張新宇，張 笛，王 琳，徐作華，劉 坤，曾慶梅，*

（1.安徽省芬格欣普藍(lán)生物藥業(yè)有限公司，安徽阜陽(yáng)236500；2.合肥工業(yè)大學(xué)農(nóng)產(chǎn)品生物化工教育部工程研究中心，安徽合肥230009）

絞股藍(lán)皂苷提取純化工藝研究進(jìn)展

張新宇1，張 笛2，王 琳2，徐作華1，劉 坤2，曾慶梅2，*

（1.安徽省芬格欣普藍(lán)生物藥業(yè)有限公司，安徽阜陽(yáng)236500；2.合肥工業(yè)大學(xué)農(nóng)產(chǎn)品生物化工教育部工程研究中心，安徽合肥230009）

絞股藍(lán)皂苷是絞股藍(lán)主要的活性物質(zhì)，因其具有抗疲勞、抗衰老、抗誘變，提高機(jī)體免疫能力、調(diào)節(jié)心腦血管和改善神經(jīng)系統(tǒng)等獨(dú)特的生理調(diào)節(jié)功效，有巨大的開(kāi)發(fā)價(jià)值和應(yīng)用潛力。本文從提取工藝、純化工藝兩個(gè)方面綜述了絞股藍(lán)皂苷的研究進(jìn)展，為進(jìn)一步研究絞股藍(lán)皂苷提取、純化工藝提供了線(xiàn)索和依據(jù)。

絞股藍(lán)皂苷，提取，純化

絞股藍(lán)又名七葉膽、五葉參，是葫蘆科絞股藍(lán)屬多年生草質(zhì)藤木，在我國(guó)陜西、四川、湖南、廣西、云南等省均有分布，有“南方人參”的美譽(yù)，在日本被譽(yù)為“福音草”[1]。有關(guān)絞股藍(lán)皂苷的研究日本走在了世界前列，早在20世紀(jì)70年代后期，日本學(xué)者已從該植物中分離出80多種皂甙，發(fā)現(xiàn)有4種絞股藍(lán)皂苷分別與人參皂苷Rb1、Rb3、Rd和F2的結(jié)構(gòu)完全相同，并且絞股藍(lán)總皂苷含量是人參的3倍[2-4]。現(xiàn)代藥理、毒理及臨床實(shí)驗(yàn)證明：絞股藍(lán)主要有效成分為絞股藍(lán)皂苷，具有抗疲勞、抗衰老、抗誘變、提高機(jī)體免疫能力、調(diào)節(jié)心腦血管和改善神經(jīng)系統(tǒng)等作用[5-6]。絞股藍(lán)皂苷因其獨(dú)特的功效，可開(kāi)發(fā)用于絞股藍(lán)茶制品、功能性口服液、保健酒、抗衰老化妝品、飼料添加劑等[7-8]。但目前，絞股藍(lán)更多的是簡(jiǎn)單加工為絞股藍(lán)茶，而對(duì)于其中有效成分絞股藍(lán)皂苷的提取、純化及加工利用程度還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，因此研究開(kāi)發(fā)較好的絞股藍(lán)皂苷提取和純化工藝對(duì)絞股藍(lán)深入開(kāi)發(fā)具有重要意義。目前對(duì)絞股藍(lán)皂苷的綜述文章主要關(guān)注于絞股藍(lán)皂苷的藥理功能及簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn)提取，而忽略絞股藍(lán)皂苷提取工藝的工化應(yīng)用，進(jìn)一步純化方面的綜述文章也鮮有報(bào)道，本文充分結(jié)合工藝應(yīng)用和裝置的可行性對(duì)絞股藍(lán)皂苷提取、純化的研究進(jìn)行綜述。

