康爾恂 陳宏泉 閆麗萍 李杰 韓春玉 夏秀娟

抗幽門(mén)螺桿菌抗體陽(yáng)性慢性蕁麻疹患者血清對(duì)人皮膚肥大細(xì)胞釋放組胺作用的研究

康爾恂 陳宏泉 閆麗萍 李杰 韓春玉 夏秀娟

目的探討抗幽門(mén)螺桿菌(Hp)抗體與慢性蕁麻疹(CU)發(fā)病的關(guān)系。方法選擇13C呼吸實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性、抗Hp抗體陽(yáng)性的CU患者為實(shí)驗(yàn)組,健康人為對(duì)照組。用CU患者血清孵育人皮膚肥大細(xì)胞原代細(xì)胞株(HMC),檢測(cè)血清是否可刺激HMC細(xì)胞釋放組胺。用抗Hp抗體(IgG)刺激HMC細(xì)胞,檢測(cè)其是否具有活化細(xì)胞釋放組胺的作用。檢測(cè)CU患者血清中是否也含有高親和力受體(FcεRI)抗體或抗IgE抗體。分別用抗FcεRI抗體、抗IgE抗體刺激HMC細(xì)胞,檢測(cè)其活化HMC細(xì)胞釋放組胺作用。結(jié)果CU患者組血清活化HMC細(xì)胞釋放組胺作用(3.13±0.93)高于健康對(duì)照組(2.92±0.75,t=2.39,P＜0.05),4例CU患者血清中同時(shí)存在抗FcεRI抗體、3例存在抗IgE抗體。分別用這兩種抗體陽(yáng)性的CU患者血清孵育HMC細(xì)胞,釋放組胺量均高于健康對(duì)照組(t值分別為4.82、6.34,均P＜0.01),但用只含有抗Hp抗體CU患者血清孵育HMC細(xì)胞無(wú)釋放組胺作用(與健康對(duì)照組比較,t=1.74,P＞0.05)?？笻p抗體(IgG)無(wú)激活HMC細(xì)胞釋放組胺作用(與陰性對(duì)照血清比較,t=1.95,P＞0.05),抗FcεRI抗體、抗IgE抗體均可激活HMC細(xì)胞釋放組胺(與陰性對(duì)照血清比較,t值分別為3.72、3.02,均P＜0.01)。結(jié)論抗Hp抗體對(duì)CU無(wú)致病作用,血清中同時(shí)存在抗FcεRI抗體或抗IgE抗體可導(dǎo)致部分Hp感染者同時(shí)患有CU。

蕁麻疹;幽門(mén)螺桿菌;抗體;肥大細(xì)胞

研究表明,幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)感染與慢性蕁麻疹(CU)發(fā)病有關(guān),但發(fā)病機(jī)制仍不明確。本研究選擇抗Hp抗體陽(yáng)性、同時(shí)患有CU的Hp現(xiàn)癥感染者,通過(guò)檢測(cè)患者血清以及純化的抗Hp抗體是否具有刺激體外培養(yǎng)人皮膚肥大細(xì)胞原代細(xì)胞株(HMC)釋放組胺作用,再進(jìn)一步檢測(cè)患者血清中是否還存在可導(dǎo)致CU的抗FcεRI抗體或抗IgE抗體,探討抗Hp抗體與CU發(fā)病的關(guān)系。

對(duì)象與方法

一、對(duì)象

青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬煙臺(tái)毓璜頂醫(yī)院皮膚科門(mén)診50例伴有Hp感染的CU患者為實(shí)驗(yàn)組,男23例,女27例,年齡(35±6)歲;50例無(wú)Hp感染,不患有CU的健康人為對(duì)照組,男21例,女29例,年齡(37±4)歲。CU患者入選標(biāo)準(zhǔn):①皮膚風(fēng)團(tuán)、瘙癢每天或幾乎每天發(fā)作,時(shí)起時(shí)退,病程＞6周;②13C呼吸實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性、抗Hp抗體陽(yáng)性。CU患者排除標(biāo)準(zhǔn):蕁麻疹患者被確診為膽堿能蕁麻疹、寒冷性蕁麻疹、皮膚劃痕癥、壓迫性蕁麻疹、日光性蕁麻疹等物理性蕁麻疹或蕁麻疹性血管炎。健康對(duì)照組均來(lái)自于我院體檢中心的健康志愿者,入選標(biāo)準(zhǔn):①近1年無(wú)蕁麻疹和胃病史;②13C呼吸實(shí)驗(yàn)、抗Hp抗體均為陰性。健康對(duì)照組排除標(biāo)準(zhǔn):①隨訪過(guò)程中受試者13C呼吸實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性或抗Hp抗體陽(yáng)性;②隨訪過(guò)程中,受試者出現(xiàn)蕁麻疹癥狀。本研究經(jīng)過(guò)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),所有受試者均簽署知情同意書(shū)。

