周 蕾 俞 嵐 魏 軍 于東紅

(蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科 蚌埠醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，安徽 蚌埠 233030)

研究證實(shí)幽門(mén)螺桿菌(H.pylori)及其L型感染與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)，骨橋蛋白(OPN)及基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的與惡性腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的蛋白。本實(shí)驗(yàn)主要探討Hp-L型感染對(duì)OPN、MMPs表達(dá)的影響以及它們?cè)谖赴┣忠u、轉(zhuǎn)移中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 120例胃癌標(biāo)本挑選自我科2006～2007年確診為胃癌的手術(shù)存檔蠟塊。所有蠟塊經(jīng)重新切片復(fù)查，每例連續(xù)切片數(shù)張，4 μm厚進(jìn)行革蘭染色及免疫組化染色。免疫組化主要試劑:MMP-2鼠抗人單克隆濃縮型抗體購(gòu)自福州邁新生物有限公司。OPN鼠抗人單克隆濃縮型抗體(sc 21742)購(gòu)自Santa Cruz生物科技公司(工作濃度為1∶100)。H.pylori-L多克隆抗體，由蚌埠醫(yī)學(xué)院微生物教研室?guī)椭谱鳌?/p>

1.2 革蘭染色 檢測(cè)胃癌組織中H.pylori-L型感染情況，油鏡(10×100)觀(guān)察并計(jì)數(shù)，每例隨機(jī)觀(guān)察10～15個(gè)視野，取平均數(shù);H.pylori-L型和 Hp平均數(shù)≥20為陽(yáng)性，＜20或未查見(jiàn)H.pylori-L型和Hp為陰性，H.pylori-L型形態(tài)多樣，大小不等，有巨型體、圓球體、短棒狀等，革蘭陰性呈紅色，陽(yáng)性呈紫色;Hp則呈螺旋形、“S”形或海鷗形(見(jiàn)圖1)。

1.3 免疫組化染色 檢測(cè)MMP-2和OPN表達(dá)，陽(yáng)性染色見(jiàn)于腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，呈棕黃色顆粒;切片中細(xì)胞陽(yáng)性數(shù)≤10%為(-)，細(xì)胞陽(yáng)性數(shù)＞10%為(+)。H.pylori-L型抗原免疫組化的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為:在癌巢或間質(zhì)中見(jiàn)到棕黃色顆粒為H.pylori-L型抗原表達(dá)陽(yáng)性。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn) 革蘭染色H.pylori-L型檢出和免疫組化H.pylori-L型抗原表達(dá)同時(shí)陽(yáng)性者定為H.pylori-L型感染陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用四格表資料χ2檢驗(yàn)分析。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織H.pylori-L型感染陽(yáng)性率、形態(tài)及在組織中的分布 革蘭染色切片發(fā)現(xiàn)H.pylori-L型可散在分布于癌性腺腔、癌巢和間質(zhì)中，亦可聚集于其中，同時(shí)可見(jiàn)H.pylori-L型黏附于胃癌細(xì)胞表面或位于癌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)(見(jiàn)圖1)。胃癌組織中有88例革蘭染色檢出L型，檢出陽(yáng)性率為73.33%(88/120)，免疫組化H.pylori-L型抗原表達(dá)陽(yáng)性85例(見(jiàn)圖2)，其陽(yáng)性率為70.83%(85/120)，革蘭染色L型檢出和H.pylori-L型抗原表達(dá)同時(shí)陽(yáng)性的病例有82例(68.33%)(兩者同時(shí)陽(yáng)性被定為H.pylori-L型感染陽(yáng)性)。

圖1 胃癌癌巢內(nèi)的Hp-L型，部分黏附于癌細(xì)胞表面(箭頭)(革蘭染色，×1 000)

