文│劉建文 任景江 李潔 孫濤 劉瑩 王志成（天津市動物疫病預(yù)防控制中心）

黃艷興 候慶云（天津市薊縣動物疫病預(yù)防控制中心）

袁湛 關(guān)建軍（天津市靜?？h動物疫病預(yù)防控制中心）

為促進(jìn)奶牛結(jié)核病凈化工作的開展，我們結(jié)合工作實踐，針對一些凈化關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行了創(chuàng)新性研究。探索應(yīng)用尾根注射結(jié)核菌素法、電推剪毛法和數(shù)顯游標(biāo)卡尺技術(shù)改進(jìn)牛結(jié)核分枝桿菌變態(tài)反應(yīng)的試驗方法。通過引進(jìn)先進(jìn)的γ-干擾素試驗技術(shù)，提高監(jiān)測工作的特異性和時效性。同時，在陽性牛的撲殺和病死畜無害化處理方面進(jìn)行了研究與探討。上述措施不但有力地促進(jìn)了奶牛結(jié)核病凈化工作的開展，而且可以為其他地區(qū)凈化工作的開展提供技術(shù)參考。

牛結(jié)核病是一種由結(jié)核分枝桿菌引起的人畜共患慢性傳染病。奶牛最易感，其次是水牛和黃牛。人也可以通過接觸病?；蚴秤没夹笕?、乳感染?？梢?，該病不僅會給畜牧業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，而且可導(dǎo)致嚴(yán)重的社會公共衛(wèi)生問題。因此，開展奶牛結(jié)核病的防控，尤其是該病的凈化工作極為重要。奶牛結(jié)核病凈化是一項技術(shù)性較強、涉及多項技術(shù)領(lǐng)域的綜合性工程，特別是在監(jiān)測、檢疫和病畜、陽性畜的撲殺與無害化處理方面技術(shù)要求較高。筆者近年來一直從事奶牛結(jié)核病凈化工作，在技術(shù)應(yīng)用和創(chuàng)新方面略有心得，現(xiàn)結(jié)合工作情況淺談如下。

一、牛型結(jié)核分枝桿菌（PPD）變態(tài)反應(yīng)的創(chuàng)新

我國規(guī)定的牛結(jié)核病監(jiān)測方法有國家標(biāo)準(zhǔn)，即牛型PPD變態(tài)反應(yīng)。該方法目前在國內(nèi)得到廣泛應(yīng)用。在多年應(yīng)用該方法的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)了一些問題，主要包括操作煩瑣，費時費力等。為此，我們在技術(shù)環(huán)節(jié)做了一些創(chuàng)新，在應(yīng)用中受益匪淺。

1.尾根注射結(jié)核菌素法。按照《動物結(jié)核病診斷技術(shù)》（GB/T18645-2002）要求，牛PPD變態(tài)反應(yīng)試驗需要在牛頸部上三分之一處皮內(nèi)注射結(jié)核菌素。由于部分地區(qū)養(yǎng)殖條件落后，特別是一些散養(yǎng)戶缺乏專業(yè)保定設(shè)施，在牛不配合的情況下進(jìn)行頸部注射操作困難，有時只能通過捆綁等方式將牛頭固定于牛欄上操作，由此造成的強烈應(yīng)激反應(yīng)嚴(yán)重影響牛的生產(chǎn)性能，嚴(yán)重時可造成機械損傷或孕畜流產(chǎn)。但是在生產(chǎn)工作中發(fā)現(xiàn)，奶牛因為經(jīng)常受到直腸檢查、輸精、擠奶等操作刺激而習(xí)慣于人員從背后接近。于是嘗試采用尾根褶皺皮內(nèi)注射結(jié)核菌素的方法，技術(shù)要領(lǐng)同頸部皮內(nèi)注射法。在操作中發(fā)現(xiàn)，尾根注射時牛相對安靜，應(yīng)激較小。而且通過比較試驗，發(fā)現(xiàn)尾根注射和頸部注射的變態(tài)反應(yīng)檢測結(jié)果基本一致。因此，我們在監(jiān)測中采取先用尾根注射牛PPD變態(tài)反應(yīng)方法逐頭檢測，再對陽性或疑似陽性牛進(jìn)行頸部注射牛PPD變態(tài)反應(yīng)方法復(fù)檢。該操作程序不但減少了對牛的應(yīng)激反應(yīng)，而且顯著提高了檢測效率，熟練者日檢測數(shù)可達(dá)500頭以上，有力促進(jìn)了凈化工作的開展。

2.電推剪毛法。牛PPD變態(tài)反應(yīng)試驗前需要將注射結(jié)核菌素部位的牛毛剪掉，在進(jìn)行大規(guī)模監(jiān)測時，剪毛任務(wù)很重，勞動強度大。在檢測工作中曾出現(xiàn)部分獸醫(yī)人員由于長時間操作磨破手指，嚴(yán)重者甚至造成創(chuàng)傷感染。為此，我們專門購置了可充電式電推剪，攜帶便利，便于連續(xù)操作，顯著提高了工作效率。