二、方法

1.使用試劑:10%小牛血清為北京索萊寶生物科技有限公司產(chǎn)品;HMC為青島諾賽科貿(mào)有限公司產(chǎn)品;1640培養(yǎng)液(美國(guó)Hyclone公司);組胺檢測(cè)試劑盒(上海亨代勞商貿(mào)有限公司);小鼠抗人FcεRI抗體、小鼠抗人IgE抗體檢測(cè)試劑盒為美國(guó)Rapidbio公司產(chǎn)品;抗Hp-IgG抗體、抗FcεRI抗體、抗IgE抗體為英國(guó)Abcam公司產(chǎn)品。

2.血清采集:抽取受試者外周靜脈血10 ml,400×g10 min分離血清,將分離的血清樣本編號(hào)后置于-20℃冰箱備用。

3.肥大細(xì)胞培養(yǎng):將HMC接種于含10%小牛血清的1640培養(yǎng)液,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。

4.CU患者血清活化HMC釋放組胺的檢測(cè):將105/ml的HMC細(xì)胞懸液100 μl加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,每孔內(nèi)加入CU患者血清100 μl,以健康對(duì)照血清作為對(duì)照組,每例30個(gè)孔,37℃孵育20 min,按組胺檢測(cè)試劑盒操作檢測(cè)組胺釋放量。

5.CU患者血清中抗FcεRI抗體和抗IgE抗體檢測(cè):按小鼠抗人FcεRI抗體檢測(cè)試劑盒和小鼠抗人IgE抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作,檢測(cè)CU患者血清中抗FcεRI抗體、抗IgE抗體是否陽(yáng)性。

6.抗Hp-IgG抗體活化HMC釋放組胺檢測(cè):將105/ml HMC細(xì)胞懸液100 μl加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,分別加入含2 mg/L抗Hp-IgG抗體的健康人血清100 μl,并設(shè)只加健康人血清的陰性對(duì)照組,每組30個(gè)孔。37℃孵育20 min,按組胺檢測(cè)試劑盒操作,檢測(cè)組胺釋放量。

7.抗FcεRI抗體及抗IgE抗體刺激HMC細(xì)胞釋放組胺檢測(cè):將105/ml的HMC細(xì)胞懸液100 μl加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,分別加入含2 mg/L抗FcεRI抗體、2 mg/L抗IgE抗體的健康人血清100 μl、不含抗FcεRI抗體及抗IgE抗體的陰性對(duì)照血清,每組30個(gè)孔,孵育20 min后,分別按組胺檢測(cè)試劑盒操作,檢測(cè)培養(yǎng)孔內(nèi)組胺釋放量。

8.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:所有數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。使用t檢驗(yàn)和Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。

結(jié) 果

一、CU患者血清刺激HMC細(xì)胞釋放組胺量檢測(cè)結(jié)果

CU患者組血清刺激HMC細(xì)胞釋放組胺量高于健康對(duì)照組。4例(8%)CU患者血清抗FcεRI抗體陽(yáng)性,3例(6%)抗IgE抗體陽(yáng)性,這兩種抗體陽(yáng)性CU患者血清刺激HMC細(xì)胞釋放組胺量高于健康對(duì)照組。43例只含抗Hp抗體CU患者血清(86%)對(duì)HMC細(xì)胞無(wú)刺激釋放組胺作用。見(jiàn)表1。

表1 抗幽門(mén)螺桿菌抗體陽(yáng)性慢性蕁麻疹患者血清中各抗體刺激HMC細(xì)胞釋放組胺量比較(±s)

表1 抗幽門(mén)螺桿菌抗體陽(yáng)性慢性蕁麻疹患者血清中各抗體刺激HMC細(xì)胞釋放組胺量比較(±s)

注:慢性蕁麻疹患者血清刺激HMC細(xì)胞釋放組胺量與對(duì)照組比較,a:秩和檢驗(yàn)

