張 杰，崔艷娜，劉繡華＊

（1.河南大學(xué) 化學(xué)生物學(xué)研究所，河南省天然藥物與免疫工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 開封 475004；2.河南大學(xué) 化學(xué)化工學(xué)院，環(huán)境與分析科學(xué)研究所，河南 開封 475004）

安石榴苷是一種可水解的單寧，可從石榴皮、使君子科欖仁樹的葉、訶子等少數(shù)植物中分離得到，為石榴皮中較為特異性的成分.石榴皮是石榴科植物石榴（Punica granatumL.）的干燥果皮，為我國傳統(tǒng)中藥材，具有澀腸止瀉、止血、驅(qū)蟲的功效，可以用于治療久瀉、久痢、便血、脫肛、崩漏、帶下、蟲積腹痛等疾病［1-2］.研究表明，安石榴苷是石榴皮鞣花單寧的主要成分，含量達(dá)到10%左右（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同）［3-4］；?AM［5］等測定了干燥的石榴皮中安石榴苷的含量為（116.6±12.2）mg/g；LU［6］等考察了不同品種石榴皮中安石榴苷的含量為39.8～121.5mg/g.由于安石榴苷具有一系列較好的藥理活性，近年來引起了國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注，使得安石榴苷的研究發(fā)展迅速.本文作者著重從安石榴苷的結(jié)構(gòu)、提取分離方法、含量測定、活性及代謝方式等幾個方面進(jìn)行綜述，為進(jìn)一步綜合開發(fā)利用石榴皮資源提供參考.

1 安石榴苷的理化性質(zhì)

安石榴苷為棕黃色不定型粉末，極性很強(qiáng)，易溶于水，可溶于甲醇、乙醇、乙腈等多種有機(jī)溶劑［7］，在酸、堿、光照或高溫等條件下不穩(wěn)定，可逐步降解成安石榴林和鞣花酸等［8-9］，具有可水解單寧的一切理化性質(zhì).安石榴苷結(jié)構(gòu)中含有多個酚羥基，分子式為C48H28O30，相對分子質(zhì)量為1 084.72，存在一對同分異構(gòu)體，分別為α-安石榴苷和β-安石榴苷，并且二者能夠相互轉(zhuǎn)換.?AM［5］等人通過高效液相色譜面積積分法發(fā)現(xiàn)α、β-安石榴苷的含量比為35∶65（m∶m），其中當(dāng)這對同分異構(gòu)體的含量比為3∶7（m∶m）時(shí)二者能夠快速地轉(zhuǎn)換［10］.KRASZNI［11］等研究了安石榴苷溶液的pH（pH＝2～8）與α、β-安石榴苷的含量比之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)當(dāng)溶液pH在2～3.5之間，隨著pH的增大含量比逐漸增大，在pH＝3.5時(shí)含量比達(dá)到最大，之后在pH為3.5～8的范圍內(nèi)隨著pH的增大含量比逐漸減小.LU［12］等考察了安石榴苷的穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)光照、加熱、酸、堿和強(qiáng)氧化劑都能影響安石榴苷的穩(wěn)定性，并且Fe3＋和Cu2＋能夠和安石榴苷絡(luò)合.

2 安石榴苷的提取與分離純化

目前，安石榴苷的提取多采用溶劑加熱回流、浸泡和超聲提取法，提取劑大多為不同濃度的有機(jī)溶液，也有文獻(xiàn)報(bào)道采用水作為提取溶劑.研究發(fā)現(xiàn)，用水提取安石榴苷的提取率較有機(jī)溶劑高，但安石榴苷在水中不穩(wěn)定［13］.因此，綜合考慮提取率和安石榴苷的穩(wěn)定性等因素，宜采用有機(jī)溶劑-水的混合溶液作為提取劑來達(dá)到較好的提取效果.安石榴苷的分離純化主要依賴于多次柱色譜分離，包括凝膠LH-20色譜、MCI-gel CHP-20P、DiaionHP-20色譜等，但這些方法存在耗時(shí)、耗力、浪費(fèi)溶劑等缺點(diǎn).近年來隨著分離技術(shù)的不斷發(fā)展，出現(xiàn)了一些新的分離純化方法，如高速逆流色譜（HSCCC）、高效液相色譜（HPLC）等，這些新方法的建立大大提高了安石榴苷的分離效率.

