紀(jì)麗麗

（黑龍江林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157011）

連翹（Forsythiasuspense），木犀科植物，常以果實(shí)入藥，具有清熱解毒、消腫散結(jié)、抗菌及抑制真菌等功效，為雙黃連口服液、銀翹解毒沖劑等中藥制劑的主要原料。有研究表明，連翹葉中有效成分如連翹苷、連翹脂素、齊墩果酸等含量高于果實(shí)，連翹葉資源開(kāi)發(fā)前景廣闊。本文將對(duì)連翹葉中的連翹苷的提取工藝進(jìn)行研究，為連翹葉的開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

1 材料、試劑與儀器

材料：連翹葉片，13年6月份采于本學(xué)院植物園內(nèi)，洗凈，烘干至恒重，研磨，備用。

試劑：連翹苷標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)食品藥品檢定研究所），乙醇為分析純。

儀器：UV762雙光束紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)，SG250HE超聲波清洗器，F(xiàn)A2004電子天平。

2 方法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

采用分光光度法測(cè)定連翹苷含量，以連翹苷標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A＝0.02593x＋0.00746（R2＝0.99701，n＝5）。其中：A為波長(zhǎng)229nm處的吸光值；x為連翹苷的含量（mg／L）。

2.2 樣品含量的測(cè)定

稱取5g連翹葉粉末，乙醇溶液浸泡30min，超聲波輔助提取，冷卻補(bǔ)重，過(guò)濾，測(cè)定樣品溶液的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算連翹苷的含量。

2.3 單因素試驗(yàn)

研究乙醇濃度、料液比、提取溫度、提取時(shí)間4個(gè)因素對(duì)連翹苷得率的影響，確定各因素的最佳范圍，每個(gè)因素重復(fù)試驗(yàn)3次，取其平均值。

2.4 正交試驗(yàn)

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，選取乙醇濃度、料液比、提取溫度、提取時(shí)間4個(gè)因素的較優(yōu)水平，按L9（34）設(shè)計(jì)進(jìn)行正交試驗(yàn)。

3 結(jié)果與分析

3.1 乙醇濃度

在50℃下，以1∶10（g∶mL，以下同）的料液比例，用不同濃度的乙醇溶液，超聲波提取10min，按照2.2的方法計(jì)算連翹苷的含量，來(lái)研究乙醇濃度與連翹苷得率的關(guān)系。結(jié)果如圖1所示，隨著乙醇濃度的增加，連翹苷得率也增大，但當(dāng)乙醇濃度超過(guò)80%后，連翹苷的得率增加變化不明顯，因此，確定最佳乙醇濃度為80%。

圖1 乙醇濃度對(duì)連翹苷得率的影響

3.2 液料比

在50℃下，用60%乙醇溶液，以不同的料液比，超聲波提取10min，測(cè)定連翹苷的得率。

結(jié)果如圖2所示，隨著料液比的增加，連翹苷的得率也隨之增加。提取溶劑體積越大，溶劑與提取物接觸越充分，相同的時(shí)間內(nèi)會(huì)溶解出更多的連翹苷而使得率增大。但是料液比過(guò)大，會(huì)增加成產(chǎn)成本，也會(huì)增加超聲波破碎細(xì)胞的阻力，降低細(xì)胞破碎程度，從而降低連翹苷的得率，因此綜合考慮，料液比最適為1∶10。

圖2 料液比對(duì)連翹苷得率的影響

3.3 提取溫度

以60%乙醇溶液，1∶10料液比，在不同的溫度下，超聲波提取10min，測(cè)定連翹苷的得率。

結(jié)果如圖3所示，隨著提取溫度的升高，連翹苷的得率也隨之增大。但溫度超過(guò)70℃后連翹苷得率下降。溫度過(guò)高，連翹苷被破壞，而且乙醇揮發(fā)會(huì)導(dǎo)致乙醇濃度降低使得連翹苷含量降低。因此，單因素提取試驗(yàn)中最佳溫度為70℃。

3.4 提取時(shí)間

在50℃下，用60%乙醇溶液，1∶10料液比，超聲波提取若干分鐘后，測(cè)定連翹苷的得率，研究提取時(shí)間與連翹苷得率的關(guān)系。

結(jié)果如圖4所示，開(kāi)始時(shí)隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，連翹苷的得率隨之增加。當(dāng)提取時(shí)間超多12min后，提取時(shí)間的增加卻引起連翹苷得率的下降，這可能是由于時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致連翹苷不穩(wěn)定，因此，最佳提取時(shí)間為12min。

圖4 提取時(shí)間對(duì)連翹苷得率的影響

3.5 正交試驗(yàn)

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，選取4個(gè)因素的3個(gè)較優(yōu)水平，按L9（34）設(shè)計(jì)進(jìn)行正交試驗(yàn)，因素與水平見(jiàn)表1，正交試驗(yàn)見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。

表1 正交試驗(yàn)因素與水平

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 正交設(shè)計(jì)方差分析

極差分析及方差分析結(jié)果表明，影響連翹苷得率的因素的主次順序?yàn)椋阂掖紳舛龋玖弦罕龋咎崛囟龋咎崛r(shí)間，其中乙醇濃度對(duì)連翹苷得率的影響差異極顯著（P＜0.01）。因此確定最優(yōu)提取條件為：80%乙醇，1∶10（g∶mL）料液比，60℃，超聲提取8min，在此條件下的連翹苷得率為0.3112%。

4 結(jié)論

正交試驗(yàn)法是最常用的確定中藥提取最佳方案的方法，該方法準(zhǔn)確、有效。以乙醇作為溶劑提取苷類物質(zhì)時(shí)，乙醇濃度、料液比、提取溫度以及提取時(shí)間是主要的影響因素。因此，本研究選擇這4個(gè)因素進(jìn)行正交試驗(yàn)，采用分光光度法測(cè)定連翹苷的含量，得出乙醇80%，料液比1∶10（g∶mL），提取溫度60℃，提取時(shí)間8min為最佳提取方案。其中乙醇濃度為最主要的影響因素，其他因素對(duì)提取結(jié)果有影響但影響不顯著。本研究對(duì)促進(jìn)連翹葉資源的充分開(kāi)發(fā)和利用提供了依據(jù)。

［1］ 李發(fā)榮，段飛.中藥連翹及連翹葉中連翹苷含量的比較研究［J］.西北植物學(xué)報(bào)學(xué)報(bào)，2004，24（4）：725-727.

［2］ 吳艷芳，王新勝.超聲輔助提取連翹總黃酮工藝優(yōu)選［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（14）：30-32.

［3］ 齊建紅.HPLC測(cè)定連翹葉不同提取物中連翹苷的含量比較［J］.陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012（3）：7-8.