亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        新疆庫(kù)車豬場(chǎng)豬圓環(huán)病毒2型感染調(diào)查

        2014-11-23 09:22:40劉居萍葛陽(yáng)春
        中國(guó)獸醫(yī)雜志 2014年6期
        關(guān)鍵詞:血清

        劉居萍,喬 軍,葛陽(yáng)春

        (1.新疆石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,新疆 石河子 832003;2.新疆庫(kù)車縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所,新疆 庫(kù)車 842000)

        豬圓環(huán)病毒病(PCVD)是由豬圓環(huán)病毒(PCV)引起的一種多系統(tǒng)功能障礙性疾病,導(dǎo)致機(jī)體免疫抑制。圓環(huán)病毒屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬的成員,是所有已知?jiǎng)游锊《局凶钚〉牟《玖W?,為單股環(huán)狀DNA病毒。基因組由一個(gè)單股環(huán)狀組成,基因組全長(zhǎng)一般為1 766~1 768 nt。PCV-2根據(jù)基因組遺傳距離的大小可以劃分為3個(gè)基因型,分別為PCV-2a、PCV-2b和PCV-2c,其中PCV-2c基因型僅在丹麥有發(fā)現(xiàn)[1]。臨床上主要病癥以新生仔豬先天性腦震顫和斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)最為常見(jiàn),主要表現(xiàn)為進(jìn)行性呼吸困難,消瘦,體表淋巴結(jié)腫大,腹瀉,黃疸,貧血,甚至死亡,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大損失。豬圓環(huán)病毒分為2個(gè)血清型,PCV-1和PCV-2。其中PCV-1不引起臨床癥狀,廣泛存在于正常豬體各器官組織及豬源細(xì)胞。PCV-2對(duì)各種年齡的家豬和野豬均有致病性,目前認(rèn)為PCV-2在世界各地到處都存在,無(wú)論是否發(fā)生PCVD,是近年來(lái)獸醫(yī)界引人注目的一種新的豬傳染病。自從1991年加拿大首次報(bào)道了PCV-2是PMWS的主要病原以來(lái)[2],其在世界各地迅速蔓延。我國(guó)也于2000年檢測(cè)到了該病毒的存在[3],該病毒在我國(guó)豬群的感染率近乎50%,給我國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)也造成了嚴(yán)重的損失。

        PMWS既可水平傳播,導(dǎo)致斷奶仔豬發(fā)病死亡,亦可垂直傳播,引起繁殖障礙。PCV-2主要侵害免疫系統(tǒng),導(dǎo)致感染豬免疫抑制,降低機(jī)體對(duì)其他病原體的抵抗力和疫苗的反應(yīng)性,可導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生,容易導(dǎo)致其他病毒和細(xì)菌的繼發(fā)感染,使死亡率明顯升高。近年來(lái),隨著庫(kù)車縣養(yǎng)豬業(yè)的快速發(fā)展,一些養(yǎng)豬場(chǎng)從外地引入種豬。伴隨在引種的同時(shí),一些新的豬病也帶入本縣。近兩年,發(fā)現(xiàn)養(yǎng)豬場(chǎng)每年疑似豬圓環(huán)病毒病的病例不斷增加,為了了解庫(kù)車縣豬圓環(huán)病毒病流行情況,筆者于2012年8月至2012年12月在全縣6個(gè)區(qū)域的32個(gè)豬場(chǎng)隨機(jī)抽取443份血清樣品,應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)了PCV-2抗體陽(yáng)性率。通過(guò)對(duì)不同豬場(chǎng)不同生產(chǎn)階段豬群PCV-2血清流行病學(xué)研究,分析PCV-2在我縣不同豬場(chǎng)和不同生產(chǎn)階段豬PCV-2的感染狀況。為進(jìn)一步證實(shí)該病在我縣的存在,對(duì)可疑死亡生豬的病料組織進(jìn)行了豬2型圓環(huán)病毒全基因組的克隆、測(cè)序分析,不但為該病積累了流行病學(xué)資料,而且也為我縣對(duì)該病的科學(xué)防控提供了理論依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 血清樣品和病料組織 選擇庫(kù)車縣部分有代表性的養(yǎng)豬場(chǎng)32個(gè),隨機(jī)采樣。按相關(guān)的生物安全要求進(jìn)行無(wú)菌采血,分離血清備用,并對(duì)豬的日齡、防疫情況以及臨床健康狀況作詳細(xì)記錄。共采集443份血清。將庫(kù)車縣豬場(chǎng)疑似PCV-2感染的發(fā)病豬采集的淋巴結(jié)、脾臟、肺臟及肝臟等組織,共采集18頭病豬病料,-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.2 主要試劑 豬圓環(huán)病毒病酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)診斷試劑盒(北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司),試劑生產(chǎn)批號(hào):PCV20120618E。Taq plus DNA聚合酶、dNTPs、瓊脂糖凝膠電泳回收試劑盒,購(gòu)自北京諾維森生物科技有限公司。pMD18-T載體,購(gòu)自大連TaKaRa公司。病毒基因組提取試劑盒,購(gòu)自天根生化科技(北京)有限公司、Marker2000,購(gòu)自廣州東盛生物科技有限公司。