?AM［5］等利用快速溶劑萃取儀（ASE 300，Dionex Corporation，Sunnyvale，CA，USA）確定了用水做提取液在加壓的條件下提取石榴皮中多酚的最佳條件：石榴皮粒徑65～212μm，提取壓力102.1atm，提取溫度40℃，靜態(tài)浸提時(shí)間5min，沖洗體積為萃取池體積（100mL）的5%，提取次數(shù)兩次，其中提取的多酚的主要成分為安石榴苷.此方法的優(yōu)點(diǎn)在于只采用水做提取劑，減少了有機(jī)溶劑對石榴皮多酚的污染，并且加壓提取大大縮短了提取時(shí)間.朱靜［3］建立了實(shí)驗(yàn)室和工業(yè)提取石榴皮的方法.實(shí)驗(yàn)室提取安石榴苷采用80%丙酮（提取液均采用體積分?jǐn)?shù)，下同）作提取劑，料（干石榴皮粉）液（80%丙酮-水）比為1∶25（m∶V），60℃提取2h；工業(yè)提取石榴皮中安石榴苷采用60%丙酮或70%甲醇為提取劑，料液比為1∶6（m∶V），60℃水浴回流提取2h.然后利用AB-8樹脂純化，吸附量為20mg/g，解析劑為30%甲醇或30%～40%乙醇，純化后安石榴苷的純度為粗品的2.5倍.DOIG［7］等利用甲醇-水（V∶V＝1∶1）提取欖仁樹樹葉，提取液用Ca（OH）2沉淀，沉淀濾出并用HCl溶解，上清液經(jīng)聚酰胺樹脂、凝膠LH-20、XAD-2、制備型LH-20色譜、半制備HPLC分離得α-安石榴苷和β-安石榴苷.SEERAM［8］等將石榴皮粉末用水提取得提取液，隨后經(jīng)離子交換樹脂XAD-16純化，用水、甲醇洗脫，洗脫得到的甲醇部分濃縮后經(jīng)HPLC測定，其中安石榴苷含量為77%～85%（產(chǎn)品含量均為質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同.見圖1）.將此甲醇洗脫部分經(jīng)多次凝膠LH-20色譜分離純化，洗脫溶劑選用不同比例的甲醇-水、乙醇-水-丙酮溶液，分離得到安石榴苷純品.李海霞［14］等將石榴皮提取液分別用溶液萃取法、明膠沉淀法、DiaionHP-20柱色譜和ToyopertlHW-40C柱色譜分離，發(fā)現(xiàn)在Toyopertl-HW-40C柱色譜分離中甲醇-丙酮-水洗脫部分的安石榴苷含量最高，其余洗脫部分幾乎不含安石榴苷.TAKASHI［15］等將石榴皮提取液經(jīng)凝膠LH-20、MCI-gel CHP-20P樹脂多次分離，從石榴皮粗提物中分離得到安石榴苷，提取率為0.14%.LEE［16］等在室溫下采用70%丙酮提取石榴皮2h，提取液經(jīng)HP-20樹脂純化、制備HPLC分離獲得安石榴苷純品.LU［12］等利用制備型HPLC儀從30%的安石榴苷粗品中分離純化獲得98.05%的安石榴苷，分離條件為甲醇和0.1%三氟乙酸水溶液做流動相，14%甲醇-水溶液恒梯度洗脫.

圖1 石榴皮總單寧的高效液相色譜圖（1為α、β-安石榴苷）Fig.1 HPLC chromatogram of total tannins purified from pomegranate husk（1：α、β-punicalagin）