3.數(shù)顯游標(biāo)卡尺的應(yīng)用。在判定試驗結(jié)果時，通常使用傳統(tǒng)的游標(biāo)卡尺測量皮皺厚度。由于卡尺讀數(shù)精密且細(xì)小，而且不同人員夾持皮皺的松緊程度不同，極易造成人為誤差，特別是對于年齡稍大的技術(shù)人員更為不利。雖然進(jìn)行了多次技術(shù)培訓(xùn)，部分操作人員還是難以準(zhǔn)確掌握。為此，我們購置了數(shù)顯游標(biāo)卡尺，在測量皮皺厚度時操作更為省力，而且測量數(shù)據(jù)一目了然，減少了讀數(shù)誤差率。

二、新型檢測技術(shù)的引進(jìn)與應(yīng)用

傳統(tǒng)的牛型PPD變態(tài)反應(yīng)不但操作煩瑣、費時費力，而且經(jīng)常由于出現(xiàn)禽型結(jié)核陽性反應(yīng)而導(dǎo)致牛型PPD變態(tài)反應(yīng)假陽性結(jié)果，致使部分假陽性牛被誤殺。因此我們在奶牛結(jié)核病凈化工作中引進(jìn)了γ-干擾素檢測方法，既提高了檢測效率，又排除了禽型結(jié)核引起的非特異性反應(yīng)，克服了皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)易出現(xiàn)假陽性的不足，從而提高了試驗特異性。此外，γ-干擾素試驗只需要一次采血，省時省力，而且排除了皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)結(jié)果判定人為影響的因素。再者，γ-干擾素試驗具有檢測結(jié)核病早期感染的能力，因而提高了試驗敏感性。雖然γ-干擾素檢測方法尚未在國內(nèi)廣泛應(yīng)用，但是該方法已成為歐美發(fā)達(dá)國家法定的牛結(jié)核病檢測方法。我們通過政府采購方式購進(jìn)了γ-干擾素試劑盒，通過大量試驗進(jìn)行了技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化，取得了令人滿意的效果。

三、陽性牛的撲殺技術(shù)

對于陽性牛的撲殺和無害化處理，我們也進(jìn)行了多種技術(shù)嘗試。開始使用錘擊牛頭的方法，并特意選擇錘擊后腦枕骨大孔部位，雖然也能快速殺死牛，但是該方法依靠蠻力，動作粗暴，操作時出血還會污染環(huán)境，而且稍有不慎極易造成人身損傷。后來采用靜脈注射藥物致死的方法，但是由于藥物的劑量和致死時間不好掌握，撲殺效率極低。目前，我們在市財政的資助下，購置了電擊式大動物撲殺器。通過培訓(xùn)和實踐，證明該設(shè)備操作簡單，工作快捷，安全可靠，撲殺效率大幅提高，而且不存在二次污染的問題，在奶牛結(jié)核病凈化工作中發(fā)揮了重要作用。

四、病死畜的無害化處理

無害化處理工作是《動物防疫法》賦予我們疫控工作者和養(yǎng)殖業(yè)主法定的職責(zé)和義務(wù)，病畜和陽性畜撲殺后的無害化處理至關(guān)重要。做好病死畜的無害化處理工作，既是防止疫源傳播的重要手段，也是解決病原污染環(huán)境的重要環(huán)節(jié)。我們在奶牛結(jié)核病凈化工作中，對病畜和陽性畜按照《病害動物和病害動物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程》（GB 16548-2006）要求，堅持采用焚燒、深埋的無害化處理方式。但是，該方法在處理大批量病死動物時存在焚燒不徹底和污染環(huán)境的問題，而且造成大量肉品資源無法再利用。國外發(fā)達(dá)國家等主要采用生物無害化處理技術(shù)。該技術(shù)主要利用耐高溫的生物酵素分解發(fā)酵能力，將病死畜禽經(jīng)過切割粉碎、生物發(fā)酵、高溫滅菌后制成高檔有機肥料，既減少了病死動物對環(huán)境的污染，又實現(xiàn)了有機廢棄物的循環(huán)利用。目前國內(nèi)也有個別企業(yè)開始引進(jìn)、推廣該類技術(shù)，但是要想真正實現(xiàn)全面推廣任重而道遠(yuǎn)。

關(guān)鍵技術(shù)創(chuàng)新是奶牛結(jié)核病凈化工作開展的生命力。在工作中要堅持探索應(yīng)用新技術(shù)，不斷總結(jié)經(jīng)驗并逐步實現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化，已經(jīng)完成了天津市質(zhì)監(jiān)局下達(dá)的地方標(biāo)準(zhǔn)《奶牛結(jié)核病凈化技術(shù)規(guī)范》的編制工作，不但為天津市的奶牛結(jié)核病凈化工作提供了有力的技術(shù)支持，而且對于全國的奶牛結(jié)核病凈化工作具有寶貴的參考意義。