        1.3 PCV-2引物的設(shè)計(jì) 根據(jù)DNAMAN生物軟件針對(duì)PCV-2基因設(shè)計(jì)PCR引物,擴(kuò)增長(zhǎng)度為982 bp,由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。引物序列 PCV-N1:5'-ACCAGCGCACTTCGGCAGCG-3';PCV-N2:5'-TCATATGGAAATTCAGGGCA-3'。PCVN3:5'-TTACCAGCAATCAGACCCCG-3';PCV-N4:5'AATACTTACAGCGCACTTCT 3'。

        1.4 ELISA檢測(cè)血清PCV-2抗體 依照豬圓環(huán)病毒病酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)診斷試劑盒操作說(shuō)明步驟進(jìn)行,洗滌液20倍稀釋配制、樣品1∶5的體積稀釋、加樣、封膜、孵育、洗版、加底物、加終止液。按照被檢樣品OD450值<臨界值,為PCV-2抗體陰性;被檢樣品OD450值≥臨界值,為PCV-2抗體陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果。

        1.5 病料DNA提取 用天根生化科技(北京)有限公司提供的DVA病毒基因組提取試劑盒方法提取病料中的DNA,試劑盒里有緩沖液GB、漂洗液RW、蛋白酶K、吸附柱、收集管、ddH2O等。將病豬的病料5 g左右用1~1.5 mL生理鹽水研磨,研磨約5 min,研磨后液體放入1.5 mL EP管中,12 000 r/min離心5 min,取上清液。按照組織/細(xì)胞DNA抽提試劑盒的操作說(shuō)明提取總DNA。

        1.6 樣品中PCV-2的檢測(cè) 通過(guò)對(duì)PCR擴(kuò)增條件和反應(yīng)程序的優(yōu)化,確定方案如下:取提取的DNA為模板4 μL,引物PCV-N1(25 pmol/μL)、PCV-N2(25 pmol/μL)各 1μL,PCR Mix 10 μL,水 6 μL,混勻。PCR采用20 μL的反應(yīng)體系,反應(yīng)條件為:95℃預(yù)變性4 min;95℃變性50s,51℃退火40s,72℃延伸1 min 20s,36個(gè)循環(huán);72℃延伸l0 min;4℃無(wú)限延伸。PCR反應(yīng)進(jìn)行36個(gè)循環(huán),擴(kuò)增反應(yīng)完成后,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在l%瓊脂糖凝膠中,以0.5×TAE緩沖液,120 V電壓電泳30 min,溴化乙錠染色。電泳結(jié)束后,在紫外線下觀察,記錄結(jié)果并拍照保存。

