王改玲，石亞中，李文潔，段勁生

(1.蚌埠學(xué)院 生物與食品工程系，安徽 蚌埠 233030;2.安徽省農(nóng)科院 植物保護(hù)研究所，安徽 合肥 230031)

水稻是一年生禾本科植物，是人類的主要糧食作物［1］。但現(xiàn)今水稻經(jīng)常會(huì)患紋枯病，造成結(jié)實(shí)率和米質(zhì)下降［2］。己唑醇對(duì)水稻紋枯病有防治效果，由于各地的降雨量、土壤類型、土壤pH 值等均有差異，農(nóng)藥在使用后的降解程度也是不同的。因此，研究5%己唑醇在稻米中的殘留檢測(cè)對(duì)于提高食品質(zhì)量監(jiān)督，保障民生建設(shè)和維護(hù)食品安全都具有重要意義。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料與儀器

5%己唑醇懸浮劑(殺菌劑)，工業(yè)品;乙腈、無(wú)水硫酸鈉、正己烷、丙酮、石油醚(60 ～90 ℃)、氯化鈉均為分析純;弗羅里硅土，食品級(jí)(粒徑149 ～250 μm);安徽潛山縣余井鎮(zhèn)、霍山縣符橋鎮(zhèn)、鳳臺(tái)縣新集鎮(zhèn)稻谷。

GC 7890，配ECD 檢測(cè)器;KQ-50B 超聲波清洗器;RE-52CS 旋轉(zhuǎn)濃縮蒸發(fā)器;N-EVAP24 氮吹儀;Y-4 水浴恒溫振蕩器;HP-5 毛細(xì)管柱等。

1.2 田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)共設(shè)置14 個(gè)處理，每處理3 個(gè)重復(fù)，每重復(fù)為一小區(qū)，每小區(qū)不小于30 m2。施藥劑量:最終殘留試驗(yàn)低劑量75 g a.i. /ha(制劑100 g/Mu)和高劑量112.5 g a.i. /ha(制劑150 g/Mu)，施藥次數(shù)為3 次、4 次，施藥間隔期為14，28，45 d。同時(shí)設(shè)空白對(duì)照處理。各小區(qū)之間設(shè)保護(hù)行，壘梗防串灌。

2012 年試驗(yàn)期間平均氣溫為18.7 ～30.3 ℃，降雨量為538.4 mm 左右。土壤類型為砂壤土，pH值為5.34，有機(jī)質(zhì)含量為2.43%。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品的準(zhǔn)備 在試驗(yàn)小區(qū)中隨機(jī)取樣，選取6 ～12 個(gè)采樣點(diǎn)，每小區(qū)的采樣量不少于1 kg。將稻谷處理干凈，通風(fēng)晾干后脫殼，將稻米裝于自封袋中。

1.3.2 稻米中殘留的己唑醇的提取

1.3.2.1 粗提取 稱取10.0 g 稻米置于打碎機(jī)中打碎，并轉(zhuǎn)移到250 mL 具塞三角瓶中，加入50 mL乙腈，塞上瓶塞后，浸泡過(guò)夜。用振蕩器振蕩提取1 h，并置于已裝有無(wú)水硫酸鈉和濾紙的濃縮瓶上過(guò)濾，殘?jiān)偌尤?0 mL 乙腈振蕩提取30 min，過(guò)濾，用20 mL 乙腈洗滌殘?jiān)?。合并濾液于250 mL 濃縮瓶中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(≤45 ℃)上濃縮至近干，待柱層析凈化。

