楊爭(zhēng)秒+程萬(wàn)宏+王艷俊

摘要：目的 抑制A2細(xì)胞中Wnt-1基因表達(dá)，探討Wnt-1基因在A2細(xì)胞中的作用。方法 siRNA轉(zhuǎn)染A2細(xì)胞，RT-PCR和Western blotting測(cè)定Wnt-1基因表達(dá)的變化。結(jié)果 轉(zhuǎn)染siRNA后，實(shí)驗(yàn)組（Wnt-1組）對(duì)應(yīng)靶基因mRNA表達(dá)和蛋白表達(dá)均有明顯降低。結(jié)論 Wnt-1特異性siRNA能有效干擾A2細(xì)胞內(nèi)其相應(yīng)基因的表達(dá)，使細(xì)胞增殖能力下降。

關(guān)鍵詞：人肺腺癌細(xì)胞株A2 Wnt-1 siRNA

siRNA inhibition Wnt-1 gene and its effect in human lung adenocarcinoma cell line A2

Yang Zhengmiao Cheng Wanhong Wang Yanjun

（Xinhua Hospital Affiliated to Dalian University LiaoNing Da Lian 116011）

Abstract：Objective To inhibitate the expresion of Wnt-1，so as to asses the role of Wnt-1 in A2 cells.Methods SiRNA was transfected into A2. The changes of expression of Wnt-1 were assayed by RT-PCR and Westen blotting. Results The expression of mRNA and protein of Wnt-1 in A2 cells was obviously decreased and the growth was significantly inhibited in transfected cells. Conclusion Interference with siRNA against Wnt-1 can effectively inhibit the specific gene expression and the proliferation of the A2 cells.

Key words：Human lung adenocarcinoma cell line A2 Wnt-1 siRNA

癌基因Wnt-1在異常激活或發(fā)生突變后，與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。為此，我們采用siRNA轉(zhuǎn)染的方法，抑制人肺腺癌細(xì)胞株A2中Wnt-1基因的表達(dá)，以探討其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡的影響。

1.材料與方法

1.1材料 人肺腺癌細(xì)胞株A2為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所保存。

1.2 RT-PCR和Western Blotting檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞Wnt-1基因表達(dá) cDNA反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件：30℃ 10min，42℃ 30min，99℃ 5min， 5℃ 5min。PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性2min，94℃40s，57℃40s，72℃1min，30個(gè)循環(huán)后，72℃延伸10min。

1.3光鏡觀察細(xì)胞形態(tài) 轉(zhuǎn)染48h后，分別取各實(shí)驗(yàn)組光鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)變化。

2.結(jié)果

2.1 siRNA轉(zhuǎn)染后Wnt-1和nm23-H1基因mRNA及其蛋白表達(dá)的變化 轉(zhuǎn)染后，實(shí)驗(yàn)組對(duì)應(yīng)靶基因表達(dá)受到抑制，條帶明顯減弱。

2.2 siRNA轉(zhuǎn)染后對(duì)人肺腺癌細(xì)胞株A2生物學(xué)特性的影響 轉(zhuǎn)染48h后，實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)縮小，體積大小不一，形態(tài)不一，一部分胞體呈球形，增殖受到抑制。而各對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)、貼壁良好，形態(tài)正常。

3.討論

本研究以Wnt-1特異性siRNA轉(zhuǎn)染人肺腺癌細(xì)胞株A2，24h后RT-PCR檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)組（Wnt-1）對(duì)應(yīng)靶基因表達(dá)受到抑制，條帶明顯減弱。各組內(nèi)對(duì)照β-actin條帶一致，說明Wnt-1和nm23-H1 siRNA轉(zhuǎn)染后均能有效抑制細(xì)胞相應(yīng)靶基因的表達(dá)。Western Blotting檢測(cè)各組靶基因蛋白表達(dá)的變化，發(fā)現(xiàn)與其靶相應(yīng)基因mRNA表達(dá)的變化一致。

轉(zhuǎn)染后48小時(shí)后， Wnt-1組細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)明顯變化，體積大小和形態(tài)不一，一部分胞體呈球形，細(xì)胞增殖亦受到顯著抑制。結(jié)果表明，在人肺腺癌細(xì)胞株A2中Wnt-1基因表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Iwao等人通過Wnt-1單克隆抗體和Wnt-1 siRNA阻斷平滑肌瘤細(xì)胞Wnt-1基因表達(dá)的研究結(jié)果一致[1～3]。

參考文獻(xiàn)

[1]Iwao Mikami，Liang You，Bia He，et al.Efficacy of Wnt-1 monoclonal antibody in sarcoma cells.Cancer，2005，5（53）：1012-1017.

[2]Xie FY，Woodle MC，Lu PY.Harnessing in vivo siRNA delivery for drug discovery and therapeutic development.Drug Discov Tody，2006，11：67-73.

[3]Cipollin G，Berti A，F(xiàn)iore L，et al.Down-regulation of nm23-H1 gene inhibits proliferation.Int Cancer，1997，73（2）：297-302.endprint