JAIN［17］等將石榴皮粉末用甲醇提取，提取物分別用乙酸乙酯、正丁醇以4∶1的比例萃取，正丁醇相經(jīng)Diaion柱色譜和凝膠色譜分離獲得了純度為91%的安石榴苷.LIU［18］等在常溫下將欖仁樹樹葉用丙酮浸泡48h，浸提液分別用乙酸乙酯和正丁醇萃取，正丁醇相經(jīng)凝膠LH-20色譜、MCI Gel CHP-20P色譜、半制備HPLC分離，獲得安石榴苷純品.CHEN［19］等用70%的丙酮-水溶液提取棕欖仁樹樹葉，獲得的丙酮提取物經(jīng)Diaion HP-20色譜、HW-40C色譜、反相C18色譜分離，獲得純度大于95%的安石榴苷.BIALONSKA［20］等將石榴皮提取液分別用乙酸乙酯和正丁醇萃取，正丁醇相經(jīng)XAD-16離子交換樹脂、凝膠LH-20色譜多次分離，制得安石榴苷.KULKARNI［21］等將石榴內(nèi)膜用正己烷、氯仿、乙酸乙酯和甲醇分別提取得提取液，用清除DPPH自由基活性跟蹤的方法，確定甲醇作提取劑，甲醇提取物經(jīng)硅膠柱色譜分離，采用氯仿、乙酸乙酯和不同比例的甲醇-氯仿-乙酸乙酯混合有機(jī)溶劑洗脫，制備出安石榴苷.劉延澤［22］等用丙酮-水混合液浸泡提取石榴皮，提取物經(jīng)DianionHP-20、Toyopearl HW-40和MCI Gel CHP-20色譜柱分離得到安石榴苷純品.ENDO［23］等利用50%乙醇溶液室溫下提取石榴皮，浸提液依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，乙酸乙酯相經(jīng)凝膠LH-20色譜、Lobar色譜分離，獲得安石榴苷.LU［24］等將石榴皮粉末用40%乙醇-水溶液超聲提取，提取液用乙醚、乙酸乙酯等體積萃取，剩余水相經(jīng)冷凍干燥得到純度為41%的安石榴苷粗品，利用HSCCC分離，從安石榴苷粗品中分離得到含量為92%的安石榴苷（見圖2）.

圖2 石榴皮粗提物的高速逆流色譜圖Fig.2 HSCCC chromatogram of crude extract of pomegranate husk

JEAN-GILLES［25］等將30%的安石榴苷粗品經(jīng)多次凝膠LH-20色譜分離，獲得安石榴苷的純品.FARRUKH［26］等用水提取石榴皮，提取液經(jīng)XAD-16樹脂分離得到安石榴苷，提取率為2.7%.QU［27］等用水提取石榴皮中多酚類成分，發(fā)現(xiàn)在最初30min的提取時(shí)間內(nèi)安石榴苷的含量隨時(shí)間的增加而升高，在30～60 min內(nèi)含量基本保持不變，在60～90min內(nèi)含量快速升高.研究發(fā)現(xiàn)，最初含量的升高可能是由于安石榴苷溶解度的改變以及多酚電離出氫離子使提取液呈弱酸性，增大了多酚的擴(kuò)散系數(shù)［28］；之后安石榴苷含量快速升高可能是由于石榴皮中鞣花酸和沒食子酸這些低聚物發(fā)生變化，或聚合形成了安石榴苷［29］.

3 安石榴苷的結(jié)構(gòu)鑒定

安石榴苷結(jié)構(gòu)（見圖3）中含有一個hexahydroxydiphenoyl單元（HHDP）、一個Gallagyl單元和一個葡萄糖，其中葡萄糖的C2、C3與HHDP結(jié)構(gòu)單元連接，C4、C6與Gallagyl單元連接.1986年TAKASHI［15］等用光譜學(xué)的方法首次對安石榴苷結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，確定了安石榴苷的結(jié)構(gòu)式，隨后不斷有學(xué)者采用紫外（UV）、紅外（IR）、核磁共振（NMR）等譜學(xué)手段測定了安石榴苷及其類似物的結(jié)構(gòu).

圖3 安石榴苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.3 Chemical structure of punicalagin

MACHADO［30］和ROMANI［31］等測定了α、β-安石榴苷的紫外吸收光譜，發(fā)現(xiàn)這一對同分異構(gòu)體在258 nm和380nm處有較大吸收；GIL［10］等在分析α、β-安石榴苷的高效液相色譜-質(zhì)譜（HPLC-MS）譜圖中發(fā)現(xiàn)存在1 083（M-H）、781（M-ellagic）、601（gallagic acid）、301（ellagic acid）等碎片離子峰（見圖4）.JAIN［17］等測定了安石榴苷的紅外光譜，數(shù)據(jù)表明：C-H鍵在2 900～2 750cm-1處有伸縮振動峰，在1 348.30cm-1處有彎曲振動峰；O-H在3 450～3 000cm-1處有伸縮振動峰；C＝O在1 732cm-1處有伸縮振動峰；C-O在1 182.41～1 176.63cm-1處有伸縮振動峰；苯環(huán)上的C＝C在1 600.02cm-1處有伸縮振動峰.

