李丹丹，王迎賓，李 驥，康紹叁，劉 巖，吳 蒙

(1唐山市協(xié)和醫(yī)院，河北唐山063000;2唐山市人民醫(yī)院;3河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院;4河北聯(lián)合大學(xué)病理教研室;5唐山市職業(yè)技術(shù)學(xué)院)

前列腺癌是男性常見的泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病率在歐美國家最高，在我國也呈逐年上升的趨勢。轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β是一種多肽類細(xì)胞因子，是目前已知與腫瘤關(guān)系極為密切的代表性細(xì)胞因子之一，主要存在形式為TGF-β1，后者對不同細(xì)胞產(chǎn)生不同的生物學(xué)效應(yīng)，即促進(jìn)或抑制細(xì)胞生長［1］。在正常上皮組織中，TGF-β1具有抑制細(xì)胞增殖作用［2］，但在惡性腫瘤中卻可通過促進(jìn)腫瘤血管生成調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)狀態(tài)、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化、抑制免疫功能，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移［3～5］。Ki-67 是增殖細(xì)胞核抗原，可以反映腫瘤細(xì)胞的增殖活性。2013年5月，我們采用免疫組化法檢測了前列腺癌組織內(nèi)TGF-β1及Ki-67的表達(dá)變化，旨在進(jìn)一步探討前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2005～2010年于我院手術(shù)治療的前列腺患者50例，年齡59～85歲(平均72.6歲)，術(shù)前均未行內(nèi)分泌治療、放療和化療。均經(jīng)病理檢查確診為前列腺癌(均為腺癌)，其中病理分級按Gleason評分標(biāo)準(zhǔn)為高分化12例、中分化17例、低分化21例;臨床分期按Whitmore-Jewett標(biāo)準(zhǔn)A+B期19例、C期13例、D期18例;有骨轉(zhuǎn)移18例。選擇同期行手術(shù)治療的25例前列腺增生(BPH)患者為對照，年齡56～87歲，平均69.8歲。兩組均留取手術(shù)時切除標(biāo)本，經(jīng)10%甲醛溶液固定、常規(guī)石蠟包埋。

1.2 主要試劑 即用型兔抗人TGF-β1、Ki-67單克隆抗體、免疫組化染色SP試劑盒購自武漢博士德生物工程公司;即用型DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.3 TGF-β1及Ki-67檢測方法 采用免疫組化SP法。取上述標(biāo)本4 μm厚連續(xù)切片，經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水后行免疫組化染色?？乖迯?fù)采用高溫高壓修復(fù)法，蒸氣冒出持續(xù)3 min后自然冷卻，其后按試劑盒說明書進(jìn)行DAB顯色、蘇木素復(fù)染、中性樹脂封片、顯微鏡下觀察。用PBS取代一抗作陰性對照，已知陽性切片作陽性對照。TGF-β1陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞質(zhì)、少量位于細(xì)胞核，陽性細(xì)胞判定標(biāo)準(zhǔn)為胞質(zhì)呈淡黃色至棕褐色，其中染色強(qiáng)度以無色計0分、淡黃色計1分、棕黃色計2分、棕褐色計3分，陽性細(xì)胞數(shù) ＜5%計0分、5%～25%計1分、26%～50%計2分、﹥50%計3分，上述兩項得分之和≥3分判為陽性染色、＜3分者判為陰性染色。Ki-67陽性表達(dá)位于細(xì)胞核，呈棕色顆粒狀，任選5個高倍視野、計數(shù)100個腫瘤細(xì)胞中陽性細(xì)胞所占百分比，即為Ki-67標(biāo)記指數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計量資料以±s表示，比較用成組t檢驗;計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法;TGF-β1與Ki-67的相關(guān)性分析采用Mann-Whitney U檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TGF-β1、Ki-67在前列腺癌組織及 BPH 組織中的表達(dá) 前列腺癌組織及BPH組織中TGF-β1陽性表達(dá)者分別為35 例(70.00%)、6 例 (24.00%)，兩者陽性率比較，P ＜0.01(χ2=14.231);兩組織中Ki-67 標(biāo)記指數(shù)分別為 20.26 ±9.15、3.80 ±2.18，兩者比較，P ＜0.01(t=-8.843)。