1 絞股藍(lán)皂苷提取方法

絞股藍(lán)皂苷的提取主要是根據(jù)極性相似相溶原理，選用對(duì)目標(biāo)組分溶解度大，對(duì)不需要組分溶解度小的溶劑，并輔助一定的破壁措施將絞股藍(lán)皂苷從絞股藍(lán)組織細(xì)胞提取出來(lái)。目前已有報(bào)道的絞股藍(lán)皂苷提取方法有溶劑熱提取、超聲波提取、酶法提取、微波提取、超臨界流體萃取及超高壓提取。其中超臨界流體萃取及超高壓提取可以作為絞股藍(lán)皂苷提取的重點(diǎn)研究?jī)?nèi)容。

1.1 溶劑熱提取

絞股藍(lán)皂苷含有多個(gè)糖基，極性較大，可溶于水、甲醇、乙醇等溶劑，因此溶劑熱提取絞股藍(lán)皂苷時(shí)，常用水提和醇提，采取煎煮、回流提取、索氏提取等措施。水提法因其工藝簡(jiǎn)單、成本較低、無(wú)溶劑污染，而被作為粗提的常用方法，林碩等[9]通過(guò)考察料液比、提取時(shí)間和提取溫度對(duì)水提效果的影響，在最優(yōu)化條件下絞股藍(lán)皂苷得率為7.79%，純度為26.85%。但水提取液中常含有無(wú)機(jī)鹽、糖、蛋白質(zhì)等水溶性雜質(zhì)，另外水提液還常含有黏液，濃縮時(shí)易產(chǎn)生泡沫，給下一步濃縮分離帶來(lái)困難。為了克服單純水提的弊端，提高提取液的穩(wěn)定性，劉曉穎[10]、仇小艷等[11]采用一定質(zhì)量分?jǐn)?shù)的甲醇、乙醇分別提取絞股藍(lán)皂苷，比較了80%甲醇、75%乙醇提取絞股藍(lán)總皂苷的不同效果，通過(guò)測(cè)定發(fā)現(xiàn)75%乙醇和80%甲醇提取效果明顯高于水提，且乙醇提取效果高于甲醇，如用乙醇回流提取絞股藍(lán)皂苷可獲得更優(yōu)提取效果。另外，采用一定質(zhì)量分?jǐn)?shù)的乙醇提取可防止形成加合物[12]，乙醇較強(qiáng)的揮發(fā)性也便于以后的分離純化和回收再利用，減少了生產(chǎn)成本。另外還可采用連續(xù)逆流提取，增加提取次數(shù)，充分利用溶劑。

因原料的粉碎度、溶劑濃度、料液比、提取溫度、時(shí)間、次數(shù)、提取方式以及設(shè)備條件等因素都能影響提取效率，所以必須加以綜合考慮[13-14]。溶劑熱法提取絞股藍(lán)皂苷工藝相對(duì)簡(jiǎn)單，設(shè)備要求低，便于工業(yè)化生產(chǎn)，但溶劑熱提取難以取得理想的破壁效果，存在耗時(shí)長(zhǎng)，能耗高，提取率低，溶劑損耗大等問(wèn)題，需要輔助其他更有效的破壁提取措施來(lái)克服單純?nèi)軇崽崛〉娜秉c(diǎn)。

1.2 超聲波提取

超聲波的作用是輔助溶劑提取，彌補(bǔ)單純?nèi)軇崽崛∑票诓焕硐氲娜毕荨３暡ǖ目栈?yīng)及引起的一系列次級(jí)效應(yīng)能實(shí)現(xiàn)破壁、加速提取成分的擴(kuò)散釋放的作用。另外，超聲波也可以轉(zhuǎn)化為熱能加快樣品中有效成分的擴(kuò)散速度，從而更高效、快速提取植物細(xì)胞內(nèi)容物[15-16]。陳艷莉[17]利用超聲法提取絞股藍(lán)皂苷，可以大大縮短提取時(shí)間，并提高絞股藍(lán)皂苷的浸出率，且隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)皂苷提取率相應(yīng)提高，但并不是無(wú)限提高，所以選擇合適的超聲時(shí)間也很重要。林碩等[18]選擇不同頻率的超聲波進(jìn)行提取，并與傳統(tǒng)水浴提取的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)超聲波頻率對(duì)絞股藍(lán)皂苷的提取過(guò)程有顯著影響，28kHz超聲波對(duì)絞股藍(lán)皂苷提取過(guò)程的強(qiáng)化作用明顯，但40kHz時(shí)超聲波提取效果與傳統(tǒng)水浴提取無(wú)明顯差異，超聲波提取絞股藍(lán)皂苷工藝提取結(jié)果穩(wěn)定、重現(xiàn)性好。

