成熟期縮短，發(fā)情前期和發(fā)情期時(shí)間縮短，黃體功能不足，這與之前的報(bào)道結(jié)果吻合[8-11]。

在試驗(yàn)中，應(yīng)用外源激素對(duì)犬的發(fā)情誘導(dǎo)情況和排卵的情況進(jìn)行了研究，但未對(duì)這兩種激素應(yīng)用下犬的配種、受胎率和產(chǎn)仔率情況等進(jìn)行研究和觀察，有待今后進(jìn)一步深入研究。■（編輯：狄慧）

[1] 唐樹生,劉慶,孫琳.警用幼犬的護(hù)理與培訓(xùn)[M].北京:中國人民公安大學(xué)出版社,2012:93.

[2] 李厚達(dá).試驗(yàn)動(dòng)物學(xué)[M].2版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2003:265.

[3] 趙紅斌,胡仲明,張玉生,等.外源激素對(duì)間情期畢格犬發(fā)情及妊娠的影響[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào),1997,17(2):185-186.

[4] 李愚夫.養(yǎng)狗大全[M].南寧:廣西美術(shù)出版社,1992:54-58.

[5] Chakraborty PK,Wildt DE,Seager SWJ.Induction of estrus and ovulation in the cat and dog.[J].Vet Clin N Am Small Anim Pract 1982,(12):85-91.

[6] Kutzler MA.Induction and synchronization of estrus in dogs[J]. Theriogenology.2005:64(3):766-775.

[7] 杜曉鵬,彭建國.狗的繁殖[M].昆明:云南科技出版社,2012:184.

[8] Jones GE,Boyns AR,Bell ET,Christie DW,et al.Immunoreactive luteinizing hormone and progesterone during pregnancy and following gonadotropin administration in beagle bitches[J].Acta Endo-crinol 1973,72:573-81.

[9] Nakao T,Yukiyo A,Fukushima S,et al.Induction of estrus in bitches with exogenous gonadotropins,and pregnancy rate and blood progesterone profiles[J].Jpn J Vet Sci,1985,47:17-24.

[10] Weilenmann R,Arnold S,Dobeli M,Rusch P,et al.Estrus induction in bitches by the administration of PMSG and HCG[J].Schweiz Arch Tierheilkd,1993,135:236-41.

[11] 余道倫.Beagle犬誘導(dǎo)發(fā)情、人工授精和輸卵管胚胎移植技術(shù)的研究[D].揚(yáng)州:揚(yáng)州大學(xué),2006.

[12] 蘭康.犬發(fā)情季節(jié)性觀察[J].養(yǎng)犬,2010,4:19-21.

Synchronization and 0vulation of Induction Estrus in Bitches Treated with Exogenous Hormone

In order to obtain favorable effect of oestrus synchronization and ratio of ovulation,PMSG and HCG were used to induce oestrus and ovulation.Using the estrus diagnosis methods of external observation and teaser test.The effects of PMSG and HCG on the induction estrus of canine were studied.The result showed that the oestrus rate ofⅡandⅢtreatment group which injected PMSG 5 times and 7 times both were 100%,were higher than those inⅠgroup which injected 3 times（40%）and the control group(0%).Using the method of surgical laparotomy to observation of estrus and ovulation.The estrus rate ofⅤandⅥgroup were 100%,ovulation rate was 55%and 75%respectively.They are significantly different(P＜0.05).It was effective to induce the synchronization estrus and ovulation of bitch by using exogenous PMSG and HCG.

working dog;exogenous hormone;estrus synchronization;induced ovulation

10.3969/j.issn.1008-4754.2015.02.028

公安部應(yīng)用創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：2011YYCXKMJQ167），公安部重點(diǎn)研究計(jì)劃項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：201301Z DYJ005）。

張躍駿（1978-），男，助理研究員，碩士，主要從事警犬技術(shù)研究工作，E-mail:zhangyj4292@163．com。

*通訊作者：唐樹生，男（1957-），本科，教授，主要從事警用犬種培育和警犬技術(shù)教學(xué)管理研究。

**通訊作者：萬九生（1976-），男，江西樂安人，副研究員，碩士，主要從事警犬輔助繁殖生物技術(shù)研究與應(yīng)用，E-mail：ynwjs@163．com。