王潔瀅，郭軍鵬，吳 薇，劉淑瑩，2*

(1．長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春130117;2．中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所，長春130022)

記憶力減退又稱健忘，是腦力衰弱、記憶衰退、遇事善忘的一種癥狀。近年來，隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，人們的生活節(jié)奏不斷加快，隨之生活壓力也急劇加重。社會(huì)生活的快節(jié)奏使得人們的身體狀況出現(xiàn)了各種各樣不良的反應(yīng)，致使記憶力減退。導(dǎo)致記憶力減退最為常見的原因有失眠、用腦過度、不良嗜好等，而這些不良的身體狀況和生活習(xí)慣恰恰是人們?nèi)粘Ｉ钭畛Ｓ龅降?，幾乎是如影隨行。目前，已有文獻(xiàn)證實(shí)中藥及其復(fù)方對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶能力有促進(jìn)作用［1］。通過對(duì)大量的文獻(xiàn)研究，本實(shí)驗(yàn)選擇以人參為主藥材的復(fù)方以及其對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響進(jìn)行考察。楊迎證實(shí)了人參皂苷Rg1對(duì)小鼠的學(xué)習(xí)和記憶獲得過程有促進(jìn)作用［2］。人參益智口服液根據(jù)中醫(yī)藥理論配伍組方，主要有人參、茯苓、遠(yuǎn)志、酸棗仁。本文通過樟柳堿腹腔注射的方法復(fù)制了小鼠記憶障礙模型，應(yīng)用Morris水迷宮、跳臺(tái)和避暗等實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)了人參益智口服液對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶行為學(xué)和血清SOD、MDA的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 C57/BL雄性小鼠90只，體質(zhì)量18～22 g。吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(吉)2008-0005。

1.2 藥品與試劑 氫溴酸樟柳堿，中國藥品生物制品檢定所提供(生產(chǎn)批號(hào):100399-200601);腦復(fù)康，東北制藥集團(tuán)沈陽第一制藥有限公司提供(生產(chǎn)批號(hào):H21021775)。SOD和MDA試劑盒購自南京建成生物工程研究所。人參益智口服液制備方法:生曬參100 g，酸棗仁200 g用70%酒精回流提取2次，第1次2 h，加6倍于藥材量的醇，第2次1.5 h，加5倍于藥材量的醇，過濾，揮至無醇味。茯苓200 g，遠(yuǎn)志100 g醇提殘?jiān)喜⒂盟逯?次，第1次2 h，加6倍于藥材量的水，第2次1.5 h，加6倍于藥材量的水，過濾。合并水提和醇提液，濃縮至密度為1.02～1.05(50℃)，待冷卻至室溫，加乙醇使含醇量70%，攪拌，靜置72 h，過濾，濾液回收乙醇，加純化水至980 mL，過濾，濾液加入阿斯巴甜、木糖醇、山梨酸鉀，加熱使之溶解，加純化水至1 000 mL，加入適量碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH值至5.0～6.0，攪勻，過濾，即得。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 MT-200型Morris水迷宮分析系統(tǒng)，SDT-8跳臺(tái)儀，BA-200避暗儀，成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組與造模 雄性C57/BL小鼠90只，隨機(jī)分為6組，空白對(duì)照組，模型組，陽性藥對(duì)照組和人參益智口服液高、中、低劑量治療組。對(duì)照組和模型組均以等量的生理鹽水灌胃，陽性組給予吡拉西坦0.005 mg/g，治療組分別給予人參益智口服液0.27 mg/mL(高)、0.09 mg/mL(中)、0.03 mg/mL(低)，灌胃0.2 mL/只。連續(xù)灌胃30 d，第30天給藥1 h后，除對(duì)照組外，各組分別腹腔注射樟柳堿0.2 mL(0.5 mg/mL)，對(duì)照組注射同體積的生理鹽水。

2.2 行為學(xué)實(shí)驗(yàn) 腹腔注射30 min后進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，此為學(xué)習(xí)成績，學(xué)習(xí)訓(xùn)練1周后進(jìn)行記憶能力測(cè)試。跳臺(tái)及避暗儀實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)訓(xùn)練1次，24 h后進(jìn)行記憶能力測(cè)試。

2.3 血清酶學(xué)實(shí)驗(yàn) 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，采用眼球取血，室溫靜置30 min后，3 000 r/min離心15 min，取血清，－20℃保存待測(cè)。采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定血清SOD活性，采用硫代巴比妥酸比色法測(cè)定血清MDA含量。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(珋x±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) 與對(duì)照組比較，模型組平均潛伏期延長及平均跨越平臺(tái)次數(shù)明顯減少，說明樟柳堿可以造成小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙。人參益智口服液高劑量組與中劑量組能夠減少潛伏期時(shí)間和增加平均跨越平臺(tái)次數(shù)(P＜0.01)，見表1。

3.2 跳臺(tái)實(shí)驗(yàn) 與模型組相比，人參益智口服液高、中劑量組平均潛伏期延長，平均錯(cuò)誤次數(shù)減少。說明高、中、低劑量均能延長小鼠跳臺(tái)潛伏期和減少錯(cuò)誤次數(shù)(P ＜0.05，P ＜0.01)，見表2。

3.3 避暗實(shí)驗(yàn) 與模型組相比，人參益智口服液高、中和低劑量組平均潛伏期延長，平均錯(cuò)誤次數(shù)減少(P＜0.01)。說明人參益智口服液高、中和低劑量均能延長小鼠避暗實(shí)驗(yàn)的平均潛伏期和減少錯(cuò)誤次數(shù) (P＜0.05，P＜0.01)，見表3。

表1 人參益智口服液對(duì)小鼠morris水迷宮平均潛伏期和平均跨越平臺(tái)次數(shù)的影響(珋x±s，n=15)