1.3.2.2 柱層析凈化 在層析柱內(nèi)塞入棉花(以防止加入的無(wú)水硫酸鈉漏掉)，加入2 cm 無(wú)水硫酸鈉，裝填4.0 g 弗羅里硅土(用前640 ℃處理4 h，加水5%減活)和0.2 g 活性炭的混合吸附劑，再加入2 cm 無(wú)水硫酸鈉，用玻棒將柱體敲實(shí)。每個(gè)層析柱內(nèi)加入15 mL 石油醚預(yù)淋，待預(yù)淋液降為2 cm，關(guān)閉層析柱。用60 mL 石油醚/丙酮(8/2，V/V)淋洗，前3 次用2 ～3 mL 淋洗液洗濃縮瓶，并將濃縮瓶?jī)?nèi)的洗滌液轉(zhuǎn)移到樣品柱上，讓吸附劑充分吸附樣品中的雜質(zhì)。將剩余的淋洗液倒入濃縮瓶中，把濃縮瓶仔細(xì)清洗后轉(zhuǎn)移到樣品柱上，沖洗柱體，收集合并淋洗液。

1.3.2.3 濃縮蒸餾 將收集淋洗液后的濃縮瓶在小于45 ℃的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至近干，并用氮?dú)獯蹈伞?/p>

1.3.2.4 正己烷定容 用吸耳球和5 mL 的移液管吸取5 mL 正己烷于濃縮瓶中，搖晃濃縮瓶，以充分溶解濃縮瓶?jī)?nèi)的藥品。用膠頭滴管轉(zhuǎn)移到1.5 mL的安捷倫小瓶?jī)?nèi)，加蓋，待GC 測(cè)定。

1.4 分析方法

1.4.1 GC 測(cè)定的條件 Agilent GC 7890 氣相色譜儀器，ECD 檢測(cè)器;HP-5 毛細(xì)管柱，10 m ×0.53 mm×2. 65 μm，柱溫(程序升溫):150 ℃(2 min)8 ℃/min，260 ℃(5 min);進(jìn)樣口溫度250 ℃，檢測(cè)器溫度300 ℃;載氣為高純氮，流速10 mL/min，不分流，進(jìn)樣量1 μL。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 稱取98.5%的己唑醇0.050 7 g 己唑醇標(biāo)樣于50 mL 容量瓶中，用石油醚定容，得到1 000 μg/mL 的己唑醇母液。用移液管吸取1 mL 母液于10 mL 容量瓶中，用石油醚定容至刻度，制成100 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。取1 mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL 容量瓶中，用石油醚定容至刻度，制成10 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。這樣用石油醚逐級(jí)稀釋，得到濃度分別為5.0，1.0，0.2，0.1，0.002 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用GC 進(jìn)行測(cè)定。以濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積(Hz×S)為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1。

圖1 己唑醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 The standard curve of hexaconazole

由圖1 可知，己唑醇線性回歸方程y =11 499x－4 749，R=0.999。

稻米中己唑醇的殘留量:

式中 R——樣本中農(nóng)藥殘留量，mg/kg;

C標(biāo)——標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，μg/mL;

V標(biāo)——標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣體積，μL;

S樣——注入樣本溶液的峰面積，Hz·S;

V終——樣本最終定容體積，mL;

V樣——樣本溶液進(jìn)樣體積，μL;

S標(biāo)——注入標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積，Hz·S;

W——樣品質(zhì)量，g。

2 結(jié)果與討論

2.1 己唑醇的添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

稱取4 個(gè)10.0 g 空白粉碎稻米于具塞三角瓶中，分別標(biāo)記0.2，0.02，0.002 μg/mL。并相應(yīng)加入0，1 mL 2 μg/mL，1 mL 0. 2 μg/mL，1 mL 0.02 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述方法進(jìn)行提取后，濃縮定容，并進(jìn)行GC 測(cè)定，平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD 見(jiàn)表1。

表1 己唑醇的添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差Table 1 The recovery and relative standard deviation of hexaconazole

己唑醇的相對(duì)保留時(shí)間為11.7 min。標(biāo)樣的響應(yīng)值較高，且峰形對(duì)稱，各樣品中測(cè)定的目標(biāo)農(nóng)藥的出峰時(shí)間基本一樣且平行性良好，雜峰和目標(biāo)農(nóng)藥的峰得到了很好的分離，沒(méi)有對(duì)測(cè)定物分析造成一定的影響［3］。由表1 可知，稻米中己唑醇的添加濃度為0.002 ～0.2 mg/kg 時(shí)，平均回收率為76.44%～85.52%，RSD 為1.03% ～1.76%，表明準(zhǔn)確度和精密度均滿足殘留分析的要求，所以此方案可行。

