李廣枝，盧忠英，徐敬友，郁建平

(貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025)

藤茶是一種代茶飲品，在我國民間飲用歷史悠久，藤茶系葡萄科蛇葡萄屬植物顯齒蛇葡萄Ampelopsis grossedentata(Hand.Mazz)W.T.Wang.莖葉的加工物，有效成分為黃酮類物質(zhì)，包括二氫楊梅素、楊梅素、藤茶苷、槲皮素等，二氫楊梅素約占黃酮的80%［1］。藤茶味甘，淡，性涼，藤茶全株入藥用于治慢性腎炎、肝炎、小便澀痛、治胃熱嘔吐、感冒、咽喉腫痛等癥［2］。高尿酸血癥是痛風(fēng)病臨床表現(xiàn)之一，近年來，據(jù)國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道高尿酸血癥與糖尿病、高血壓、高脂血癥、冠心病等心血管疾病發(fā)生率也有相關(guān)性。目前用于治療痛風(fēng)的藥物副作用比較大，大量研究表明:二氫楊梅素可影響高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平，可做為治療痛風(fēng)藥物的備選材料［3-4］。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，飲用藤茶能降低血清尿酸含量，本試驗(yàn)利用小鼠高尿酸血癥模型，探討二氫楊梅素對(duì)高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響，為治療痛風(fēng)藥物的開發(fā)和利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

試材藤茶植株采自貴州省江口縣和平鎮(zhèn)，由貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院植物教研室廖海民教授鑒定為葡萄科蛇葡萄屬植物顯齒蛇葡萄Ampelopsis grossedentata(Hand-Mazz)W.T.Wang。試驗(yàn)用藤茶由貴州江口梵凈山云峰野生植物開發(fā)有限公司提供。

試驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，雄性，體重(20±2g)，由重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司提供［許可證號(hào):SCXK(渝)2012-006］，實(shí)驗(yàn)前在實(shí)驗(yàn)室正常飼養(yǎng)一周，實(shí)驗(yàn)過程中自由飲水和顆粒飼料喂養(yǎng)。

1.2 方法

1.2.1 二氫楊梅素制備 取藤茶200 g，采用沸水提取，濃縮乙醇除雜，丙酮提取，濃縮加水沉淀結(jié)晶及重結(jié)晶的方法制備二氫楊梅素(DM)［5］，用HPLC檢測(cè)純度［6］為純度89.87%。

1.2.2 小鼠分組及給藥［7］將60只昆明種小鼠隨機(jī)分為6組，分正常對(duì)照組，模型組、別嘌呤醇組、二氫楊梅素高劑量組、中劑量組、低劑量組，其中二氫楊梅素高、中、低劑量分別為0.752 g/kg、0.376 g/kg、0.187 g/kg，別嘌呤醇按 0.04 g/kg 劑量給藥。除空白對(duì)照組灌胃給予相應(yīng)體積的生理鹽水。其余各組全部建模。模型組(上午按腺嘌呤:200 mg/kg，乙胺丁醇:250 mg/kg的劑量給藥，下午灌胃等體積生理鹽水)，別嘌呤醇組、二氫楊梅素高，中，低劑量組上午建模，下午分別按劑量給藥，每天一次，直至14天。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo) 各組給藥連續(xù)14天，分別于實(shí)驗(yàn)14天后，小鼠摘除眼球取血(取血前禁食12小時(shí))，以測(cè)定血尿酸值(尿酸酶法)、尿酸氮(脲酶法)、肌酐(苦味酸法)。靜止1 h，低溫離心，3 500 r/min離心12 min以分離血清，-20℃冰箱冷凍保存。待測(cè)。

