摘要：本文研究探討了微生物檢測的新方法和新技術(shù)，包括了快速生化檢測方法、免疫學(xué)技術(shù)、PCR技術(shù)，并介紹了這些檢測技術(shù)的原理和特點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：微生物； 檢測； 免疫學(xué)

目前我國微生物檢驗(yàn)方法基本上還是采用傳統(tǒng)的微生物的培養(yǎng)方法，通常經(jīng)過增殖培養(yǎng)、分離純化、生化試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)等，檢驗(yàn)步驟繁瑣、耗時(shí)長，不能應(yīng)對市場需求快速準(zhǔn)確檢驗(yàn)方法的要求[1]。近年來，隨著生物技術(shù)的快速發(fā)展，微生物快速方法融合了微生物學(xué)、分子化學(xué)、生物化學(xué)、生物物理學(xué)、免疫學(xué)和血清學(xué)等方面的知識(shí)對微生物進(jìn)行分離、檢測、鑒定和計(jì)數(shù)， 與傳統(tǒng)方法比較， 更快、更方便、更靈敏[2]。本文就國內(nèi)外的微生物檢測技術(shù)應(yīng)用和研究狀況綜述如下。

1快速生化檢測方法

1.1快速測試片法快速測試片法[3]可視為預(yù)制型培養(yǎng)基系統(tǒng)，它以紙片、膠片或無紡布等作為培養(yǎng)基載體，將預(yù)制的培養(yǎng)基和指示劑附著在載體上面，微生物若有在上面生長，可以方便的判讀、測定。

其優(yōu)點(diǎn)有：①操作簡單，方便快捷，省去微生物檢驗(yàn)前后大量的工作量，如配培養(yǎng)基，消毒滅菌，清洗培養(yǎng)皿；②體積小，便于攜帶，存放，可以節(jié)省實(shí)驗(yàn)室空間，放入培養(yǎng)箱時(shí)，可以10片或20片堆放，節(jié)省培養(yǎng)箱空間；③加入了染色劑，顯色劑，增強(qiáng)了效果，菌落總數(shù)和金黃色葡萄球菌的檢測中，跟傳統(tǒng)法相比能夠更加容易的判讀，而且避免傳統(tǒng)法中，用熱瓊脂傾注時(shí)，瓊脂溫度控制不當(dāng)，對細(xì)菌造成的熱損傷；④與傳統(tǒng)檢測方法的相關(guān)性非常好，兩者的差異性很小。在菌落總數(shù)的測試時(shí)，我實(shí)驗(yàn)室對兩者進(jìn)行比對，測試片法跟平板法的計(jì)數(shù)結(jié)果無明顯差異。

其缺點(diǎn)有：①標(biāo)準(zhǔn)上：雖然通過了AOAC，ISO，我國出入境檢驗(yàn)檢疫等世界各國權(quán)威組織機(jī)構(gòu)的認(rèn)證認(rèn)可，進(jìn)入相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，但沒有進(jìn)入我國強(qiáng)制的食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致質(zhì)檢、國內(nèi)企業(yè)對相關(guān)產(chǎn)品檢驗(yàn)時(shí)無法采用，根本上限制了該技術(shù)的推廣；②技術(shù)層面上：菌落總數(shù)測試片在做到某類產(chǎn)品，含有芽孢桿菌，測試片表面容易液化，影響判讀結(jié)果。霉菌測試片上面酵母跟霉菌有時(shí)不大容易判斷；③經(jīng)濟(jì)上：成本較高，對于平時(shí)人工比較富余的實(shí)驗(yàn)室來說，全部使用測試片經(jīng)費(fèi)上面壓力較大。

1.2快速生化檢測儀器法微生物生化快速檢測是微生物檢測發(fā)展的方向之一，其具有操作自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化、準(zhǔn)確率高等特點(diǎn)。國內(nèi)外現(xiàn)在已有很多全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)問世[4]，如Vitek 系統(tǒng)、Biolog 系統(tǒng)、BAX 系統(tǒng)和Phoenix 細(xì)菌鑒定等。

Vitek 系統(tǒng)[5]的原理是基于微生物的生化反應(yīng)。它設(shè)計(jì)六種VITEK鑒定卡對應(yīng)不同的菌群，然后在鑒定卡內(nèi)封裝相應(yīng)的風(fēng)干底物，將待檢菌經(jīng)傳統(tǒng)培養(yǎng)，劃線分離得到的純菌落制成菌懸液后，注入鑒定卡，放入儀器進(jìn)行檢測。儀器則通過光學(xué)組件，按不同的波長對鑒定卡進(jìn)行掃描，根據(jù)微生物在對不同風(fēng)干底物生長反應(yīng)不同，得出相應(yīng)的鑒定結(jié)果。