DOIG［7］等測試了安石榴苷的1H-NMR和13C-NMR譜圖，其中1H-NMR（400MHz，Acetone-d6）數(shù)據(jù)表明結(jié)構(gòu)中葡萄糖H1的化學(xué)位移為5.11，其他氫質(zhì)子H2-H6的化學(xué)位移分別為4.80，5.21，4.76，3.27，4.22（H6a），2.09（H6b）；Gallagyl集團(tuán)上的兩個芳香質(zhì)子的化學(xué)位移為7.02和6.52/6.58；HHDP集團(tuán)上兩個芳香質(zhì)子的化學(xué)位移為6.52和6.58；結(jié)構(gòu)中17個羥基質(zhì)子的化學(xué)位移為5.99和7.59～10.31.安石榴苷的13CNMR（數(shù)據(jù)見表1）測試數(shù)據(jù)表明結(jié)構(gòu)中含有48個碳原子，分別為6個羰基碳（δC157.0～168 .0），6個糖基碳（δC63.3～89 .0），以及36個芳香碳（δC105.0～147 .0）.

表1 安石榴苷的13C-NMR數(shù)據(jù)（100MHz，DMSO-d6）Table 1 13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）data of punicalagin

續(xù)表1

圖4 安石榴苷的質(zhì)譜裂解過程Fig.4 MS Fragmentation process of punicalagin

4 安石榴苷的分析測定

由于石榴皮提取物中包含多種與安石榴苷結(jié)構(gòu)相近的類似化合物，且安石榴苷自身具有同分異構(gòu)體，因此安石榴苷的分析檢測比較困難，目前主要依賴于反相高效液相色譜法（RP-HPLC）檢測.LU［6］等用RPHPLC測定了不同產(chǎn)地石榴皮中安石榴苷及其同分異構(gòu)體的含量.羅玉琴［13］等建立了RP-HPLC測定石榴皮提取物陰道泡騰片中安石榴苷和鞣花酸含量的方法.李海霞［14］等用RP-HPLC測定了不同采集地（河南鄭州、北京、湖北襄樊）石榴皮中安石榴苷的含量；另外，在乙醇-乙酸乙酯-0.01mol/L磷酸-0.01mol/L磷酸二氫鉀做流動相時(shí)，將安石榴苷標(biāo)準(zhǔn)品用硼氫化鈉還原后得到了一個分離度較好的單峰，進(jìn)一步證明了安石榴苷存在α、β同分異構(gòu)體.QU［27］等用RP-HPLC同時(shí)測定了石榴皮中安石榴苷、鞣花酸、沒食子酸的含量.劉振平［32］等也采用RP-HPLC測定了石榴皮中安石榴苷、鞣花酸和石榴皮鞣素的含量，發(fā)現(xiàn)石榴皮中安石榴苷含量在5%～6%左右，之后又建立了檢測石榴汁中沒食子酸、石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸的方法［33］.其中采用硼氫化鈉還原法可將安石榴苷同分異構(gòu)體的兩個峰合并成一個峰進(jìn)行測定，簡化了測試方法.但是該方法也存在缺點(diǎn)，因?yàn)楸Ａ舭彩褴胀之悩?gòu)體的雙峰形式有利于對兩種異構(gòu)體分別進(jìn)行定量，并且硼氫化鈉的加入可能會影響石榴皮中其他成分的檢測.趙海燕［34］等用RP-HPLC測定了保健食品中安石榴苷和鞣花酸的含量.紀(jì)白慧［35］等用毛細(xì)管電泳法測定了石榴皮中安石榴苷和鞣花酸的含量，其中安石榴苷和鞣花酸在12min內(nèi)達(dá)到完全分離（具體分析條件見表2）.

表2 安石榴苷的測定方法Table 2 Determination methods of punicalagin

5 安石榴苷的活性

近年來國內(nèi)外對安石榴苷的研究主要集中在安石榴苷的活性上，并逐步發(fā)現(xiàn)安石榴苷具有很強(qiáng)的抗氧化、抗癌、抗菌、抗病毒及抗炎等作用.

