張國(guó)安，桂勇幫，李 霞

（四川省北川羌族自治縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 北川 622760）

豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍(lán)耳病是農(nóng)業(yè)部規(guī)定的國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫病種，按農(nóng)業(yè)部免疫計(jì)劃要求，這三種疫苗的免疫接種需要間隔7～10d分兩次完成，但這種方式將耗費(fèi)大量的人力物力，且不為農(nóng)戶(hù)接受?；诖?，筆者開(kāi)展了三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)注射一次完成的免疫效果測(cè)定試驗(yàn)?，F(xiàn)將試驗(yàn)過(guò)程和結(jié)果報(bào)告于后，供同行參考與指正。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)對(duì)象為散養(yǎng)農(nóng)戶(hù)自繁自養(yǎng)的同窩健康仔豬，在35日齡時(shí)實(shí)施疫苗注射，30d后采集血清進(jìn)行抗體檢測(cè)。

1.2 試驗(yàn)疫苗 全部由北川縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心統(tǒng)一提供相同廠家、同一批號(hào)的疫苗，并按冷藏要求運(yùn)輸、保管、稀釋和注射。

1.2.1 豬瘟疫苗。政府采購(gòu)專(zhuān)用豬瘟活疫苗（脾淋源，后稱(chēng)豬瘟脾淋苗），杭州薦量獸用生物制品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：1301004。

1.2.2 豬藍(lán)耳病疫苗。高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（后稱(chēng)藍(lán)耳弱毒苗），吉林正業(yè)生物制品股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20121248。

1.4.3 豬口蹄疫苗。豬口蹄疫O型滅活疫苗（后稱(chēng)口蹄滅活苗），新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：2013019；豬口蹄疫O型合成肽疫苗（后稱(chēng)口蹄合成肽），新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：2013008。

1.3 試驗(yàn)分組及免疫方法

1.3.1“321”免疫模式。“321”即三種疫苗、兩點(diǎn)注射、一步完成。試驗(yàn)組A：將豬瘟脾淋苗與豬藍(lán)耳苗各1頭份分別作等量稀釋?zhuān)?mL含1頭份），混合于一支注射器，在仔豬頸部肌肉注射，另一側(cè)同時(shí)注射豬口蹄疫滅活苗。

試驗(yàn)組B：方法同A，只是將豬口蹄疫滅活苗改為合成肽苗。

試驗(yàn)組C：只注射豬瘟和豬藍(lán)耳疫苗，且混合1針注射。

1.3.2 三針?lè)贮c(diǎn)注射。對(duì)照組D：將豬瘟脾淋苗、豬藍(lán)耳苗、豬口蹄疫滅活苗分三針（頸部左右各1針，臀部1針）同時(shí)注射。

對(duì)照組E：將豬瘟脾淋苗、豬藍(lán)耳苗、豬口蹄疫合成肽苗分三針（頸部左右各1針，臀部1針）同時(shí)注射。

1.4 注射劑量 嚴(yán)格按照疫苗說(shuō)明書(shū)稀釋、足量注射，即：豬瘟疫苗均肌肉注射1頭份/1mL，豬口蹄疫O型滅活苗25kg以下每頭注射1mL、25kg以上則注射2mL，豬口蹄疫O型合成肽苗每頭注射1mL，豬藍(lán)耳弱毒苗每頭注射1頭份。

1.5 作好記錄 注射后仔豬出現(xiàn)不食、嘔吐、發(fā)燒及24h內(nèi)死亡的情況均要作詳細(xì)登記，試驗(yàn)期間出現(xiàn)疾病的醫(yī)治用藥也要如實(shí)記錄。

1.6 抗體檢測(cè)及判定標(biāo)準(zhǔn)

1.6.1 豬瘟抗體用間接ELISA測(cè)定。豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒系武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)為131116。樣品OD630nm值≥0.35判定為抗體合格（陽(yáng)性）。

1.6.2 豬藍(lán)耳抗體用間接ELISA測(cè)定。PRRSV非結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA檢測(cè)試劑盒系吉林正業(yè)生物制品股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為2013004。測(cè)定的S/P值即樣品值≥0.39為陽(yáng)性。