表2 人參益智口服液對(duì)小鼠跳臺(tái)平均潛伏期和平均錯(cuò)誤次數(shù)的影響(珋x±s，n=15)

表3 人參益智口服液對(duì)小鼠避暗平均潛伏期和平均錯(cuò)誤次數(shù)的影響(珋x±s，n=15)

3.4 血清酶學(xué)實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組SOD降低(P＜0.05)，MDA升高(P＜0.05)。與模型組比較，人參益智口服液高劑量組改善作用顯著(P ＜0.01)，見表4。

表4 人參益智口服液對(duì)小鼠血清酶學(xué)的影響(珋x±s，n=15)

4 討論

人參的藥理作用十分豐富，有文獻(xiàn)報(bào)道人參具有抗心衰的作用［3］，經(jīng)研究表明人參能夠預(yù)防高血脂［4］，而人參對(duì)中樞神經(jīng)的作用也十分顯著［5］。人參益智的主要成分為人參皂苷Rg1。研究表明人參皂苷Rg1可明顯改變乙酰膽堿酶活性，增強(qiáng)認(rèn)知和記憶能力［6］。陳勤［7］，王丹［8］等研究了遠(yuǎn)志皂苷對(duì)β-淀粉樣肽和鵝膏蕈氨酸引起的膽堿能系統(tǒng)功能降低的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，遠(yuǎn)志皂苷能顯著增加腦內(nèi)M受體密度和增強(qiáng)ChAT活性，抑制腦內(nèi)乙酰膽堿酶，明顯改善癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。已有研究證明茯苓提取物能明顯縮短小鼠到達(dá)平臺(tái)的潛伏期，還可以明顯抑制小鼠大腦皮層和海馬區(qū)Fas抗原的表達(dá)，具有改善記憶功能［9-10］。酸棗仁益智作用的主要成分為酸棗仁油、酸棗仁皂苷和黃酮等成分。研究表明酸棗仁油能夠減少小鼠的自主活動(dòng)次數(shù)，縮短戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠潛伏期，并延長睡眠持續(xù)期，從而增強(qiáng)記憶［11-12］。

本實(shí)驗(yàn)觀察了人參益智口服液對(duì)樟柳堿模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響，人參益智口服液共選取了4味藥進(jìn)行配伍，通過Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)可觀察出，無論是平均潛伏期還是平均跨越平臺(tái)次數(shù)都能有效的體現(xiàn)其益智作用。跳臺(tái)、避暗實(shí)驗(yàn)的兩組數(shù)據(jù)均能體現(xiàn)出口服液的益智功效。血清酶學(xué)實(shí)驗(yàn)中，服用人參益智口服液小鼠的SOD活性明顯增強(qiáng)，MDA含量明顯降低。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，人參益智口服液具有改善小鼠記憶功能的作用。

本次實(shí)驗(yàn)研究極大的完善了人參的益智作用，通過配伍的中醫(yī)學(xué)理論以及大量的文獻(xiàn)報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)選擇茯苓、遠(yuǎn)志、酸棗仁這3味均有益智作用的中藥材與人參配伍，增強(qiáng)了人參益智的作用。這一復(fù)方凝聚了這4味中藥材的同一特性與功效，更大程度上改善了學(xué)習(xí)記憶能力。但由于目前實(shí)驗(yàn)條件的局限性，進(jìn)入人體實(shí)驗(yàn)還需要一段過程，但隨著科技與社會(huì)的進(jìn)步，在中醫(yī)藥學(xué)者的不斷研究努力下，終究會(huì)攻克這一難題。

［1］閆小青，王會(huì)鑫，王景洪，等．中藥及其復(fù)方對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶影響的研究進(jìn)展［J］．陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，25(6):62-64．

［2］楊迎，張均田，石成璋，等．人參皂苷Rg1和Rb1促智作用機(jī)制的探討-對(duì)小鼠腦神經(jīng)發(fā)育的影響［J］．藥學(xué)學(xué)報(bào)，1994，29(4):241-245．

［3］李玉梅，張超，王楚盈，等．附子人參配伍抗心衰量效作用關(guān)系研究［J］．吉林中醫(yī)藥，2013，33(10):1046-1048．

［4］謝兆莉，周賢，李愛欣，等．高溫高壓處理前后藥渣多糖預(yù)防小鼠高血脂的研究［J］．吉林中醫(yī)藥，2014，34(1):66-67．

［5］張慧，張超，曹東東，等．人參對(duì)附子中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用影響的研究［J］．吉林中醫(yī)藥，2012，32(12):1260-1261．

［6］劉娟，裘瑩，何晶，等．人參皂苷Rb1和Rg1對(duì)海馬神經(jīng)元的影響［J］．同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2011，32(3):1-10．

［7］陳勤，曹炎貴，張傳惠．遠(yuǎn)志皂苷對(duì)β-淀粉樣肽和鵝膏蕈氨酸引起膽堿能系統(tǒng)功能降低的影響［J］．藥學(xué)學(xué)報(bào)，2002，37(12):913-917．

［8］王丹，張紅英，蘭艷．遠(yuǎn)志水提物對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶及血液學(xué)指標(biāo)的影響［J］．中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(5):188-190．

［9］盧建中，喻萍，呂毅斌，等．茯苓提取物對(duì)鉛致記憶損傷及相關(guān)抗原表達(dá)的影響［J］．毒理學(xué)雜志，2006，20(4):224-226．

［10］張敏，陳冬雪，孫曉萌．茯苓水提液對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響［J］．北華大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2012，13(1):62-64．

［11］趙啟鐸．酸棗仁油中不飽和脂肪酸的藥理實(shí)驗(yàn)研究［J］．天津中醫(yī)藥，2005，22(4):331．

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