5.1 安石榴苷的抗氧化作用

SEERAM［36］等人研究了安石榴苷、鞣花酸、石榴總單寧和石榴汁的抗氧化活性，發(fā)現(xiàn)這四種物質(zhì)的強(qiáng)弱順序?yàn)椋菏裰臼窨倖螌帲景彩褴眨诀坊ㄋ?，其中安石榴苷的抗氧化性是由自身結(jié)構(gòu)中高度的羥基化引起的［37-38］.GIL［10］等發(fā)現(xiàn)石榴汁具有強(qiáng)抗氧化性，其中50%的抗氧化能力是由安石榴苷貢獻(xiàn)的.CHEN［39］等研究了欖仁樹樹葉的水提物和安石榴苷對中國倉鼠卵巢細(xì)胞中由爭光霉素引起的基因突變的治療作用，發(fā)現(xiàn)兩者都能阻止磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的突變和DNA鏈的斷裂及細(xì)胞內(nèi)自由基如超氧化物和過氧化氫的產(chǎn)生，原因可能是二者具有強(qiáng)抗氧化性.KULKARNI［40］等證實(shí)安石榴苷對由脂質(zhì)、氨基酸構(gòu)成的蛋白質(zhì)和鳥苷構(gòu)成的DNA有抗氧化作用，此作用是通過安石榴苷對自由基的清除作用和對金屬離子的螯合作用實(shí)現(xiàn)的.KULKARNI［21］等還對安石榴苷的抗氧化活性機(jī)制進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)其具有較強(qiáng)的DPPH自由基清除能力、超氧化物自由基清除能力和抗脂質(zhì)過氧化活性.其中安石榴苷是通過清除過氧化氫自由基實(shí)現(xiàn)鏈終止反應(yīng)來體現(xiàn)抗脂質(zhì)過氧化活性，而自由基清除能力主要是由于安石榴苷結(jié)構(gòu)中含有多個酚羥基，這些酚羥基能夠通過額外的共振穩(wěn)定性、鄰醌和苯醌的形式增加自身的抗氧化性［41-42］.梁?。?3］等研究了石榴皮多酚的抗脂質(zhì)過氧化作用及其關(guān)鍵作用的成分，發(fā)現(xiàn)安石榴苷、鞣花酸和石榴皮多酚均能有效抑制體外金屬離子誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化，其中安石榴苷的抗脂質(zhì)過氧化能力大于鞣花酸和石榴皮多酚純化物，說明安石榴苷是石榴皮多酚中抗脂質(zhì)過氧化的關(guān)鍵物質(zhì).CHEN［44］等發(fā)現(xiàn)富含安石榴苷的石榴汁能減少體內(nèi)和體外的應(yīng)激氧化以及外植體自發(fā)或誘發(fā)導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡，因此在孕婦飲食中補(bǔ)充石榴汁有可能減少應(yīng)激氧化和胎盤滋養(yǎng)層中因刺激導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡，降低由于胎盤功能紊亂引起的孕期疾病的發(fā)生率.

5.2 安石榴苷的抗腫瘤、抗癌作用

SEERAM［36］等研究了安石榴苷、鞣花酸、石榴總單寧和石榴汁的體外抗惡性腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的活性，發(fā)現(xiàn)石榴汁具有較強(qiáng)的抗惡性腫瘤細(xì)胞增殖的活性，安石榴苷、鞣花酸、石榴汁和石榴總單寧都具有誘導(dǎo)HT-29結(jié)腸腫瘤細(xì)胞凋亡的性質(zhì)，除了石榴汁外，其他三者具有誘導(dǎo)HCT116結(jié)腸腫瘤細(xì)胞凋亡的能力，安石榴苷能夠抑制人體口腔、結(jié)腸、前列腺腫瘤細(xì)胞增殖，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡.CHEN［19］等證實(shí)了安石榴苷能抑制HL-60腫瘤細(xì)胞的生長和聚腺苷二磷酸核糖核苷酶的活性.AFAQ［45］等報(bào)道了石榴汁中的安石榴苷具有抑制人類癌癥細(xì)胞增殖的性質(zhì).CHEN［39］等通過研究發(fā)現(xiàn)安石榴苷可防止中國倉鼠卵巢細(xì)胞中由爭光霉素誘導(dǎo)的基因突變和DNA鏈斷裂，從而體現(xiàn)出抗癌作用.CHEN［46］等還在小鼠變形的原癌基因NIH3T3細(xì)胞增殖擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，安石榴苷能抑制變形的NIH3T3細(xì)胞增殖，對于未變形的NIH3T3細(xì)胞有部分影響.這可能是由于安石榴苷能抑制NIH3T3細(xì)胞內(nèi)的氧化還原反應(yīng)和JNK-1/p38的活性，從而阻止原癌基因被誘導(dǎo)發(fā)生變形.實(shí)驗(yàn)證實(shí)濃度為100mg/L的安石榴苷能誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞（HT-29、HCT116）和前列腺癌細(xì)胞凋亡［47-49］.FARRUKH［26］等通過研究發(fā)現(xiàn)安石榴苷能抑制氧化的DNA發(fā)生損傷，對肺部、乳房、宮頸癌細(xì)胞具有抗細(xì)胞增生的活性.