2.2 胃癌組織H.pylori-L型感染、OPN和MMP-2表達(dá)與臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系 從表1可見(jiàn)，胃癌中H.pylori-L型陽(yáng)性、OPN和MMP-2陽(yáng)性(見(jiàn)圖2)與腫瘤大小、癌細(xì)胞的血管侵犯、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，腫瘤直徑大于3 cm者多于小于3 cm者;侵及漿膜者多于未侵及漿膜者;累及血管者多于未累及者;發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者多于無(wú)轉(zhuǎn)移者，以上各組經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05)。

2.3 H.pylori-L型感染與腫瘤組織中OPN、MMP-2表達(dá)之間的關(guān)系 H.pylori-L型感染陽(yáng)性組中OPN陽(yáng)性和MMP-2陽(yáng)性的例數(shù)(58例和61例)高于H.pylori-L型感染陰性組(16例和15例)。兩組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.005)。H.pylori-L型感染與OPN和MMP-2陽(yáng)性表達(dá)率均有相關(guān)關(guān)系(r=0.27，r=0.34)。

表1 Hp-L型感染、OPN和MMP-2陽(yáng)性表達(dá)與胃癌臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系

3 討論

胃癌是我國(guó)十大惡性腫瘤之一，其發(fā)病率及死亡率均居前三位。大量的研究顯示幽門(mén)螺桿菌(Hp)感染是胃癌發(fā)病的重要原因〔1，2〕。而Hp-L型是Hp適應(yīng)外界不良條件的一種自我保護(hù)形式，形態(tài)多樣性，對(duì)環(huán)境抵抗力強(qiáng)，對(duì)抗生素等具有較強(qiáng)的抵抗力〔3，4〕。

OPN是一分泌性細(xì)胞因子，自被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，人們對(duì)它的認(rèn)識(shí)不斷深入，目前研究〔5，6〕認(rèn)為OPN參與人體多種腫瘤的轉(zhuǎn)化、侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程，它在一定程度上能夠反映腫瘤的惡性程度。OPN可能是一個(gè)很好的腫瘤轉(zhuǎn)移標(biāo)志物及監(jiān)測(cè)腫瘤預(yù)后的指標(biāo)。Denhardt等〔6〕認(rèn)為，無(wú)論是細(xì)胞、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)還是臨床實(shí)體腫瘤研究，均發(fā)現(xiàn)OPN與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系十分密切。Angelucci等〔7〕發(fā)現(xiàn)當(dāng)OPN的RGD序列被其受體整合素αvβ3識(shí)別或與CD44突變體結(jié)合后，可通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的黏附、細(xì)胞外基質(zhì)的降解，抑制細(xì)胞凋亡等途徑參與腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。OPN的表達(dá)與惡性腫瘤的許多臨床特征密切相關(guān)。有研究報(bào)道，在肝癌〔8〕、乳腺癌卵巢癌〔9〕等腫瘤中，OPN的表達(dá)與預(yù)后關(guān)系密切，復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移者中血或組織中的表達(dá)水平顯著升高。

MMPs家族中以MMP-2蛋白為代表，以酶原形式分泌，被激活后形成Ⅳ型膠原酶，降解、破壞靠近腫瘤表面細(xì)胞外基質(zhì)中的Ⅳ型、Ⅴ型膠原和明膠，然后腫瘤細(xì)胞沿著缺失的基膜向周?chē)?rùn)，最終導(dǎo)致腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移〔10〕。目前有研究證明許多惡性腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移與MMP2高表達(dá)有關(guān)〔11〕，例如在直腸癌和乳腺癌組織中均有MMP2過(guò)度表達(dá)〔12〕，并與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

本文結(jié)果說(shuō)明，H.pylori-L型感染可促進(jìn)胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，H.pylori-L型感染可促進(jìn)胃癌組織中OPN和MMP2的表達(dá)。OPN、MMP2的表達(dá)可促進(jìn)胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。

綜上，Hp-L型感染可導(dǎo)致胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)，其機(jī)制之一可能是增加胃癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白OPN、MMP2的表達(dá)。

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