舒 軍

(四川省內(nèi)江市第二人民醫(yī)院，四川內(nèi)江641100)

白花蛇舌草是傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)沿用至今的一種中藥材，屬于茜草科耳草屬的植物，生長(zhǎng)于海拔1 800 m的地區(qū)。中醫(yī)理論認(rèn)為，該藥味苦、淡，性寒，能夠清熱解毒、消痛散結(jié)、利尿除濕，臨床常用于治療各種炎癥［1－2］。然而，隨著現(xiàn)代中藥藥理學(xué)的發(fā)展，人們對(duì)白花蛇舌草的研究進(jìn)一步深入，將現(xiàn)代研究方法運(yùn)用于傳統(tǒng)中藥，發(fā)現(xiàn)白花蛇舌草可能有明顯的抗腫瘤作用［3－5］。為了進(jìn)一步研究白花蛇舌草對(duì)于腫瘤的作用及其作用機(jī)制，筆者對(duì)其提取物HD－1對(duì)人體癌細(xì)胞及小鼠實(shí)體瘤的抑制作用進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 白花蛇舌草由本院中藥房提供(產(chǎn)地:廣西)，HD－1提取物由本院藥學(xué)研究實(shí)驗(yàn)室提供。體外實(shí)驗(yàn)中人肝癌細(xì)胞HepG2、人直結(jié)腸癌細(xì)胞株HCTI 16供應(yīng)商為上海漢博生物科技。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為昆明小鼠，雌雄各半，月齡為3個(gè)月，體質(zhì)量(21．32±2．32)g，由本醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 方法

1.2.1 體外實(shí)驗(yàn) 對(duì)人體癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)采用MTT法，檢測(cè)白花蛇舌草提取物HD－1對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2和人直結(jié)腸癌細(xì)胞株HCTI 16生長(zhǎng)的抑制作用。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期癌細(xì)胞配制單細(xì)胞懸濁液，分別分入5個(gè)96孔培養(yǎng)板中，每孔接種5 000個(gè)細(xì)胞，培養(yǎng)24 h貼壁后在4個(gè)培養(yǎng)板中分別加入10，20，40，80 mg/L白花蛇舌草提取物HD－1作為實(shí)驗(yàn)組，第5個(gè)培養(yǎng)板加入同體積的培養(yǎng)液作為空白對(duì)照組，分別在20，44，68 h時(shí)取出培養(yǎng)板，加入MTT，震蕩后測(cè)量A值，2種細(xì)胞采用相同方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。抑制率=(對(duì)照組A值－給藥組A值)/對(duì)照組A值×100%。比較不同濃度HD－1、不同時(shí)間對(duì)于2種癌細(xì)胞的抑制情況。

1.2.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn) 對(duì)S180實(shí)體瘤小鼠模型進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，對(duì)比高、低劑量的白花蛇舌草提取物對(duì)荷瘤小鼠體質(zhì)量、抑瘤率、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)等指標(biāo)的影響。昆明小鼠60只，雌雄各半，抽取50只進(jìn)行造模，10只作為空白對(duì)照組，S180實(shí)體瘤小鼠造模方法參考曾永長(zhǎng)等［6］的研究。造模成功24 h后，將50只小鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、環(huán)磷酰胺(CTX)組、高HD－1組、低HD－1組、CTX聯(lián)合HD－1(CTX+HD－1)組5組，每組10只，給藥方法如下:模型對(duì)照組給予等體積生理鹽水灌胃，每天給藥;CTX組予20 mg/kg環(huán)磷酰胺腹腔注射，隔天給藥;高HD－1組予100 mg/kg HD－1灌胃，每天給藥;低HD－1組予50 mg/kg HD－1灌胃，每天給藥;CTX+HD－1組予50 mg/kg HD－1灌胃，每天給藥，隔天20 mg/kg CTX腹腔注射，每天1次。10d后頸部脫臼處死，計(jì)算腫瘤質(zhì)量，同時(shí)分別取出小鼠胸腺、肝臟、脾臟和肺臟計(jì)算各指數(shù)。抑瘤率=(模型對(duì)照組平均瘤質(zhì)量－治療組平均瘤質(zhì)量)/模型對(duì)照組平均瘤質(zhì)量×100%，臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量(mg)/體質(zhì)量(g)。1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS15．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間進(jìn)行t檢驗(yàn)，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 白花蛇舌草提取物HD－1對(duì)人體癌細(xì)胞的抑制作用體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，給藥濃度為10 mg/L對(duì)于HepG2細(xì)胞24，48，72 h 的抑制率分別為 4．82%，9．28% 和 14．55%;給藥濃度為80 mg/L對(duì)于HepG2細(xì)胞24，48，72 h的抑制率分別為13．52%，30．84%和 48．07%。給藥濃度為 10 mg/L 對(duì)于HCTI 16 細(xì)胞24，48，72 h 的抑制率分別為 3．57%，5．34% 和8．61%;給藥濃度為 80 mg/L 對(duì)于 HCTI 16 細(xì)胞 24，48，72 h的抑制率分別為16．34%，28．95%和59．34%。中藥白花蛇舌草提取物HD－1對(duì)HepG2和HCTI 16的抑制率和給藥濃度、藥物作用時(shí)間相關(guān)。見表1。

