宋魏 于慶凱

·臨床醫(yī)學(xué)·

EB病毒誘發(fā)人彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤的分子病理特性探索

宋魏 于慶凱

目的 探討EB病毒誘發(fā)人彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)的分子病理特性。方法 50例EB病毒誘發(fā)人DLBCL患者, 應(yīng)用EBV原位雜交技術(shù)、免疫組化及實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法, 并對分子病理特性展開探討。結(jié)果 50例EB陽性DLBCL病例中病變僅累及淋巴結(jié)11例, 僅位于淋巴結(jié)外器官19例, 既有淋巴結(jié)病變又伴結(jié)外累及20例。中位生存35個(gè)月。分析組織學(xué)特征：可見多形性淋巴樣細(xì)胞散在或彌漫浸潤性分布, 背景部分情況下可見嗜酸細(xì)胞。本組多形性亞型15例, 大細(xì)胞亞型34例, 混合亞型1例。免疫表型：40例老年EB陽性DLBCL組中bcl-6表達(dá)為15%, 較非老年組40%低, 但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。老年EB陽性DLBCL組中血EBV病毒DNA檢出率為50%, 明顯高于非老年組檢出率10%, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 老年EB陽性DLBCL屬臨床病理特征獨(dú)特的DLBCL亞型, 但與非老年EB陽性DLBCL有一定相似性, 需結(jié)合免疫學(xué)、臨床等資料, 與其他類型淋巴瘤鑒別。

EB病毒；人彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤；分子病理特性

彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL)是一組異質(zhì)性較明顯的腫瘤實(shí)體, 是非霍奇金淋巴瘤病發(fā)率較高的類型, 可依據(jù)分子遺傳學(xué)、組織學(xué)、臨床、免疫表型按亞型或多種變異型劃分。EB誘發(fā)的DLBCL在生物學(xué)及形態(tài)學(xué)特征上可能與DLBCL其他亞型不同, 其具有侵襲性更強(qiáng)、年齡分布更高、生存率更低等特征［1］。本次研究選取50例EB誘發(fā)的DLBCL病例, 就其分子病理特性展開探討,現(xiàn)將結(jié)果總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本次選取50例EB病毒誘發(fā)的DLBCL患者,男28例, 女22例, 年齡52～88歲, 平均年齡(73.2±3.8)歲,其中年齡＞60歲40例, 中位年齡70歲。依據(jù)2008年WHO制定的造血與淋巴組織腫瘤新分類標(biāo)準(zhǔn), 對免疫表型和組織學(xué)表型確診。均采用CHOP方案治療, 即環(huán)磷酰胺藥物+多柔比星藥物+長春新堿藥物+潑尼松, 可取CHOP應(yīng)用, 開展聯(lián)合化療。對患者一般資料進(jìn)行收集。

1.2 方法 ①EBV原位雜交：病變組織中相關(guān)EBVmRNA表達(dá)采用EBV寡核苷酸探針原位雜交技術(shù)(EBER1/2)。常規(guī)脫蠟水化, 蛋白酶K 4 g/L, 37℃, 行30 min消化, 乙醇脫水,干燥, 再探針滴加, 孵育3 h, 溫度為55℃, 漂洗后取抗FITC/ HRP抗體滴加, 室溫行30 min孵育, 實(shí)施DAB顯色, 應(yīng)用蘇木精完成對比染色處理, 試劑盒中提供陽性對照片, 予以陽性對照, 探針對PBS代替, 完成陰性對照。②免疫組織學(xué)染色：本操作應(yīng)用免疫組代Envision法進(jìn)行。以pH 9.0的Tris-EDTA微波修復(fù)20 min為抗原修復(fù)條件, Dako免疫組織化學(xué)儀上完成相關(guān)檢測操作。③實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)：采用此技術(shù)對淋巴細(xì)胞中EB 病毒游離DNA 進(jìn)行定量測定。反應(yīng)條件為93℃ 3 min, 93℃ 45 s, 55℃ 2 min, 共40 個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后, 用計(jì)算機(jī)將樣本和標(biāo)準(zhǔn)曲線對比, 計(jì)算出反應(yīng)體系中待測標(biāo)本中DNA 的拷貝數(shù)。PCR 反應(yīng)總體積為50 μl, 含10 μl PCR 緩沖液, 引物和對應(yīng)的熒光標(biāo)記探針各10 pmol。dATP、dCTP、dGTP 和dUTP 各200 μmol/L, Tap 聚合酶5 U, DNA 模板5 μl, 吸取抽提的DNA 5 μl置入PCR的反應(yīng)管中,在ABI7300 自動熒光PCR 儀上進(jìn)行擴(kuò)增。判別標(biāo)準(zhǔn)定義為：DNA水平＞1×103copy/ml為陽性, DNA≤1×103copy/ml 為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

