吳艷霞 吳冬梅 鄧小青

廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，廣東湛江 524001

鼻咽癌是我國(guó)常見的惡性程度較高的腫瘤之一，由于該病早期臨床癥狀不明顯，往往被確診時(shí)已至中晚期，因此治愈率低，患者的預(yù)后較差[1]。有研究顯示，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C(VEGFC)是淋巴管、血管內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)節(jié)因子的一種，也是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子/血小板源生長(zhǎng)因子(VEGF/PDGF)家族的新成員，當(dāng)VEGF-C與VEGFR-3 結(jié)合后，對(duì)淋巴管的生成會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)大的作用，與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及擴(kuò)散有著密切的關(guān)系[2]。該研究通過對(duì)該院2008年1月—2012年12月收治的46 例鼻咽癌患者與42 例鼻咽癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者組織進(jìn)行VEGF-C 檢測(cè)，探討分析VEGF-C 表達(dá)與鼻咽癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇該院收治的鼻咽癌患者46 例為研究對(duì)象，作為鼻咽癌組，其中男26 例，女20 例，年齡25~67 歲，平均年齡（53.1±11.8）歲，WHO 分類：未分化型非角化性癌22 例，分化型非角化性癌18 例，角化性鱗狀細(xì)胞癌6 例；TNM 分期：I~Ⅱ期26 例，Ⅲ~Ⅳ期20 例；同期選擇該院收治的鼻咽癌并發(fā)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者42 例為頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，其中男性32 例，女10 例，年齡29~62 歲，平均年齡（37.8±20.0）歲，WHO 分類：未分化型非角化性癌20 例，分化型非角化性癌17 例，角化性鱗狀細(xì)胞癌6 例；TNM 分期：I~Ⅱ期23 例，Ⅲ~Ⅳ期19 例。所有患者活檢前均未接受放化療及其他治療,同時(shí)，所有患者軍簽署知情同意書，并該研究獲得該院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

所有患者均抽取空腹靜脈血4 mL，采用免疫組化染色法SP法進(jìn)行檢測(cè)，具體操作如下：將制作好的石蠟切片，置于恒溫箱內(nèi)60 ℃烘烤30 min，并浸入二甲苯溶液內(nèi)脫蠟并水化；加入過氧化物酶阻斷劑，室溫孵育20 min，以抑制內(nèi)源性過氧化物酶活，并采用檸檬酸緩沖液微波加熱進(jìn)行修復(fù)抗原；選用非免疫性動(dòng)物血清封閉10 min，PBS 洗滌； 加入經(jīng)抗體稀釋液稀釋至1∶100 的VEGF-C 兔抗人多克隆抗體，4 ℃孵育12 h，PBS 重復(fù)洗滌3 次；加入生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育20 min，PBS 重復(fù)洗滌3 次；滴加鏈親和素-過氧化物酶溶液，室溫孵育20 min；再經(jīng)DAB 顯色 （濃縮型DAB 試劑盒購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)有限公司），蘇木素復(fù)染，封片操作后，與熒光顯微鏡下觀察并拍照。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

采用染色陽(yáng)性大腸癌組織切片為陽(yáng)性對(duì)照片，陰性對(duì)照片以非免疫血清代替一抗。陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)均呈棕褐色或棕黃色顆粒。將每一切片選擇3 個(gè)視野，顯微鏡×400，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100 個(gè)腫瘤細(xì)胞，共選擇3 個(gè)視野的平均百分?jǐn)?shù)進(jìn)行結(jié)果判定[3]：①依據(jù)棕陽(yáng)性黃色的面積及強(qiáng)弱判定：陰性：陽(yáng)性細(xì)胞<10%；陽(yáng)性：10%~50%；強(qiáng)陽(yáng)：>50%。按陽(yáng)性細(xì)胞百分率進(jìn)行結(jié)果判定：0 分：<10%；1 分：10%~50%；2 分：>50%；②計(jì)分根據(jù)染色強(qiáng)弱：0 分：淡黃色；1 分：黃色；2 分：棕黃色。陰性：以上兩項(xiàng)合計(jì)0~1 分；陽(yáng)性：合計(jì)2~3 分；強(qiáng)陽(yáng)性：合計(jì)4 分。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

運(yùn)用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析處理所得數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，組間對(duì)比采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者VEGF-C 的表達(dá)比較

頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者VEGF-C 表達(dá)陽(yáng)性者34 例，陽(yáng)性率達(dá)到80.95%，而鼻咽癌組患者中VEGF-C 表達(dá)陽(yáng)性者20 例，陽(yáng)性率僅為43.48%，組間對(duì)比發(fā)現(xiàn)，頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽(yáng)性率顯著高于鼻咽癌組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.004，P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者VEGF-C 表達(dá)比較[n（%）]

2.2 鼻咽癌組無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、伴有淋巴轉(zhuǎn)移患者VEGF-C 表達(dá)

對(duì)于鼻咽癌組患者，按照有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分組，各組間的VEGF，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的VEGF-C 表達(dá)呈陽(yáng)性者15 例，陽(yáng)性率為57.69%，顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組10%（2 例），組間對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 11.036，P<0.05)。見表2。

表2 鼻咽癌組無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移VEGF-C 表達(dá)比較[n（%）]