2.2 各組小鼠體質(zhì)量、瘤重及抑制率比較 與模型對(duì)照組相比，CTX組、高HD－1組、低HD－1組、CTX+HD－1組瘤質(zhì)量均減輕，抑制率分別為 56．21%，13．28%，26．47% 和56.48%。與模型對(duì)照組相比，CTX組小鼠終止體質(zhì)量顯著低于模型對(duì)照組(P＜0．05)。CTX組與CTX+HD－1組抑制率比較有顯著性差異(P＜0．05)。見表2。此外，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)CTX組小鼠在實(shí)驗(yàn)第5天時(shí)開始出現(xiàn)掉毛、皮毛顏色發(fā)暗、進(jìn)食減少等癥狀。

表1 白花蛇舌草提取物HD－1對(duì)人體癌細(xì)胞的抑制作用

表2 各組小鼠體質(zhì)量、瘤質(zhì)量及抑制率比較

2.3 各組小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)、肺臟指數(shù)比較與空白對(duì)照組比較，荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)顯著升高(P＜0．01);CTX組小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)顯著降低，肺臟指數(shù)明顯升高(P＜0．01)。與模型對(duì)照組比較，高HD－1組脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)有顯著性差異;低HD－1組脾臟指數(shù)與模型對(duì)照組有顯著性差異(P＜0.05)。CTX組與CTX+HD－1組比較，小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)、肺臟指數(shù)均有顯著性差異(P＜0．05)。見表3。

表3 各組小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)、肺臟指數(shù)比較(±s，mg/g)

表3 各組小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)、肺臟指數(shù)比較(±s，mg/g)

注:①與空白對(duì)照組比較，P＜0．01;②與模型對(duì)照組比較，P＜0.05;③與 CTX 組比較，P ＜0．05。

組別 n 胸腺指數(shù) 脾臟指數(shù) 肝臟指數(shù) 肺臟指數(shù)空白對(duì)照組 10 2．07±0．51 5．41±0．21 54．33±12．64 5．58±1．22模型對(duì)照組 10 2．43±0．14① 7．57±0．75① 67．49±6．47① 5．24±1．08 CTX 組 10 1．76±0．68① 6．63±0．47① 65．78±9．75① 10．67±2．04①高 HD －1組 10 2．11±0．11 7．64±0．62② 69．58±10．07② 7．05±1．37低 HD －1組 10 2．48±0．67 7．87±0．13② 72．36±7．14 6．48±0．82 CTX+HD －1組 10 1．89±1．06③ 7．94±0．55③ 75．49±12．57③ 6．87±1．67③

3 討 論

近年來，有很多研究表明中藥白花蛇舌草有抗腫瘤的作用，人們對(duì)其成分以及機(jī)制的研究也在不斷深入［7］。但是由于該藥所含化學(xué)成分復(fù)雜、提取種類多樣，抗腫瘤方面的研究一直處于百家爭(zhēng)鳴的狀態(tài)［8］。有學(xué)者認(rèn)為其癌細(xì)胞抑制作用是單一成分發(fā)揮作用，更多的學(xué)者認(rèn)為可能是多種化學(xué)成分共同作用甚至是協(xié)同作用抑制了癌細(xì)胞的生長(zhǎng)［9－10］。白花蛇舌草提取物HD－1含有多糖、寡糖、寡肽等成分，是白花蛇舌草醇水提取后的水部位，本研究將HD－1作為整體研究其對(duì)腫瘤的抑制作用，旨在為該藥的其他研究提供參考。