需要注意的是，超聲波提取雖無(wú)需額外的熱源，但由于超聲波的熱效應(yīng)，必須合理優(yōu)化超聲功率和時(shí)間，適當(dāng)控制溫度不要超出一定范圍，防止皂苷過(guò)熱分解。另外，容器壁的厚薄及容器在超聲波裝置中的位置都會(huì)影響超聲提取的結(jié)果，而且目前實(shí)驗(yàn)研究都是處于小規(guī)模，要用于大規(guī)模生產(chǎn)，還有待于進(jìn)一步解決工程設(shè)備的放大問(wèn)題，如超聲場(chǎng)的范圍和強(qiáng)度、噪聲的控制、超聲的大功率問(wèn)題都制約著超聲波在工業(yè)化生產(chǎn)中的大規(guī)模應(yīng)用。

1.3 酶法提取

絞股藍(lán)的細(xì)胞壁主要是由纖維素和果膠組成，而皂苷等有效成分往往包裹在細(xì)胞壁內(nèi)，目前絞股藍(lán)皂苷酶法提取工藝主要是利用纖維素酶及果膠酶破壞細(xì)胞壁組成成分，增加絞股藍(lán)皂苷的溶出率，從而提高提取率。

纖維素酶可以破壞β-D-葡萄糖苷鍵連接，從而使植物細(xì)胞壁破壞，減小有效成分的溶出阻力。鄧美林等[19]利用纖維素酶法提取絞股藍(lán)總皂苷，將絞股藍(lán)粉碎至120目，酶用量0.4%、酶解溫度45℃、提取時(shí)間為150m in、提取溫度為50℃等條件下，絞股藍(lán)總皂苷提取率為3.81%。黃山等[20]同樣采用纖維素酶提取絞股藍(lán)總皂苷，在最佳工藝條件下，絞股藍(lán)總皂苷提取率達(dá)4.60%，與熱水浸提法相比提取率提高了17.05%。果膠酶能夠破壞絞股藍(lán)細(xì)胞壁中的果膠物質(zhì)，同纖維素酶一樣有破除細(xì)胞壁加快皂苷溶出的效果。林碩等[21]研究了酶用量、pH、酶解溫度、酶解時(shí)間對(duì)果膠酶法提取絞股藍(lán)皂苷的影響。經(jīng)過(guò)正交法優(yōu)化提取工藝為：果膠酶用量為0.35%，pH為4.0，酶解溫度為50℃，酶解時(shí)間為90m in，高溫滅酶提取16min，皂苷得率達(dá)7.9201%，較常規(guī)的水酶法提取增加了9.4148%。

可以看出，研究者大多只考慮一種酶的作用，相比傳統(tǒng)的溶劑熱提取雖然能夠提高絞股藍(lán)皂苷的提取率，但與超聲波提取相比明顯耗時(shí)較長(zhǎng)，而且酶的加入增加了生產(chǎn)成本、生產(chǎn)步驟和能耗，下一步可以嘗試多種酶的復(fù)配組合提取，發(fā)揮不同種酶的優(yōu)勢(shì)，加強(qiáng)破壁效果，提高絞股藍(lán)皂苷的得率。另外，酶法提取必須綜合考慮酶的濃度、溫度、抑制劑和引發(fā)劑等對(duì)提取物的影響才有可能克服酶法的缺點(diǎn)并應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)。

