徐慶輝

(安徽省黃山市食品藥品檢驗(yàn)研究所，安徽黃山 245000)

香連膠囊由黃連(吳茱萸制)及木香提取加工制成，用于濕熱痢疾，里急后重，腹痛泄瀉;菌痢，腸炎。其中黃連清熱燥濕，瀉火解毒。用于濕熱痞滿，嘔吐吞酸，瀉痢，黃疸，高熱神昏，心火亢盛，心煩不寐，血熱吐衄，目赤，牙痛，消渴，癰腫疔瘡;外治濕疹，濕瘡，耳道流膿。黃連主要成分為鹽酸小檗堿，主要用于治療胃腸炎、細(xì)菌性痢疾等腸道感染、眼結(jié)膜炎、化膿性中耳炎等有效。我們以鹽酸小檗堿為對照品，參照有關(guān)文獻(xiàn)［1－10］，采用 HPLC法測定了香連膠囊中鹽酸小檗堿含量，并以此作為質(zhì)量控制指標(biāo)，試驗(yàn)結(jié)果表明，該法簡便快速，穩(wěn)定可靠。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀，日本島津LC-10AT高效液相色譜儀;SPD-10A紫外檢測器;N2000色譜工作站;AB135-S十萬分之一電子天平;ADVENTURER(AR1140)萬分之一電子天平。

1.2 試藥 鹽酸小檗堿對照品:中國藥品生物制品檢定所，批號:110713－200911(供含量測定用，含量為86.8%);香連膠囊三批樣品:由本公司提供，批號:201202016，201202018，201202020。乙腈為色譜純，美國天地公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

2.1.1 色譜條件 色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(Shim －Pack VP －ODS，250 L ×4.6);流動相為0.05 mol·L－1磷酸二氫鉀溶液 － 乙腈(50∶50，每1 000 mL流動相含十二烷基硫酸鈉1.7 g);檢測波長:在200～400 nm波長進(jìn)行掃描對照品溶液，鹽酸小檗堿的最大吸收波長在265 nm，選擇其為檢測波長;柱溫:25 ℃，流速:1.0 mL·min－1。

2.1.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 在此條件下分別精密吸取下述對照品溶液、陰性對照溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1～3。可見分離良好，陰性對照無干擾，供試品溶液的鹽酸小檗堿峰與相鄰峰達(dá)到基線分離。其保留時(shí)間為14.7 min，色譜柱理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算約為16 000。

圖1 鹽酸小檗堿的HPLC圖譜

圖2 陰性對照的HPLC圖譜

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對照品7.35 mg，置25 mL量瓶中，用甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量1 mL置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，作為對照品溶液。

圖3 供試品的HPLC圖譜

2.3 供試品溶液的制備 取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，碾細(xì)，取0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇－鹽酸(100∶1)的混合溶液50 mL，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇－鹽酸(100∶1)的混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得。

2.4 陰性對照溶液的制備 按本品的制備工藝，制成不含黃連的陰性對照樣品，再按供試品制備方法制成陰性對照溶液。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及線性范圍的考察 精密量取鹽酸小檗堿對照品濃配液適量加甲醇分別稀釋50倍、25倍、10倍、5倍和2倍，搖勻，分別作為供試品溶液。分別吸取上述溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積，以對照品的峰面積(Y)對鹽酸小檗堿對照品濃度(X)回歸，得回歸方程Y=100 147X－16 995，相關(guān)系數(shù)r=1(n=5)，結(jié)果見表1。試驗(yàn)結(jié)果表明，鹽酸小檗堿對照品在所試濃度5.104 ～127.595 mg·L－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表1 鹽酸小檗堿對照品線性考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖4 鹽酸小檗堿對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.6 精密度試驗(yàn)

2.6.1 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批香連膠囊樣品(201202016批)，照含量測定項(xiàng)下的測定方法，測定6次，記錄色譜圖。含量分別為 48.59、48.46、48.58、48.56、48.69、48.67 mg/粒，SD 為 0.08%，RSD為0.17%。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.6.2 中間精密度試驗(yàn) 由兩人在不同時(shí)間不同儀器進(jìn)行同一批樣品的6次含量測定，數(shù)據(jù)及結(jié)果見表2。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法中間精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取對照品及供試品溶液分別于0、2、4、6、8、10 h 進(jìn)樣，記錄峰面積積分值，對照品溶液分別為 2 543 733、2 545 687、2 545 370、2 543 954、2 541 189、2 550 710，RSD 為 0.12%;供照品溶液分別為 3 429 677、3 422 319、3 421 170、3 418 003、3 415 099、3 417 387，RSD 為0.15%。試驗(yàn)結(jié)果表明:樣品溶液在所試10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批號(201202016批)樣品(含量為48.59 mg/粒)，取6份，每份稱取0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別加入鹽酸小檗堿對照品適量置相應(yīng)的錐形瓶中，精密加甲醇－鹽酸(100∶1)的混合溶液50 mL，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇 －鹽酸(100∶1)的混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，精密量取續(xù)濾液1 mL置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得。分別取供試品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積計(jì)算本法的回收率，結(jié)果見表3。平均回收率99.58%，RSD為0.83%，試驗(yàn)結(jié)果表明，本法測定鹽酸小檗堿含量方法的準(zhǔn)確度良好。

表2 中間精密度試驗(yàn)

表3 準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測定及含量限度的確定 按上述確定的色譜條件和測定方法，對香連膠囊三批樣品中鹽酸小檗堿的含量進(jìn)行測定，結(jié)果見表4。試驗(yàn)結(jié)果表明:三批樣品的含鹽酸小檗堿量符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的本品每粒含黃連以鹽酸小檗堿(C20H18ClNO4)計(jì)，應(yīng)不得少于 40.0 mg。

表4 三批樣品含量測定結(jié)果

3 討論

供試品的提取中采用甲醇鹽酸溶液，因?yàn)辂}酸小檗堿為強(qiáng)酸弱堿鹽，以含1%鹽酸的甲醇溶液進(jìn)行提取有利于鹽酸小檗堿的溶出完全，并可顯著減少其他雜質(zhì)峰的干擾，保證方法的準(zhǔn)備性。

本法測定香連膠囊中鹽酸小檗堿含量簡單迅速、分離度好，可用于香連膠囊鹽酸小檗堿含量的測定。

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