實(shí)驗(yàn)中，白花蛇舌草提取物HD－1對(duì)人體肝癌細(xì)胞HepG2和人直結(jié)腸癌細(xì)胞株HCTI 16的抑制結(jié)果顯示，中藥白花蛇舌草提取物HD－1對(duì)HepG2和HCTI 16的抑制率和給藥濃度、藥物作用時(shí)間相關(guān)。濃度越大、藥物作用時(shí)間越長(zhǎng)，對(duì)癌細(xì)胞的抑制率越高，說明提取物HD－1對(duì)于人體肝癌細(xì)胞和直結(jié)腸癌細(xì)胞均有一定的抑制作用，且在一定的濃度和作用時(shí)間范圍內(nèi)，兩種細(xì)胞的抑制作用與藥物的濃度、時(shí)間呈正相關(guān)。各組小鼠體質(zhì)量、瘤質(zhì)量及抑制率結(jié)果顯示，CTX組、高HD－1組、低HD－1組、CTX+HD－1組瘤重均減輕，說明4組藥物在小鼠體內(nèi)都能達(dá)到抑瘤的效果。但是，與模型對(duì)照組相比，CTX組小鼠終止體質(zhì)量低于模型對(duì)照組，且實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)CTX組小鼠在實(shí)驗(yàn)第5天時(shí)開始出現(xiàn)掉毛、皮毛顏色發(fā)暗、進(jìn)食減少等癥狀，可能與CTX毒性有關(guān)。CTX是臨床常用的免疫抑制劑，能夠抑制細(xì)胞的增殖，其毒副作用常表現(xiàn)為骨髓抑制及對(duì)消化、泌尿系統(tǒng)的刺激作用［11］。而高HD－1組、低HD－1組、CTX+HD－1組瘤重均減輕均未出現(xiàn)類似的不良反應(yīng)，說明白花蛇舌草本身的毒性作用較小，與CTX聯(lián)合使用可能會(huì)降低其毒性作用。實(shí)驗(yàn)中，各組小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)、肺臟指數(shù)顯示，與空白對(duì)照組比較，荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)顯著升高，CTX組小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)顯著降低，肺臟指數(shù)明顯升高。與模型對(duì)照組比較，高HD－1組脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)有顯著性差異;低HD－1組脾臟指數(shù)與模型對(duì)照組有顯著性差異。CTX組與CTX+HD－1組比較，小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)、肺臟指數(shù)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)是反應(yīng)免疫能力的重要指標(biāo)，空白對(duì)照組小鼠各指數(shù)增高可能與腫瘤種植過程中機(jī)體自身免疫反應(yīng)有關(guān);而CTX組小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)顯著降低，說明CTX明顯抑制了機(jī)體的免疫反應(yīng)，進(jìn)而達(dá)到了抑制癌細(xì)胞的作用。高HD－1組與低HD－1組在肝臟指數(shù)上存在差異，表明兩種劑量在抗癌效果上有差異，需要以后進(jìn)一步研究。古學(xué)文等［12］研究表明，白花蛇舌草可能直接刺激人體的免疫系統(tǒng)，促進(jìn)B細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，增加IgG的含量;或者是刺激人體的T細(xì)胞，在特異性免疫應(yīng)答中發(fā)揮作用。CTX組與CTX+HD－1組中，各指數(shù)均有顯著性差異，說明聯(lián)合對(duì)于免疫抑制的作用值得肯定，且根據(jù)表2的結(jié)論，聯(lián)合療法的毒性作用可能小于CTX單獨(dú)作用，說明聯(lián)合療法具有更廣的研究?jī)r(jià)值。

通常體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)是篩選抗腫瘤藥物的常用研究方法，MTT法檢測(cè)體外實(shí)驗(yàn)已經(jīng)被廣泛認(rèn)可，這就保證了實(shí)驗(yàn)的可靠性［13－14］。但是對(duì)于白花蛇舌草的研究還需要進(jìn)一步完善，筆者認(rèn)為下一步應(yīng)該理清思路，將腫瘤抑制定位到某種化學(xué)成分進(jìn)行更加細(xì)致的研究，才能真正認(rèn)識(shí)該藥。綜上所述，中藥白花蛇舌草提取物體外能夠明顯抑制人肝癌細(xì)胞HepG2和人直結(jié)腸癌細(xì)胞株HCTI 16的生長(zhǎng)，能夠明顯抑制小鼠體內(nèi)實(shí)體瘤的生長(zhǎng)。

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