1.6.3 口蹄疫抗體測(cè)定。滅活苗采用固相ELISA法，豬口蹄疫病毒O型抗體診斷試劑盒系深圳市綠詩(shī)源生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為2013115，樣品OD630nm值≥0.2判定為抗體合格（陽(yáng)性）；合成肽苗采用定性ELISA分析法，豬口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗體診斷試劑盒由廣東現(xiàn)代農(nóng)業(yè)集團(tuán)研究院有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為20120801，當(dāng)臨界值為0.204即樣品值≥0.204時(shí)判為陽(yáng)性。

1.7 檢測(cè)儀器 BIORAD（伯樂(lè)）酶標(biāo)儀，型號(hào)：IMARK 15186，波長(zhǎng)根據(jù)試劑要求調(diào)整。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 免疫副反應(yīng)及死亡情況 發(fā)生輕微減食的有3頭，占試驗(yàn)豬只的2.4%，未見(jiàn)死亡現(xiàn)象。

2.2 抗體水平檢測(cè)結(jié)果 詳見(jiàn)表1。

3 結(jié)果分析

3.1 從表1可以看出，“321”模式中試驗(yàn)組A、試驗(yàn)組B在免疫后1個(gè)月，豬瘟、豬藍(lán)耳病的抗體水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)了70%的合格標(biāo)準(zhǔn)，試驗(yàn)組C的豬瘟和豬藍(lán)耳抗體水平也均達(dá)到90%以上，說(shuō)明豬瘟脾淋苗和豬藍(lán)耳弱毒苗是可以混合注射的。

3.2 試驗(yàn)組兩針注射和對(duì)照組三針注射相比，豬瘟、豬藍(lán)耳病的抗體合格率均能超過(guò)70%的合格標(biāo)準(zhǔn)（已達(dá)75%以上），而口蹄疫抗體則出現(xiàn)不同的結(jié)果：合成肽苗（合格率93.3%）明顯好于滅活苗（合格率低至43.5%）。

4 討論

4.1 豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍(lán)耳病是基層動(dòng)物防疫隊(duì)伍春秋集中防疫的重要工作內(nèi)容，如何做到覆蓋密度100%、抗體合格率達(dá)70%，各地做了很多嘗試。其中云南地區(qū)的“321”免疫模式經(jīng)本試驗(yàn)證實(shí)是切實(shí)可行的。筆者本次將豬瘟脾淋苗與豬藍(lán)耳弱毒疫苗混合注射，結(jié)果完全沒(méi)有出現(xiàn)互相干擾的現(xiàn)象，說(shuō)明可以等量混合一針注射。大家知道散養(yǎng)豬只不好保定，防疫員都習(xí)慣追著豬打針，左右頸部各一針比較好打，而注射臀部比較困難，容易打在皮下或脂肪層，影響免疫效果。因此，如果只打兩針，臀部就不用打了，相較于原來(lái)分階段或三點(diǎn)同時(shí)注射來(lái)說(shuō)，大大節(jié)省了人力、物力，值得全面推廣。

表1 各組抗體水平檢測(cè)結(jié)果頭、%

4.2 從三種疫苗的相互影響來(lái)看，很有必要細(xì)分研究，如上所述，使用口蹄疫合成肽苗明顯好于O型滅活疫苗，這也是多次春秋集中免疫檢測(cè)所證實(shí)的，其具體原因還需進(jìn)一步研究。

4.3 動(dòng)物疫病的強(qiáng)制免疫是一項(xiàng)全國(guó)性的工作，基層防疫如何開(kāi)展事關(guān)重大，免疫程序是否合理直接與質(zhì)量相關(guān)聯(lián)，而政府采購(gòu)招標(biāo)疫苗生產(chǎn)廠家的變動(dòng)較大，疫苗自身質(zhì)量如何基層也無(wú)手段檢測(cè)，建議國(guó)家動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心配備統(tǒng)一的檢測(cè)試劑盒，并下發(fā)到縣級(jí)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，以監(jiān)測(cè)春秋集中防疫的質(zhì)量。

[1]查飛，陶汝憲.“321”免疫新模式顯成效[J].中國(guó)畜牧業(yè)，2013，（10）:70-71.

[2]張國(guó)安，等.豬瘟、豬口蹄疫、豬藍(lán)耳病疫苗組合免疫對(duì)比試驗(yàn)[J].四川畜牧獸醫(yī)，2013，40（8）:30-32.