數(shù)據(jù)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 腎臟肉眼觀察

如圖所示;正常對(duì)照組(圖1):腎臟色澤紅潤(rùn)，模型組(圖2):腎臟增大明顯，顏色蒼白，肉眼可見大量白色結(jié)晶;別嘌呤醇組(圖3):腎臟輕微增大，顏色蒼白，肉眼可見少量白色結(jié)晶;二氫楊梅素高、中劑量組(圖4-5):腎臟輕微增大，顏色微紅，肉眼可見少量白色結(jié)晶;二氫楊梅素低劑量組(圖6):腎臟增大明顯，顏色蒼白，肉眼可見大量白色結(jié)晶;對(duì)小鼠腎臟重量的變化，與正常對(duì)照組相比各組都有顯著差異，與模型組相比有顯著差異(表1)。

圖1 正常對(duì)照組Fig.1 Control group

圖2 模型組Fig.2 Model group

圖3 別嘌呤醇組Fig.3 Allopurinol group

圖4 藤茶高劑量組Fig.4 High-dose group of dihydromyricetin

圖5 藤茶中劑量組Fig.5 Medium-dose group of dihydromyricetin

圖6 藤茶低劑量組Fig.6 Low-dose group of dihydromyricetin

表1 各組小鼠腎臟重量的變化情況Tab.1 Changes in kidney weight of mice

2.2 腺嘌呤復(fù)制高尿酸血癥小鼠模型情況比較

模型組小鼠血清UA水平為(294.8±25.31)μmol/L，與正常組血清UA水平(161.7±10.53)μmol/L有顯著差異，說明成功地復(fù)制了小鼠高尿酸血癥模型(表2)。

2.3 不同劑量給藥對(duì)小鼠血清UA水平的影響

別嘌呤組、二氫楊梅素高、中劑量組的血清UA與模型組相比有明顯的降低;二氫楊梅素高、中劑量組的血清UA與別嘌呤組相比差異顯著(表2)。

2.4 不同藥物對(duì)腎功能的影響

模型組BUN及Cr比正常組升高;二氫楊梅素高、中、低劑量組BUN及Cr均低于模型組;別嘌呤組與模型組無顯著差異;二氫楊梅素高、中劑量與別嘌呤醇組相比有明顯降低(表2)。

表2 各組小鼠血清尿酸(UA)水平的變化情況Tab.2 Changes in serum uric acid(UA)of mice

3 討論

隨著人民生活水平有進(jìn)一步的提高，高尿酸血癥的患病率也逐漸上升，因此，臨床上對(duì)高尿酸和痛風(fēng)病的藥物治療也倍受關(guān)注，藥物治療主要重視安全有效性，模擬與臨床上相似的高尿酸血癥動(dòng)物模型是研究防治高尿酸血癥藥物藥效的基礎(chǔ)。據(jù)現(xiàn)有資料顯示，藤茶植物中化學(xué)成分豐富，研究表明，藤茶有消炎，止咳、祛痰、鎮(zhèn)痛、抗氧化、護(hù)肝、降血糖，降血脂 抗高血壓、抗菌、抗癌等藥理作用［8-14］，藤茶資源豐富，二氫楊梅素含量高，本實(shí)驗(yàn)主要探討二氫楊梅素對(duì)動(dòng)物模型的降尿酸作用，進(jìn)一步深入對(duì)二氫楊梅素藥理的研究，可為藤茶資源的綜合開發(fā)利用提供依據(jù)。同時(shí)也為高尿酸血癥和痛風(fēng)病的新藥研發(fā)提供理論依據(jù)。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示;別嘌呤對(duì)高尿酸血癥模型雖有極明顯的降尿酸作用，但對(duì)腎臟損害的副作用較為明顯，不容忽視。而二氫楊梅素能夠有效的干預(yù)腺嘌呤+乙胺丁醇片［7］所引發(fā)的高尿酸血癥，尤其是二氫楊梅素高、中劑量具有明顯降低血尿酸的作用，同時(shí)對(duì)腎臟的損害有保護(hù)和治療作用，二氫楊梅素在預(yù)防治療高尿酸血癥上具有潛在的前景。但其作用機(jī)制如何，有待于進(jìn)一步的研究。

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