5.3 安石榴苷的抗菌、抗病毒和抗炎作用

BIALONSKA［50］等研究了不同的石榴單寧對人類腸道菌的作用，發(fā)現(xiàn)安石榴苷對腸道菌的生長具有較強(qiáng)的抑制作用.SILVA［51］等證實(shí)了欖仁樹屬翅衛(wèi)矛的根部對幽門螺桿菌具有抑制作用，從而確定此植物能用于治療胃部疾病.研究表明，此植物的主要有效活性成分為安石榴苷和鞣花單寧，從而發(fā)現(xiàn)了安石榴苷具有抑制幽門螺桿菌的活性.KHENNOUF［52］等也發(fā)現(xiàn)安石榴苷能夠保護(hù)小鼠的胃粘膜防止被誘導(dǎo)產(chǎn)生病變損傷.LIU［18］等發(fā)現(xiàn)安石榴苷對近平滑假絲酵母菌、克柔假絲酵母菌和白色念珠菌有抑制作用.BIALONSKA［53］報(bào)道了石榴副產(chǎn)物和安石榴苷能有效地抑制大腸桿菌、綠膿桿菌、梭狀芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌等致病細(xì)菌的生長.ENDO［23］等發(fā)現(xiàn)安石榴苷具有較強(qiáng)的抑制白色念珠菌和近平滑念珠菌的活性，并且石榴皮的強(qiáng)抗真菌活性很大一部分是依賴于安石榴苷的存在實(shí)現(xiàn)的.不少學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)安石榴苷具有抑制金黃色葡萄球菌、出血性大腸桿菌的活性，其主要機(jī)理為抑制菌膜中蛋白質(zhì)使之發(fā)生沉淀，抑制糖基轉(zhuǎn)移酶的活性［54-58］.另外，還有一些報(bào)道證實(shí)了安石榴苷具有低到中度的抗細(xì)菌和抗真菌性質(zhì)［59-64］.

GIL和NONAKA［10，65］等報(bào)道了安石榴苷能抑制病毒、減少呼吸疾病和流行性感冒的發(fā)生.LIN［66］等證明了安石榴苷能針對性的滅活單純皰疹病毒，預(yù)防此病毒滲透進(jìn)入細(xì)胞以及在細(xì)胞與細(xì)胞間傳播.LIN［67］等還發(fā)現(xiàn)安石榴苷能有效地消除人體巨細(xì)胞病毒HCMVM、肝炎C病毒HCV、登革熱病毒DEN、麻疹病毒MV、呼吸合細(xì)胞體病毒RSV的感染，安石榴苷能不同程度地抑制病毒的附著、滲透、傳播，并且可以完全抑制HCMV、HCV和MV病毒的感染，但是對DENV和RSV病毒則不能完全抑制，這可能同安石榴苷與各類病毒作用方式不同有關(guān).YANG［68］等發(fā)現(xiàn)安石榴苷能減弱橫紋肌肉瘤細(xì)胞中由腸病毒引起的細(xì)胞病變效應(yīng)，減少因此病毒導(dǎo)致的死亡，通過阻止此病毒的復(fù)制能減輕手足口病的臨床癥狀，因此安石榴苷可以作為腸病毒71的抑制劑.

LIN［69］等發(fā)現(xiàn)安石榴苷對由卡拉膠引發(fā)的小鼠炎癥具有一定的抗性，在安石榴苷的使用量為5mg/kg時(shí)對炎癥有抑制作用，隨著安石榴苷劑量的增加，10mg/kg的安石榴苷對炎癥具有28.15%的抑制率，通過研究發(fā)現(xiàn)安石榴苷能調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞信號的傳輸途徑［70］，可以用于皮炎和肝炎的治療［39］.JEAN-GILLES［25］等發(fā)現(xiàn)安石榴苷、鞣花酸和石榴中其他多酚能抑制MMP-13膠原酶對Ⅱ型膠原蛋白的降解，從而阻止關(guān)節(jié)中軟骨的破壞，防止關(guān)節(jié)炎的發(fā)生，其中安石榴苷的抑制作用與其濃度呈劑量依賴關(guān)系.ROJANATHAMMANEE［71］等通過細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)安石榴苷和鞣花酸能減弱細(xì)胞株內(nèi)激活的胸腺細(xì)胞核因子（NFAT）的活性，通過小膠質(zhì)神經(jīng)降低腫瘤壞死因子α（TNF-α）中受激的類淀粉蛋白分泌物的產(chǎn)生，進(jìn)而說明日常飲食的石榴產(chǎn)品能在腦髓中產(chǎn)生抗炎作用，降低老年癡呆癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn).HOLLEBEECK［72］等發(fā)現(xiàn)富含安石榴苷的石榴皮多酚提取物具有抑制體外人體腸細(xì)胞炎癥的作用，可以作為腸道慢性炎癥的天然治療劑.LEE［16］等篩選1 400種中草藥萃取物發(fā)現(xiàn)石榴皮中安石榴苷是一種有效的免疫抑制劑，它可以抑制激活的T細(xì)胞中核因子的活性.在活體實(shí)驗(yàn)中，安石榴苷能防止小鼠體內(nèi)由佛波醇12-十四酸酯13-乙酸鹽（PMA）引起的慢性水腫的發(fā)生，阻止發(fā)炎組織中CD3＋細(xì)胞的滲透.