1.4 微波提取

微波提取由于能對(duì)提取體系中的不同組分進(jìn)行選擇性加熱，因此具有較好的選擇性，且熱效率高、升溫快速均勻，可大大提高提取物純度，方便分離后處理[22-23]。該技術(shù)大多作為輔助措施用于天然產(chǎn)物的水提、醇提。但微波提取應(yīng)用于提取絞股藍(lán)皂苷的文獻(xiàn)較少，僅南昌大學(xué)的郭輝力等[24]相對(duì)系統(tǒng)地研究過(guò)以微波輔助提取絞股藍(lán)皂苷，提出了微波干法預(yù)處理-乙醇快速浸泡提取的新工藝，并與傳統(tǒng)的乙醇回流提取進(jìn)行比較，不僅提取時(shí)間縮短了近9h，提取率也提高了15.8%。此工藝較直接用溶劑浸泡進(jìn)行微波輻射，能有效避免絞股藍(lán)細(xì)胞內(nèi)外同時(shí)加熱與微波能被溶劑消耗而造成破壁不理想的情況出現(xiàn)，這樣既可提高微波提取效率，節(jié)省能源，又可簡(jiǎn)化微波提取裝置，降低投入成本，利于工業(yè)化生產(chǎn)。雖然絞股藍(lán)皂苷的微波提取研究較少，但同類(lèi)型的皂苷，如人參皂苷[22，25-26]，國(guó)內(nèi)外研究還是比較深入的，可以作為絞股藍(lán)皂苷微波提取的參考。

微波可以產(chǎn)生瞬時(shí)高溫，必須合理控制微波時(shí)間。為了減少高溫的影響，可分次進(jìn)行微波輻射，冷卻至室溫再進(jìn)行第二次微波輻射，減少熱分解以便提高皂苷得率。絞股藍(lán)在提取前應(yīng)粉碎至合適粒度，既增大提取溶劑與物料的接觸面積，提高微波提取的效率，又可防止雜質(zhì)過(guò)度暴露，增加后續(xù)處理難度。目前微波提取設(shè)備的研發(fā)相對(duì)成熟，可以滿(mǎn)足各類(lèi)大、中、小企業(yè)的生產(chǎn)需求。

1.5 超臨界CO2萃取

由于超臨界CO2只能有效地萃取親脂性物質(zhì)，對(duì)相對(duì)質(zhì)量分子較大、羥基多、極性較大的皂苷類(lèi)物質(zhì)提取其產(chǎn)率普遍較低，需要加入夾帶劑、表面活性劑以及其他強(qiáng)化措施來(lái)提高產(chǎn)率[27-28]。為了提高皂苷產(chǎn)率，羅登林等[29]采用超聲強(qiáng)化超臨界CO2萃取人參皂苷，與單純的超臨界CO2萃取相比超聲的加入能明顯提高超臨界CO2萃取人參皂苷的萃取率和生產(chǎn)效率，這可能是由于超聲的破碎細(xì)胞壁作用導(dǎo)致溶質(zhì)擴(kuò)散阻力減小，增加了與超臨界流體的接觸面積。之后他又將特定的表面活性劑、乙醇和水形成反相微乳液引入到超臨界CO2體系中增加對(duì)皂苷的溶解度，并與乙醇/水/超臨界CO2萃取進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)其萃取率是乙醇/水/超臨界CO2萃取的3.2倍[30]。

除了采取強(qiáng)化措施來(lái)提高超臨界CO2萃取皂苷的萃取率和生產(chǎn)效率外，也應(yīng)該注意萃取前樣品的制備和預(yù)處理，比如樣品粒度、樣品的裝填密度、樣品溶液的酸堿度等都影響溶質(zhì)的擴(kuò)散速度和皂苷的存在形式從而影響皂苷得率及皂苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)[31]。