2.2 稻米中己唑醇的最終殘留量

2012 年安徽三地稻米中的殘留量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2 ～表4。

表2 潛山縣余井鎮(zhèn)稻米中己唑醇?xì)埩袅縏able 2 The residue of hexaconazole in rice of Yujing town，Qianshan county

表3 霍山縣符橋鎮(zhèn)稻米中己唑醇最終殘留量Table 3 The residue of hexaconazole in rice of Fuqiao town，Huoshan country

表4 鳳臺(tái)縣新集鎮(zhèn)稻米中己唑醇最終殘留量Table 4 The residue of hexaconazole in rice of Xinji town，F(xiàn)engtai country

由表2 ～表4 可知，在安徽主要地區(qū)用5%的己唑醇懸浮劑施藥，用藥量為75 ～112.5 g a.i. /ha，施藥3 ～4 次，施藥間隔期為7 d，采收間隔期為14，28，45 d，結(jié)果顯示，收獲的稻米中己唑醇的殘留量為ND ～0. 091 3 mg/kg。而 歐 盟 的MRL 值 為0.02 mg/kg，所以上述材料顯示2011 年安徽省潛山縣余井鎮(zhèn)在用藥量為75 g a.i. /ha，施藥3 次，間隔期為28 d 以上時(shí)符合標(biāo)準(zhǔn)，在用藥量112.5 g a.i. /ha，施藥次數(shù)為4 次，間隔期為28 d 以上符合標(biāo)準(zhǔn)，而2012 年的安徽霍山縣符橋鎮(zhèn)和鳳陽(yáng)縣新集鎮(zhèn)均符合標(biāo)準(zhǔn)。

2.3 方法靈敏度、準(zhǔn)確度與精密度的測(cè)定

由上述材料可知，儀器對(duì)己唑醇的最小檢出量是1. 0 × 10－12g。稻 米 中 最 低 檢 測(cè) 濃 度 為0.002 mg/kg。己 唑 醇 的 添 加 濃 度 為0. 002 ～0.2 mg/kg 時(shí)，平均回收率為76. 44% ～85. 52%，RSD 為1.03% ～1.76%。實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度和精密度均符合農(nóng)藥殘留分析的要求。

3 結(jié)論

(1)目前，中國(guó)和CAC 尚未規(guī)定稻米中己唑醇的最大殘留限量值(MRL)，歐盟規(guī)定為0.02 mg/kg。由安徽稻米中殘留己唑醇的數(shù)據(jù)，建議5%己唑醇懸浮劑用于防治水稻紋枯病，最高制劑用藥量為100 g/Mu(有效成分75 g a. i. /ha)，最多可施藥3 次，安全間隔期為45 d。

(2)在農(nóng)藥殘留實(shí)驗(yàn)中的農(nóng)藥殘留提取劑有乙腈、二氯甲烷、丙酮等，其中乙腈的提取效果最好，提取率可達(dá)70%以上，但是乙腈溶劑在濃縮蒸餾時(shí)花費(fèi)時(shí)間較多，二氯甲烷濃縮蒸餾時(shí)間雖然最短，但是揮發(fā)性較強(qiáng)，毒性較大，不推薦使用。

(3)實(shí)驗(yàn)主要的層析柱吸附劑有兩種，一種是弗羅里硅土吸附劑，另一種是中性氧化鋁吸附劑，其中弗羅里硅土的效果較好，而且相對(duì)經(jīng)濟(jì)，推薦使用。

［1］ 劉光明，羅逢健，陳宗.5%己唑醇在水稻中殘留降解動(dòng)態(tài)研究［J］.農(nóng)藥，2004，43(4):181-183.

［2］ 陳再廖，朱潔，莫小平，等. 己唑醇等三唑類藥劑防治水稻紋枯病的效果［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010(3):577-579.

［3］ Shephard M C. A novel triazole fungicides hexaconazole［J］.Pesticides，1987，5(5):48-49，42.