5.4 安石榴苷和其他化合物的協(xié)同作用

KULKARNI［21］等從石榴果實(shí)內(nèi)膜的甲醇提取物中分離得到安石榴苷純品，并比較了兩者的自由基清除活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲醇提取物比安石榴苷純品表現(xiàn)出更強(qiáng)的自由基清除能力，由此推測，甲醇提取物中包括安石榴苷在內(nèi)的多酚化合物可能通過協(xié)同作用提高了提取物的作用活性.MEHRAN［4］等通過研究發(fā)現(xiàn)石榴多酚萃取物能阻止犬腎（MDCK）細(xì)胞中甲型流感病毒的復(fù)制，其中多酚萃取物中主要抗病毒物質(zhì)為安石榴苷；另外，當(dāng)石榴多酚萃取物與抗流感藥物奧司他韋（oseltamivir）聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，多酚萃取物可以提高奧司他韋的抗流感病毒能力.他們利用等效線法確定了石榴多酚萃取物與奧司他韋之間存在協(xié)同作用.ENDO［23］等通過研究證明安石榴苷具有抗真菌活性，當(dāng)其與抗真菌藥物氟康唑（fluconazole）聯(lián)合用藥時(shí)，能大大增強(qiáng)氟康唑的抗真菌活性，使最低抑菌濃度降低了兩倍.他們利用等效線圖解法確定了安石榴苷與氟康唑之間存在協(xié)同作用，分級抑菌濃度（FIC）指數(shù)為0.25.ROSENBLAT［73］等研究發(fā)現(xiàn)心血管系統(tǒng)用藥辛伐他汀能降低巨噬細(xì)胞中42%膽固醇的合成和巨噬細(xì)胞中活性氧的形成.當(dāng)在辛伐他汀中加入安石榴苷后對巨噬細(xì)胞中膽固醇的合成抑制率為62%，對活性氧形成的抑制率為61%～79%，因此將辛伐他汀與安石榴苷結(jié)合能有效地減少巨噬細(xì)胞中泡沫細(xì)胞的產(chǎn)生，阻止動脈粥樣化的形成.

此外，安石榴苷還具有一些其他的生理活性，如GUAN［74］等發(fā)現(xiàn)安石榴苷通過抑制小鼠TNF-α，IL-1β，IL-6細(xì)胞因子的產(chǎn)生，降低蛋白濃度及綠過氧物酶活性，對于由LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷顯示出負(fù)調(diào)節(jié)的效應(yīng).該研究為急性肺損傷的臨床治療提供了一種新的策略.ITO［75］等在體外活性測試實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)安石榴苷具有抑制晚期糖基化終產(chǎn)物形成的作用，IC50為0.14mol/L，優(yōu)于陽性對照氨基胍（IC50＝2.47 mol/L）.OLAJIDE［76］等發(fā)現(xiàn)安石榴苷通過干擾NF-κB的信號傳遞，能夠抑制小鼠由脂多糖（LPS）激活的小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)，表明安石榴苷在神經(jīng)退行性疾病中有作為一種營養(yǎng)性預(yù)防策略的潛力.LIN［77］等發(fā)現(xiàn)CCl4能夠降低小鼠血清中的谷氨酸-草酸-轉(zhuǎn)氨酶和谷氨酸-丙酮-氨基酶的含量，但通過服用安石榴苷，血清中谷氨酸-草酸-轉(zhuǎn)氨酶和谷氨酸-丙酮-氨基酶的含量均有升高.受CCl4損害導(dǎo)致的肝臟中心血管處的組織損傷也可以通過安石榴苷得到修復(fù)，從而表明安石榴苷具有抗肝毒素的活性，具有良好的保肝作用［78］；ROSENBLAT［79］等發(fā)現(xiàn)安石榴苷和石榴汁能夠降低小鼠腹膜巨噬細(xì)胞內(nèi)甘油三酸酯的含量及合成率，而甘油三酸酯的水解速率并不受安石榴苷和石榴汁的影響.WU［80］等通過研究證明安石榴苷、鞣花酸和石榴皮提取物能有效的抑制脂肪酸合酶的活性，減少脂肪酸合酶內(nèi)脂質(zhì)的堆積，進(jìn)而阻止脂肪酸的生物合成，降低肥胖的發(fā)生率，有助于肥胖癥的治療［81］.GREENSPAN［82］等通過研究證明石榴汁較之其他的果汁有更強(qiáng)的抑制果糖糖化蛋白的作用，而在石榴汁中加入其他的多酚能夠加強(qiáng)此作用.此外還發(fā)現(xiàn)石榴汁中的安石榴苷和鞣花酸同樣具有很強(qiáng)的抑制果糖糖化蛋白的作用，因此安石榴苷有可能作為一種治療糖尿病的天然試劑進(jìn)行開發(fā)利用.