1.6 超高壓提取

超高壓提取的升壓、保壓、卸壓過(guò)程能夠加速溶劑與細(xì)胞基質(zhì)間的擴(kuò)散、滲透、溶解，使提取速率大大提高，提取時(shí)間大大縮短[32]。雖然利用超高壓提取絞股藍(lán)中皂苷的文獻(xiàn)鮮有報(bào)道，但超高壓在人參皂苷提取方面的成果可以作為重要參照。吉林大學(xué)的陳瑞戰(zhàn)等[33-35]在超高壓技術(shù)提取人參皂苷方面成果較多，他們探討了不同提取溶劑、溶劑濃度、提取壓力、溶劑與原料比、提取時(shí)間等因素對(duì)皂苷得率的影響，并將超高壓提取法與回流提取、超聲提取、微波提取、超臨界CO2萃取等方法進(jìn)行了比較，研究發(fā)現(xiàn)超高壓在提取具有提取率高、溶雜少、能耗低、操作方便、快速等優(yōu)點(diǎn)，而且超高壓是在常溫下操作，能最大程度地保留生物活性物質(zhì)及各種營(yíng)養(yǎng)成分的天然結(jié)構(gòu)，避免了因熱效應(yīng)引起的有效成分變性、損失、藥理活性降低等問(wèn)題，同時(shí)超高的壓力也使絕大多數(shù)細(xì)菌失活，有利于產(chǎn)品的保藏。

另外，在一定壓力下所產(chǎn)生的凝聚作用可以打破酶和基質(zhì)間的隔離，使酶活上升，加速酶促反應(yīng)[36]。繼續(xù)提高壓力，既可以增加皂苷溶出率又可以改變酶蛋白的結(jié)構(gòu)而起到鈍酶的作用[37]，防止內(nèi)容物過(guò)多溶出，增加后續(xù)純化的難度。超高壓如果輔助酶法提取，既可充分發(fā)揮酶的催化活性，又可充分利用超高壓破壁、鈍酶的作用，雙重作用增強(qiáng)破壁效果。綜上可以看出，超高壓提取完全可以作為絞股藍(lán)皂苷提取的重要研究方向。雖然超高壓有諸多優(yōu)勢(shì)，但仍面臨一些實(shí)際問(wèn)題，如提取工藝參數(shù)的協(xié)同效應(yīng)、有限的提取容積、設(shè)備的產(chǎn)能、設(shè)備投資費(fèi)用等。

2 絞股藍(lán)皂苷純化方法

絞股藍(lán)皂苷經(jīng)一定方法提取后，其中往往含有大量的雜質(zhì)，不僅影響絞股藍(lán)產(chǎn)品的品質(zhì)，而且很大程度上影響了理化參數(shù)的測(cè)定、療效的評(píng)價(jià)、以及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的制定等深層次的研究，因此對(duì)粗提物的分離純化具有十分重要的實(shí)用價(jià)值和理論意義。

2.1 大孔吸附樹(shù)脂分離純化

大孔樹(shù)脂具有良好的選擇性、吸附量大、易洗脫、耐污染、再生處理后重復(fù)使用，因而在天然產(chǎn)物有效成分分離純化領(lǐng)域的應(yīng)用不斷增加[38-39]。羅婭君等[40]考察了D101、D141、NAK-Ⅱ、AB-8型等3種大孔吸附樹(shù)脂富集、純化絞股藍(lán)總皂苷的工藝，經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，D-101型純化效果最好，絞股藍(lán)總皂苷含量可以達(dá)到50.69%。在最優(yōu)工藝條件下，絞股藍(lán)總皂苷可達(dá)89.61%（以人參皂苷Rb3計(jì)）。劉振洋等[41]研究了AB-8、ADS-7、D-101、HPD-100、HPD-300、HPD-700型等6種大孔吸附樹(shù)脂對(duì)絞股藍(lán)總皂苷的飽和吸附量、洗脫量及洗脫率，除ADS-7型大孔吸附樹(shù)脂外其他5種型號(hào)對(duì)絞股藍(lán)總皂苷的靜態(tài)吸附能力均較好，其中AB-8型的靜態(tài)飽和吸附量最大，為120.25mg·g-1干樹(shù)脂，而HPD-700型樹(shù)脂吸附的洗脫率最高，可達(dá)80.34%，其吸附量大、收率高、洗脫率高等優(yōu)點(diǎn)，綜合比較，將HPD-700型大孔樹(shù)脂應(yīng)用于絞股藍(lán)總皂苷的初級(jí)純化是非常合適的。