2.2 TGF-β1、Ki-67 表達(dá)與前列腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 TGF-β1表達(dá)與前列腺癌分化程度、臨床分期及骨轉(zhuǎn)移均有關(guān)，P 均 ＜0.05(χ2值分別為7.059、4.402、4.778);Fisher確切概率法顯示，高、低分化者比較P＜0.05。Ki-67標(biāo)記指數(shù)與前列腺癌分化程度(t值在高、低分化者13.828，高、中分化者為-7.227 ，中、低分化者為 -9.005)、臨床分期(t值為-9.553)及骨轉(zhuǎn)移(t值為6.310)均有關(guān)，P均＜0.01。詳見表1。

表1 TGF-β1、Ki67表達(dá)與前列腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 前列腺癌組織中TGF-β1與Ki-67表達(dá)的相關(guān)性 前列腺癌組織中TGF-β1陽性和陰性表達(dá)者的Ki-67標(biāo)記指數(shù)分別為 24.57 ±7.05、10.2 ±4.18，Mann-Whit-ney U 檢驗顯示，Z=-5.141(P＜0.01)。

3 討論

TGF-β是一種由112個氨基酸組成的同源二聚體蛋白，為調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和分化的細(xì)胞因子超家族成員。幾乎所有的正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞均能分泌TGF-β，后者在體內(nèi)通過自分泌和旁分泌作用廣泛參與機(jī)體的各種生理病理過程。目前，在哺乳動物中僅監(jiān)測到 TGF-β 的三種不同亞型，即 TGF-β1、TGF-β2和 TGF-β3，其中 TGF-β1是主要存在形式，其相關(guān)研究也最多。研究［6］發(fā)現(xiàn)，TGF-β1可對腫瘤表現(xiàn)出相反作用，其在腫瘤發(fā)生早期可通過阻斷細(xì)胞自G1期進(jìn)入S期抑制腫瘤細(xì)胞生長，在腫瘤晚期則可通過刺激血管生成、促進(jìn)細(xì)胞擴(kuò)散、抑制免疫及合成細(xì)胞外基質(zhì)等促進(jìn)腫瘤的生長、浸潤及轉(zhuǎn)移而表現(xiàn)出惡性特征。Hsing等［7］將 TGF-β1作用于體外培養(yǎng)的前列腺細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TGF-β1具有直接誘導(dǎo)前列腺上皮細(xì)胞調(diào)亡的作用。另有研究［8］發(fā)現(xiàn)，TGF-β在前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展中具有雙重作用，其可抑制正常前列腺上皮和早期前列腺癌細(xì)胞的增殖，而在前列腺癌進(jìn)展期則可促進(jìn)腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移。Ki-67是一種與細(xì)胞周期相關(guān)的蛋白質(zhì)，其在正常組織中不表達(dá)、在多種腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，其功能與有絲分裂密切相關(guān)(但確切機(jī)制尚不清楚)，目前已經(jīng)被廣泛用作腫瘤細(xì)胞增殖情況的判斷指標(biāo)。本研究顯示，前列腺癌組織中TGF-β1陽性表達(dá)率及Ki-67標(biāo)記指數(shù)均顯著高于BPH組織。提示前列腺癌的發(fā)生可能與TGF-β1過表達(dá)引起細(xì)胞增殖與凋亡失衡、細(xì)胞生長失去控制后癌變密切相關(guān)。

研究［9］發(fā)現(xiàn)，半數(shù)以上前列腺癌患者的血漿TGF-β1濃度升高與前列腺癌浸潤、精囊腺累及、淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān);TGF-β1可促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的生長、增加前列腺癌的侵襲能力［10，11］。此外，TGF-β1與信號調(diào)節(jié)蛋白可促進(jìn)癌細(xì)胞的骨轉(zhuǎn)移［12］，而當(dāng)骨組織被吸收溶解時從骨基質(zhì)中釋放出來，進(jìn)一步為腫瘤細(xì)胞的生長和定植提供營養(yǎng)［13］。Ki-67標(biāo)記指數(shù)與腫瘤細(xì)胞的增殖及腫瘤的臨床分期、轉(zhuǎn)移、預(yù)后密切相關(guān)［14］。本研究結(jié)果顯示，TGF-β1表達(dá)和Ki-67標(biāo)記指數(shù)均隨前列腺癌分化程度降低、臨床分期進(jìn)展及骨轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)而增高，且二者在前列腺癌組織中的表達(dá)具有相關(guān)性。提示TGF-β1表達(dá)越高，前列腺癌細(xì)胞的增殖能力越強(qiáng);在進(jìn)展期的前列腺癌組織中，TGF-β1可促進(jìn)癌細(xì)胞增殖及腫瘤的臨床進(jìn)展。

綜上所述，前列腺癌組織中TGF-β1和Ki-67表達(dá)上調(diào)，此在前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移中具有重要作用。

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