雖然安石榴苷具有以上諸多抗氧化、抗菌、抗病毒、抑制腫瘤細(xì)胞增殖等活性，但安石榴苷對人體可能還存在一些負(fù)面影響.有研究報(bào)道安石榴苷能導(dǎo)致牛肝臟壞死和腎病毒的產(chǎn)生［83-84］，但是這些負(fù)面影響只是在大劑量服用安石榴苷時(shí)才會產(chǎn)生［78］.

6 安石榴苷在體內(nèi)的代謝方式

研究表明，當(dāng)服用大劑量的安石榴苷后，活體血漿中安石榴苷的含量并不是很高［85］，在人體循環(huán)系統(tǒng)中幾乎檢測不到安石榴苷的存在［86-87］，只檢測到痕量的鞣花酸［48］，這表明安石榴苷在活體內(nèi)可能并不是直接被吸收［88］，而是在腸道內(nèi)經(jīng)過幾個小時(shí)的水解成為鞣花酸［86］.LARROSA［47］等也發(fā)現(xiàn)沒有特定的效應(yīng)證明抑制腫瘤細(xì)胞是安石榴苷起的作用，因?yàn)榘彩褴赵谌梭w酶的作用下發(fā)生水解產(chǎn)生鞣花酸，進(jìn)入細(xì)胞后代謝產(chǎn)生二甲基-鞣花酸衍生物.分析表明安石榴苷的抗癌效應(yīng)可能是由于安石榴苷水解產(chǎn)生的鞣花酸通過線粒體途徑誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡，而不會對正常的細(xì)胞產(chǎn)生影響.安石榴苷在人體的代謝途徑可能是安石榴苷進(jìn)入人體后到達(dá)結(jié)腸并在此釋放出鞣花酸，進(jìn)而被微生物群代謝成為尿石素（urolithins）、葡萄糖苷酸和相關(guān)的鹽［48，85，88-89］.

7 結(jié)語與展望

安石榴苷是石榴皮中的一種特異性成分，具有抗氧化、抑制腫瘤、抗菌消炎等多種生理活性，在醫(yī)療、保健、功能性食品和化妝品等領(lǐng)域都有很好的應(yīng)用前景.為了更好的開發(fā)利用安石榴苷，還需要在以下方面進(jìn)行深入研究與探索：1）高純度安石榴苷的制備工藝研究.安石榴苷結(jié)構(gòu)復(fù)雜，很難通過化學(xué)合成的方式大量獲得，目前市場上主要是低純度的安石榴苷產(chǎn)品，高純度的產(chǎn)品價(jià)格昂貴，且不能大量購得，因此急需建立簡單、快速、低廉的高純度安石榴苷的制備工藝，為安石榴苷的深入研究和開發(fā)利用提供來源保障；2）安石榴苷具有多種藥理功效，但對其活性的作用機(jī)制研究尚不深入，需要開展更廣泛和深入的藥理研究，促進(jìn)安石榴苷的進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用.

石榴在我國多地都有種植，是我國重點(diǎn)發(fā)展的水果之一.作為占石榴總重20%～30%的石榴皮除藥用外大部分被廢棄，造成一定的資源浪費(fèi)和環(huán)境污染，因此如何充分、有效地開發(fā)利用石榴皮資源，值得各界學(xué)者廣泛探索和研究.

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