大孔吸附樹(shù)脂法是目前純化工藝較簡(jiǎn)單，效率較高，收率和純度都比較理想的絞股藍(lán)皂苷富集和純化方法，完全可以替代傳統(tǒng)溶劑萃取純化工藝。但大孔吸附樹(shù)脂純化技術(shù)在絞股藍(lán)皂苷純化的應(yīng)用中更多的關(guān)注目標(biāo)產(chǎn)物的純化，而忽略了大孔樹(shù)脂預(yù)處理效果及提取物中樹(shù)脂殘留物和裂解產(chǎn)物的檢測(cè)，因此對(duì)大孔樹(shù)脂純化的絞股藍(lán)產(chǎn)品需制定合理的限量標(biāo)準(zhǔn)來(lái)確保產(chǎn)品質(zhì)量和安全。

2.2 膜分離法

膜分離是以選擇性的透過(guò)膜為分離介質(zhì)，利用膜兩側(cè)不同的電位差、濃度差或者壓力差使原料中的組分選擇性透過(guò)一定孔徑的膜，從而實(shí)現(xiàn)混合物分離、提純、濃縮的過(guò)程[42-43]。利用膜分離進(jìn)行純化時(shí)，為了提高處理速度、處理量以及穩(wěn)定性，往往采用不同孔徑的膜進(jìn)行多步過(guò)濾。易克傳等[44]分別選用陶瓷微濾膜和超濾膜進(jìn)行兩步膜分離，在溶液溫度40℃、過(guò)濾壓差0.24MPa條件下，利用孔徑0.5μm的陶瓷膜對(duì)絞股藍(lán)粗取液進(jìn)行預(yù)處理，保障了下一步超濾的穩(wěn)定性。在后續(xù)的研究中選擇截留相對(duì)分子質(zhì)量為3×104的超濾膜，在溶液溫度40℃、操作壓力2MPa的條件下純化絞股藍(lán)皂苷，工藝過(guò)程穩(wěn)定，產(chǎn)品純度較高[45]。

采用不同截留分子量的膜進(jìn)行分步膜分離，處理量大，處理效果較為理想，可以很好的實(shí)現(xiàn)絞股藍(lán)皂苷的連續(xù)化生產(chǎn)，有很好的工業(yè)前景。當(dāng)然，膜分離也存在污染嚴(yán)重、清洗困難、膜更換困難、造價(jià)較高等實(shí)際問(wèn)題，但隨著膜分離研究開(kāi)發(fā)的深入，必將推動(dòng)粗提液分離純化的工業(yè)化進(jìn)程。

2.3 硅膠柱色譜分離純化

絞股藍(lán)成分中的多糖、黃酮等水溶性物質(zhì)由于極性較大，易吸附于硅膠上，而極性較弱的皂苷不易被吸附，而容易被洗脫下來(lái)，因此根據(jù)這個(gè)性質(zhì)，可利用硅膠柱色譜法將絞股藍(lán)中的總皂苷與其他物質(zhì)分離開(kāi)來(lái)。