組別 例數(shù) 組胺(μg/L) t值 P值慢性蕁麻疹組 50 3.13±0.93 2.39 ＜0.05同時(shí)含抗FcεRI抗體 4 4.52±1.24 4.82a ＜0.01同時(shí)含抗IgE抗體 3 4.02±1.34 6.34a ＜0.01僅抗幽門(mén)螺桿菌抗體 43 3.06±1.25 1.74 ＞0.05健康對(duì)照組 50 2.92±0.75

二、抗Hp-IgG抗體、抗FcεRI抗體、抗IgE抗體刺激HMC細(xì)胞釋放組胺量檢測(cè)結(jié)果

與未加抗體的陰性對(duì)照組比較,抗Hp抗體無(wú)刺激HMC細(xì)胞釋放組胺作用,抗FcεRI抗體和抗IgE抗體均可刺激HMC細(xì)胞釋放組胺,釋放量高于陰性對(duì)照組。見(jiàn)表2。

表2 抗Hp-IgG抗體、抗FcεRI抗體、抗IgE抗體刺激HMC細(xì)胞釋放組胺量比較(±s)

表2 抗Hp-IgG抗體、抗FcεRI抗體、抗IgE抗體刺激HMC細(xì)胞釋放組胺量比較(±s)

注:各抗體刺激HMC細(xì)胞釋放組胺量與陰性對(duì)照組比較

血清抗體 n 組胺(μg/L) t值 P值抗幽門(mén)螺桿菌抗體 30 1.63±0.66 1.95 ＞0.05抗FcεRI抗體 30 6.45±0.80 3.72 ＜0.01抗IgE抗體 30 5.42±0.92 3.02 ＜0.01陰性對(duì)照組 30 1.33±0.61

討 論

回顧有關(guān)Hp感染與CU發(fā)病關(guān)系研究文獻(xiàn),許多研究者認(rèn)為,Hp感染與CU相關(guān)，部分Hp感染的CU患者經(jīng)抗Hp治療后,癥狀可改善或完全緩解,并提出實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)是否存在Hp感染對(duì)于治療CU是有指導(dǎo)作用［1-3］。但研究也表明,抗Hp治療并不是對(duì)所有 Hp 感染的 CU 患者有效［4-5］。Kaplan 等［6］認(rèn)為,抗Hp抗體可活化肥大細(xì)胞釋放組胺,導(dǎo)致CU發(fā)病,但目前還沒(méi)有抗Hp抗體可活化肥大細(xì)胞釋放組胺的直接證據(jù)。本研究首先用患有Hp感染的CU患者血清孵育HMC細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)CU患者血清具有刺激HMC細(xì)胞釋放組胺的作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),50例CU患者中有4例血清抗FcεRI抗體陽(yáng)性,3例抗IgE抗體陽(yáng)性,這7例CU患者血清具有刺激HMC細(xì)胞釋放組胺的作用。而使用僅含抗Hp抗體(IgG)孵育HMC細(xì)胞,無(wú)活化HMC細(xì)胞釋放組胺作用。表明抗FcεRI抗體和抗IgE抗體具有明確的活化肥大細(xì)胞釋放組胺作用,部分Hp感染的CU患者是由這兩種自身抗體引起的。單純抗Hp治療可能對(duì)這兩種自身抗體陽(yáng)性的CU患者無(wú)效［7-8］。Hp感染的CU中部分歸因于血清中存在針對(duì)肥大細(xì)胞自身抗體(抗FcεRI抗體或抗IgE抗體),屬慢性自身免疫性蕁麻疹(CAU)。因此,對(duì)于患Hp感染的CU患者,除常規(guī)抗Hp治療外,自身血清皮膚試驗(yàn)(ASST)有助于對(duì)CU性質(zhì)的鑒別,有利于對(duì)CU的針對(duì)性治療［9］。

［1］Ben Mahmoud L，Ghozzi H，Hakim A，et al.Helicobacter pyloriassociated with chronic urticaria［J］.J Infect Dev Ctries，2011，5(8):596-598.

［2］Campanati A，Gesuita R，Giannoni M，et al.Role of small intestinal bacterial overgrowth andHelicobacter pyloriinfection in chronic spontaneous urticaria:a prospective analysis ［J］.Acta Derm Venereol，2013，93(2):161-164.

［3］ShakouriA，CompalatiE，LangDM，etal.EffectivenessofHelicobacter pylorieradication in chronic urticaria:evidence-based analysis using the Grading of Recommendations Assessment，Development，and Evaluation system［J］.Curr Opin Allergy Clin Immunol，2010，10(4):362-369.