50例EB陽性DLBCL病例中, 病變僅累及淋巴結(jié)11例,僅位于淋巴結(jié)外器官19例, 既有淋巴結(jié)病變又伴結(jié)外累及20例。中位生存35個(gè)月。分析組織學(xué)特征：可見多形性淋巴樣細(xì)胞散在或彌漫浸潤性分布, 背景部分情況下可見嗜酸細(xì)胞。本組多形性亞型15例, 大細(xì)胞亞型34例, 混合亞型1例。免疫表型：40例老年EB陽性DLBCL組中bcl-6表達(dá)為15%, 較非老年組40%低, 但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。老年EB陽性DLBCL組中血EBV病毒DNA檢出率為50%, 明顯高于非老年組檢出率10%, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討論

本次選取病例中, 老年人占80%, 老年EB病毒誘發(fā)的DLBCL屬新的DLBCL亞型, 隨著年齡增大, EB陽性DLBCL發(fā)病人數(shù)增多, 且年齡增長造成的免疫系統(tǒng)衰老或衰退屬全球現(xiàn)象, 本研究40例老年EB陽性DLBCL病例年齡均＞60歲,中位年齡70歲, 相較＜60歲人群, ＞60歲外周血單核細(xì)胞等EBV DNA有較高檢出率。而青少年在EBV感染時(shí), 造成的EBV核抗原2IgG抗體多呈終生存在表現(xiàn), 而已證實(shí)EBV與多種淋巴造血系統(tǒng)腫瘤有較為密切的關(guān)聯(lián), 即隨年齡增長,老年人EB陽性DLBCL的發(fā)生發(fā)展與人體免疫系統(tǒng)的退化和衰老關(guān)聯(lián)密切［2,3］。

本次研究中約1/3患者病變累及的結(jié)外器官在一個(gè)以上, 乳腺、扁桃體、甲狀腺、鼻咽、胃、皮膚、胸腔、支氣管等為結(jié)外常見累及部位, 與國外報(bào)道一致。與EBV陰性DLBCL比較, EB陽性DLBCL同樣具更侵襲性特征、更高發(fā)病年齡和更差預(yù)后, 一般患病年齡＞70歲, 在臨床被認(rèn)為是老年EB陽性DLBCL多變量和單變量分析較為可靠的預(yù)后因素, 但結(jié)果顯示, 雖＞70歲患者有更差預(yù)后, 但相較＜70歲患者, 生存率差異不明顯。EB可能為老年EB病毒誘發(fā)DLBCL患者預(yù)后差和侵襲性臨床過程的關(guān)鍵因素, B淋巴細(xì)胞在感染EBV后, 可向淋巴母樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化, EBV病毒基因向B淋巴細(xì)胞整合后, 可上調(diào)病毒基因編碼的蛋白, 再將細(xì)胞內(nèi)多處信號通路級聯(lián)反應(yīng)激活, 進(jìn)而造成細(xì)胞凋亡與細(xì)胞增殖等多種細(xì)胞內(nèi)生命過程的失衡或異常, 參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程。在免疫組織學(xué)分型上, 老年EB誘發(fā)DLBCL免疫表型與生物學(xué)行為及臨床特征一致。

綜上所述, 老年EB陽性DLBCL屬臨床病理特征獨(dú)特的DLBCL亞型, 但與非老年EB陽性DLBCL有一定相似性, 需結(jié)合免疫學(xué)、臨床等資料, 與其他類型淋巴瘤鑒別。

［1］ 林云, 楊文萍, 黃慧, 等.EB病毒感染相關(guān)的兒童散發(fā)性伯基特淋巴瘤中miR-127和miR-155表達(dá)及意義.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志, 2013, 29(10):1076-1080.

［2］ 徐方平, 劉艷輝, 莊恒國, 等.老年人EB病毒陽性彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的臨床病理特征.中華病理學(xué)雜志, 2011, 40(9):616-621.

［3］ 程波, 孫鎖柱, 丁姍姍, 等.老年性EB病毒陽性的彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤1例.診斷病理學(xué)雜志, 2013, 20(3):189-190.

2014-08-22］

河南省衛(wèi)生廳科技攻關(guān)項(xiàng)目(項(xiàng)目編號：200803121)

450008 鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院病理科

于慶凱