孔玉瓊等[46]利用用硅膠柱色譜分離絞股藍(lán)總皂苷，以氯仿-甲醇混合液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，薄層層析法跟蹤檢測(cè)。將5000g絞股藍(lán)干草經(jīng)乙醇提、石油醚脫脂、正丁醇萃取、AB-8大孔吸附樹(shù)脂脫糖、D-296陰離子交換樹(shù)脂脫色后得到總皂苷7.87g，取5g絞股藍(lán)總皂苷進(jìn)行硅膠柱色譜分離，在體積比為9.5∶0.5和9∶1的氯仿-甲醇洗脫液洗脫下得到3種較純的絞股藍(lán)皂苷的單體組分，得率分別為2.6%、3.0%和5.2%。經(jīng)高效液相色譜檢測(cè)其純度，組分A、B、C純度分別為88.73%、93.11%和78.54%。3種皂苷較粗品純度得到很大提高。KIM JH等[47]將得到的絞股藍(lán)粗提液先用大孔樹(shù)脂HP-20分離純化，然后將甲醇洗脫的部分真空干燥成粉，之后進(jìn)行硅膠柱色譜分離，用氯仿-甲醇-水（65∶35∶10）洗脫，洗脫組分進(jìn)一步經(jīng)過(guò)ODS硅膠柱（洗脫液∶甲醇-水）得到絞股藍(lán)皂甙GC1-7等單體。Hu L等[48]選取地上部分的絞股藍(lán)依次用汽油、三氯甲烷和甲醇浸提，然后用水和正丁醇的混合溶液萃取甲醇提取液，取正丁醇層進(jìn)行硅膠柱色譜分離，洗脫液為三氯甲烷-甲醇-水（7∶3∶0.1），收集洗脫組分進(jìn)行RP-18色譜分離（洗脫液：甲醇-水或乙腈-水），最后得到9種化合物，經(jīng)檢測(cè)其中有6種為已知絞股藍(lán)皂苷。

硅膠柱色譜分離純化絞股藍(lán)皂苷使研究和評(píng)價(jià)絞股藍(lán)單體生物活性成為可能，但由于硅膠柱步驟繁瑣，增加了生產(chǎn)成本，降低了生產(chǎn)效率，僅適合實(shí)驗(yàn)室作方法機(jī)理研究，無(wú)法工業(yè)化推廣。

2.4 高速逆流色譜法

高速逆流色譜有效地分離強(qiáng)極性的組分，實(shí)現(xiàn)物質(zhì)的對(duì)流分配，具有較強(qiáng)的適應(yīng)性[49]，能在一個(gè)流程中分離樣品中極性差異極大的各個(gè)組分，為從復(fù)雜的天然產(chǎn)物粗制品中提取不同特性的有效成分提供了有利條件[50]。

目前高速逆流色譜已經(jīng)成功運(yùn)用于與絞股藍(lán)皂苷為同類(lèi)皂苷的人參皂苷。孫成賀等[51]應(yīng)用制備型高速逆流色譜，選擇乙酸乙酯-正丁醇-水（1∶6∶7）組成溶劑系統(tǒng)對(duì)人參超聲粗提液進(jìn)行分離，所得溶液用甲醇重結(jié)晶，最終得到人參皂苷Re固體，高效液相色譜分析純度達(dá)到98.84%。張敏等[52]以醋酸乙酯-正丁醇-水-醋酸（4∶3∶0.02）作為制備型高速逆流色譜分離的溶劑系統(tǒng)分離人參皂苷，得到Re、Rg1、Rg33種人參皂苷單體化合物，經(jīng)高效液相色譜檢測(cè)其純度均達(dá)到95%以上。

絞股藍(lán)皂苷的分離多用大孔樹(shù)脂和硅膠柱色譜分離，有時(shí)候?yàn)榱说玫礁兊膯误w還要利用ODS硅膠柱進(jìn)一步純化，其預(yù)處理過(guò)程復(fù)雜，耗時(shí)較長(zhǎng)且處理量小，而應(yīng)用高速逆流色譜粗提物經(jīng)簡(jiǎn)單處理后即可直接分離，制備量比傳統(tǒng)方法大，純度也較高。高速逆流色譜也有其不足之處，如溶劑消耗多、檢測(cè)限較低、靈敏度較差，有時(shí)為了提高精度必須與液相色譜聯(lián)用，且不適合皂苷的大量制備。