其優(yōu)點(diǎn)有：①獲得廣泛的國際認(rèn)可，而且也進(jìn)入了最新食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)，在實(shí)際檢測中可以作為細(xì)菌檢測的鑒定判斷依據(jù)；②準(zhǔn)確，用vitek對已經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果跟實(shí)際菌株完全符合，而且時(shí)間上面大大縮短，一般情況常見菌株5～8h都能鑒定出結(jié)果；③快捷，減少手工操作時(shí)間，無需添加其它試劑；④將傳統(tǒng)微生物生化鑒定需要的生化藥品壓縮到一張小卡片里，方便了實(shí)驗(yàn)室管理，避免了樣品量不大的實(shí)驗(yàn)室需準(zhǔn)備的繁雜的生化試劑，節(jié)約了成本。

2免疫學(xué)技術(shù)

全自動(dòng)酶聯(lián)熒光免疫系統(tǒng)即mini VIDAS。它主要是利用酶聯(lián)免疫的原理，通過檢測酶跟酶熒光底物作用產(chǎn)生熒光強(qiáng)度來計(jì)算物質(zhì)濃度，從而對微生物或毒素等進(jìn)行篩選檢測。該系統(tǒng)含有固相吸附器和條形碼標(biāo)記試劑條，其內(nèi)側(cè)由抗體包被作為固相吸管功能，通過儀器自動(dòng)進(jìn)行地抽吸，而在吸頭內(nèi)表面完成抗原抗體結(jié)合反應(yīng)、洗滌分離和熒光激發(fā)過程。

其優(yōu)點(diǎn)有： ① 靈敏度高，可以作為大批量樣品的篩查，能有效地節(jié)約檢驗(yàn)時(shí)間和工作量；②速度快，一般上機(jī)后幾十分鐘可以得到初篩結(jié)果；③結(jié)果準(zhǔn)確，與國標(biāo)法比較無明顯差異，假陽性跟假陰性率小。

其缺點(diǎn)有：①?zèng)]有進(jìn)入到食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)，影響它在實(shí)際檢測中的應(yīng)用；②檢測項(xiàng)目少，實(shí)際檢測中常用到的項(xiàng)目只有沙門氏菌、金黃色葡萄球菌毒素，單核增生李斯特菌；③耗材費(fèi)用高，特別在樣品量少的情況下。即使單做一個(gè)樣品也需要3根測試條。影響了在中小實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用。

3PCR技術(shù)

PCR是多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的簡稱，該方法通過對人工難以培養(yǎng)的微生物相應(yīng)DNA片段的擴(kuò)增，檢測擴(kuò)增產(chǎn)物含量， 從而快速地對食品中致病菌含量進(jìn)行檢測。實(shí)時(shí)定量PCR 技術(shù)跟傳統(tǒng) PCR 技術(shù)其基本原理相同，但定量技術(shù)原理不同。實(shí)時(shí)定量技術(shù)應(yīng)用了熒光染料和探針來保證擴(kuò)增的特異性，并且熒光信號(hào)的強(qiáng)弱同擴(kuò)增產(chǎn)物的量成正比，從而準(zhǔn)確定量[7]。

其優(yōu)點(diǎn)有：①測定結(jié)果迅速、靈敏度和特異性高、檢測成本低，理論上， 只

要樣品中含有一分子待測菌的DNA， 通過PCR技術(shù)完全可以在短時(shí)間內(nèi)檢測到；②已成為檢測一些病毒、豬鏈球菌的國家標(biāo)準(zhǔn)方法( 如禽流感病毒通用熒光RT-PCR 檢測方法GB/ T 194381 1-2004; H5 亞型禽流感病毒熒光RT-PCR 檢測方法，GB/ T 194381 2-2004 ，GB/T 19915.7-2005 豬鏈球菌2型熒光PCR檢測方法等)。

其缺點(diǎn)有：①其存在的最大問題在于PCR 產(chǎn)品的假陽性污染，其原因主要是由于PCR 方法的靈敏度極高， 可能是擴(kuò)增已死亡的待檢測菌體而造成的；②沒有進(jìn)入食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)，影響了該技術(shù)在國內(nèi)檢測的應(yīng)用。

4結(jié)論

微生物檢驗(yàn)技術(shù)正朝著簡便、高效、快速、自動(dòng)化方向發(fā)展，許多新的檢測技術(shù)還在不斷涌現(xiàn)出來，除了上面介紹的技術(shù)，還有代謝學(xué)技術(shù)、傳感器技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)、基因探針技術(shù)、生物芯片技術(shù)等等。每種檢測技術(shù)都有其優(yōu)缺點(diǎn)，研究檢測人員應(yīng)該根據(jù)不同的檢測目標(biāo)，不同的實(shí)驗(yàn)環(huán)境及條件，選擇適當(dāng)?shù)臋z測方法，進(jìn)一步地，還可以將不同的技術(shù)結(jié)合起來比對、使用，以提高檢測的準(zhǔn)確性。

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