3 討論

鼻咽癌是臨床較為常見的惡性腫瘤，尤其在我國(guó)南部地區(qū)發(fā)病率較高，目前對(duì)于鼻咽癌的治療仍多以放療為主，但據(jù)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)放療治療后患者的五年生存率僅為50%左右，多數(shù)患者因復(fù)發(fā)或者遠(yuǎn)位轉(zhuǎn)移而導(dǎo)致治療失敗[4]。頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是鼻咽癌轉(zhuǎn)移的首發(fā)癥狀，占到鼻咽癌轉(zhuǎn)移的60.30%~86.10%，且大多為雙側(cè)轉(zhuǎn)移[5]。此外，頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移往往發(fā)生在鼻咽癌早期，往往鼻咽部尚未發(fā)現(xiàn)病灶時(shí)，并可表現(xiàn)出頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[6]。因此，早期進(jìn)行淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷和控制，對(duì)于鼻咽癌的預(yù)防和治療具有重要意義。

VEGF-C 是目前研究發(fā)現(xiàn)的新的VEGF 家族成員，具有特異的淋巴管生成作用，逐漸被廣泛關(guān)注。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGFC 被認(rèn)為與腫瘤的新生淋巴管形成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。VEGFR-2、VEGFR-3 都是VEGF-C 的受體，促進(jìn)機(jī)體的血管生成的原因是VEGF-C 與VEGFR-2 結(jié)合，促進(jìn)機(jī)體淋巴管的生成則是VEGF-C 與VEGFR-3 結(jié)合[7]。目前，大多數(shù)惡性腫瘤如：肺癌、結(jié)直腸癌、胃癌、前列腺癌、乳腺癌、纖維肉瘤及惡性黑色素瘤等組織中VEGF-C 檢測(cè)值均顯著高于正常組織，VEGF-C 高表達(dá)與腫瘤淋巴管形成、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和患者的預(yù)后關(guān)系密切[8]。王文歡[9]等通過對(duì)32 例胃癌患者的VEGF-C 在胃癌組織中的表達(dá)及其與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系研究中發(fā)現(xiàn)，胃癌組織VEGF-C表達(dá)明顯高于正常胃組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的VEGF-C 的表達(dá)與未轉(zhuǎn)移組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明胃癌細(xì)胞VEGF-C 高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),可作為評(píng)估胃癌患者預(yù)后的重要參考指標(biāo)。祝英杰[10]等通過對(duì)卵巢癌患者血清VEGF-C 水平與卵巢癌腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間的相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌患者血清VEGF-C 水平明顯高于良性對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，以血清VEGF-C 濃度為2 400 pg/mL 作為分界值，血清VEGF-C>2 400 pg/mL 組的腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高達(dá)77.78%，較血清VEGF-C ≤2 400 pg/mL 組（27.78%）顯著降低，表明血清VEFG-C 水平能夠有效預(yù)測(cè)卵巢癌腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。此外，李文光[11]等研究發(fā)現(xiàn)，鼻咽癌組織中VEGF-C 及其受體Flt-4 的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的VEGF-C 陽(yáng)性率顯著高于未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，表明VEGF-C 的高表達(dá)可能參與促進(jìn)鼻咽癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。因此，檢測(cè)VEGF-C 在鼻咽癌組織中的表達(dá)可能會(huì)在預(yù)測(cè)鼻咽癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、 復(fù)發(fā)及評(píng)估預(yù)后等方面具有一定的意義,并可能為鼻咽癌提供新的治療措施。

該研究結(jié)果也顯示，鼻咽癌組中，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的VEGF-C 陽(yáng)性率為57.69%（15 例），顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組10%（2 例），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同時(shí)，頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF-C 陽(yáng)性率為80.95%（34 例），顯著高于鼻咽癌組43.48%（20 例），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示，VEGF-C 陽(yáng)性率在鼻咽癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者組織表達(dá)值較高。田峰[12]等通過對(duì)鼻咽癌(NPC)患者外周血血清VEGF-C 表達(dá)水平的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，鼻咽癌患者血清中VEGF-C 表達(dá)水平較良性疾病對(duì)照組、 健康對(duì)照組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無(wú)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，相關(guān)性分先發(fā)現(xiàn)兩者間成正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=0.756，P<0.05)，結(jié)論與該研究相一致。此外，肖蕓[13]等通過對(duì)26 例未化療鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者采用免疫組化發(fā)進(jìn)行VEGF-C 檢測(cè)，并將檢測(cè)結(jié)果與未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移組VEGF-C 陽(yáng)性率顯著高于未轉(zhuǎn)移組。這些都表明鼻咽癌組織內(nèi)VEGF-C 表達(dá)水平的升高，能夠有效促進(jìn)其向頸淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，但具體機(jī)制還需進(jìn)一步的深入研究證實(shí)。

綜上所述，鼻咽癌頸部淋巴轉(zhuǎn)移患者的組織內(nèi)VEGF-C 表達(dá)量顯著升高，同時(shí)對(duì)于伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者VEGF-C表達(dá)量也較未發(fā)生轉(zhuǎn)移者升高，表明鼻咽癌患者組織中VEGF-C的表達(dá)與頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有一定的相關(guān)行，其檢測(cè)可用于臨床診斷鼻咽癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

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