［4］Akashi R，Ishiguro N，Shimizu S，Kawashima M.Clinical study of the relationship betweenHelicobacter pyloriand chronic urticaria and prurigo chronica multiformis:effectiveness of eradication therapy for Helicobacter pylori［J］.J Dermatol，2011，38(8):761-766.

［5］Magen E，Mishal J.Possible benefit from treatment ofHelicobacter pyloriin antihistamine-resistant chronic urticaria ［J］.Clin Exp Dermatol.2013，38(1):7-12.

［6］Kaplan AP，Greaves M.Pathogenesis of chronic urticaria［J］.Clin Exp Allergy，2009，39(6):777-787.

［7］孫麗偉，李杰，康爾恂，等.慢性特發(fā)性蕁麻疹相關(guān)抗體與發(fā)病的關(guān)系［J］.中華皮膚科雜志，2013，46(6):390-393.

［8］康爾恂，李杰，孫麗偉，等.B淋巴細(xì)胞刺激因子對(duì)慢性特發(fā)性蕁麻疹患者抗FcεRI抗體和抗IgE抗體產(chǎn)生的影響［J］.中華皮膚科雜志，2013，46(10):707-710.

［9］Fernando S，Broadfoot A.Chronic urticaria-assessment and treatment［J］.Aust Fam Physician，2010，39(3):135-138.

Effect of sera from chronic urticaria patients with anti-Helicobacter pyloriantibodies on the release of histamine by human mast cells

Kang Erxun*，Chen Hongquan，Yan Liping，Li Jie，Han Chunyu，Xia Xiujuan.*Department of Dermatology，Yantai Yuhuangding Hospital Affiliated to Medical College of Qingdao University，Yantai 264000，Shandong，China

Kang Erxun，Email:kangerxun2000@163.com

Objective To investigate the relationship between anti-Helicobacter pylori(Hp)antibodies and development of chronic urticaria(CU).Methods Fifty CU patients with positive13C-urea breath test and anti-Hp antibodies，as well as 50 healthy human controls were recruited in this study.Serum samples were collected from all the subjects.The samples from the patients were subjected to tests for anti-high affinity IgE receptor(anti-FcεRI)and-IgE antibodies.Human mast cells(HMCs)were classified into several parts to be incubated with the sera of patients with CU，the sera of healthy controls with anti-IgE and-FcεRI antibodies respectively for 20 minutes.Those incubated with the sera of healthy controls without these antibodies served as the control.Subsequently，the levels of histamine released by HMCs were measured by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).Results The sera of CU patients showed a stronger ability to activate HMCs to release histamine than those of healthy controls((3.13±0.93)μg/L vs(2.92 ± 0.75)μg/L，t=2.39，P＜ 0.05).Anti-FcεRI antibodies were detected in 4 patients，and anti-IgE antibodies in 3 patients.A significant increase was observed in the levels of histamine released by HMCs incubated with anti-FcεRI antibody-positive and anti-IgE antibody-positive patient-derived sera(t=4.82，6.34，respectively，bothP＜ 0.01)，but not in those incubated with patient-derived sera only positive for anti-Hp antibodies(t=1.74，P＞ 0.05)compared with those incubated with healthy control-derived sera.In comparison with the antibody-free healthy control-derived sera，those with anti-Hp IgG antibodies showed no significant effect on the release of histamines by HMCs(t=1.95，P＞ 0.05)，whereas those with anti-FcεRI antibodies and anti-IgE antibodies exhibited an obvious promoting effect(t=3.72，3.02，respectively，bothP＜ 0.01).Conclusions The anti-Hp antibodies appears to have no role in the pathogenesis of CU，but the presence of anti-FcεRI and anti-IgE antibodies may contribute to the initiation of CU in patients with Hp infection.

Urticaria；Helicobacter pylori；Antibody；Mast cells

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2014.08.009

山東省科技發(fā)展計(jì)劃(2011GSF11819)

264000山東煙臺(tái),青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬煙臺(tái)毓璜頂醫(yī)院皮膚科(康爾恂、閆麗萍、韓春玉、夏秀娟),檢驗(yàn)科(李杰);青島大學(xué)附屬醫(yī)院皮膚科(陳宏泉)

康爾恂,Email:kangerxun2000@163.com

2013-11-25)

(本文編輯:吳曉初)