2.5 泡沫分離法

泡沫分離技術(shù)是通過(guò)鼓泡的方式，將粗提液中具有表面活性的物質(zhì)吸附在氣泡表面，隨氣泡上升過(guò)程中得到富集，并帶出溶液，達(dá)到濃縮純化的目的[53-54]。絞股藍(lán)皂苷具有親水性的糖體和疏水性的皂苷元，是一種非離子型表面活性成分，并且具有良好的起泡性，因此完全具備泡沫分離的前提[54]。

修志龍等[55]采用泡沫分離技術(shù)，通過(guò)改變不同的通氣量、料液濃度、pH、進(jìn)料量以及通氣操作方式等因素，發(fā)現(xiàn)各因素均對(duì)皂苷濃縮的結(jié)果均有顯著影響，且鼓泡對(duì)不同的皂苷單體濃縮作用有明顯差異，其中皂苷Rb1、Rb2、Rd有顯著的濃縮效果，而Re和Rg1的濃度基本無(wú)變化。王琳等[56]利用用泡沫分離法對(duì)絞股藍(lán)粗提液中的皂苷進(jìn)行分離，最佳分離工藝條件下皂苷回收率為49.20%，富集比可達(dá)4.51。

泡沫分離在分離純化絞股藍(lán)皂苷方面還不成熟，泡沫分離設(shè)備的性能的改善、多級(jí)泡沫分離設(shè)備的研制、表面活性劑在氣-液界面發(fā)生分離的吸附機(jī)理以及絞股藍(lán)皂苷的吸附特性還有待于繼續(xù)深入研究。不可否認(rèn)的是，隨著泡沫分離技術(shù)的日益成熟，必將促進(jìn)其在皂苷濃縮純化的工業(yè)化應(yīng)用。

3 展望

目前對(duì)絞股藍(lán)皂苷的研究多數(shù)集中在絞股藍(lán)總皂苷的粗提上，且提取方法多為傳統(tǒng)的方法，在超臨界萃取和超高壓提取方面鮮有研究。后續(xù)的絞股藍(lán)皂苷純化研究相對(duì)較少，在新技術(shù)的研究及綜合運(yùn)用上明顯不足，尤其對(duì)某些絞股藍(lán)皂苷單體開(kāi)展的較少，這嚴(yán)重制約著絞股藍(lán)皂苷的藥效研究和絞股藍(lán)產(chǎn)品的競(jìng)爭(zhēng)力。迄今為止，國(guó)內(nèi)外對(duì)絞股藍(lán)皂苷提取、純化的研究深度明顯不夠，鑒于絞股藍(lán)獨(dú)特的生理功效和廣闊的市場(chǎng)前景，應(yīng)加強(qiáng)絞股藍(lán)新工藝提取和分離純化的研究，以便于深入分析和綜合利用絞股藍(lán)。

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Research process in extraction and purification of gypenoside

Gypenoside was main active substance of gynostemma pentaphylla，which had great development value and potential app lication because of its unique function of anti-fatigue，anti-aging，anti-mutagenic，im p roving the immune capacity，regulation of cardiovascular and neurological imp rovement.In this paper，the research p rog ress of gypenosidess was d iscussed from its extraction and purification.It p rovided good c lues and evidence for further study on extraction and purification p rocess of gypenoside.

gypenoside；extraction；purification

TS201.1

A

1002-0306（2014）18-0378-06

10.13386/j.issn1002-0306.2014.18.077

2013－12－31 *通訊聯(lián)系人

張新宇（1964-），男，高級(jí)工程師，研究方向：食品加工。

安徽省科技計(jì)劃（1301032155）；國(guó)家自然科學(xué)基金（31371844，31071556）；國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃（2011AA100801）。

ZHANG Xin-yu1，ZHANG Di2，WANG Lin2，XU Zuo-hua1，LIU Kun2，ZENG Qing-mei2，*

（1.Findshe Funland Bio-Pharmaceutical Limited Corporation，F(xiàn)uyang 236500，China；2.Engineering Research Center of Bio-process，HefeiUniversity of Technology，Hefei230009，China）