        1.7 陽(yáng)性樣品PCV-2全序列的擴(kuò)增與克隆 在鑒定為PCV-2陽(yáng)性的樣品中,選取條帶較亮樣品的DNA,用引物PCV-N1和PCV-N2進(jìn)行全序列的擴(kuò)增,反應(yīng)體系為20μL,反應(yīng)條件為:95℃預(yù)變性4 min;95℃變性50s,51℃退火40s,72℃延伸1 min 20s,36個(gè)循環(huán);72℃延伸l0 min,4℃無(wú)限延伸。將PCR陽(yáng)性擴(kuò)增條帶進(jìn)行膠回收純化,采用北京諾維森生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA回收試劑盒回收擴(kuò)增出來(lái)的DNA片段。將回收產(chǎn)物與pMD-19-T載體16℃連接過(guò)夜,連接反應(yīng)體系:回收產(chǎn)物 4.5 μL,pMD-19-T載體 0.5 μL,SolutionⅠ連接酶5 μL,共10 μL。將連接產(chǎn)物全部轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞,37℃培養(yǎng)15 h后,挑取白色菌落接種于10 mL含Amp的液體LB培養(yǎng)基中,37℃振蕩培養(yǎng)12 h,然后做菌落PCR鑒定。在含有Amp的LB固體平板上挑取單個(gè)白色菌落作為模板進(jìn)行菌落PCR擴(kuò)增,反應(yīng)體系與條件同前。取10 μL反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后,在凝膠成像系統(tǒng)下進(jìn)行觀察。

        1.8 庫(kù)車縣PCV-2流行株基因分型 選取經(jīng)鑒定正確的陽(yáng)性重組質(zhì)粒的菌落,激活培養(yǎng)后送華大基因生物工程技術(shù)服務(wù)公司進(jìn)行測(cè)序,然后與國(guó)內(nèi)外流行株進(jìn)行核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分析。

        2 結(jié)果

        2.1 血清中PCV-2抗體的ELISA檢測(cè)結(jié)果 在被檢的443份血清中,共檢出PCV-2抗體陽(yáng)性的血清367份,平均陽(yáng)性率為82.84%。從表1可知,不同生長(zhǎng)階段豬陽(yáng)性率不同,斷奶仔豬、育肥豬、母豬、公豬的PCV-2陽(yáng)性率分別是79.09%、83.5%、90.27%、83.3%。

        表1 不同年齡階段豬血清樣品中PCV-2抗體檢測(cè)

        2.2 不同區(qū)域豬PCV-2血清抗體檢測(cè)結(jié)果 不同區(qū)域豬場(chǎng)飼養(yǎng)管理、飼養(yǎng)環(huán)境不同,豬群血清PCV-2抗體平均陽(yáng)性率有較大差異。根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查情況及表2可以看出,飼養(yǎng)環(huán)境、飼養(yǎng)管理好的區(qū)域豬場(chǎng)陽(yáng)性率相應(yīng)較低。

        2.3 PCV-2的基因組PCR擴(kuò)增結(jié)果 將采取的18頭生豬組織無(wú)菌研磨,從中提取DNA,將其進(jìn)行PCR擴(kuò)增,之后取擴(kuò)增產(chǎn)物20 μL進(jìn)行電泳檢測(cè),結(jié)果在第1、3、5、6、7、9、11、12、17、18孔分別出現(xiàn)了1條 982 bp左右的條帶(圖1、圖2),與預(yù)期片段大小一致。

        2.4 PCV-2的測(cè)序結(jié)果分析 將鑒定正確的重組載體送華大基因生物工程技術(shù)服務(wù)公司進(jìn)行測(cè)序,測(cè)序結(jié)果經(jīng)過(guò)在基因庫(kù)里進(jìn)行比較此次分離鑒定的PCV-2與基因庫(kù)上已提交的PCV-2的其他菌株如 GD-sz、DF-1、NY0912、GXXJ1104、CZ1005存在著99%的同源性。

        表2 不同區(qū)域豬血清樣品中PCV-2抗體檢測(cè)

        3 討論

        本試驗(yàn)血清樣品來(lái)自本縣多個(gè)豬場(chǎng)的不同日齡豬群,具有一定代表性。通過(guò)ELISA檢測(cè)了32個(gè)豬場(chǎng)的443份血清樣品,對(duì)不同養(yǎng)殖場(chǎng)、年齡豬的血清學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)進(jìn)行了綜合分析。從6個(gè)區(qū)域的血清樣品PCV-2抗體檢測(cè)結(jié)果顯示,總抗體的陽(yáng)性率為82.84%,這與其他有關(guān)報(bào)道的抗體總陽(yáng)性率基本相符合[4]。ELISA結(jié)果顯示,庫(kù)車縣PCV-2抗體總平均陽(yáng)性率較高,應(yīng)該引起高度重視。

        本次調(diào)查顯示,所有受檢豬場(chǎng)均存在不同程度PCV-2感染。對(duì)血清來(lái)源不同日齡段進(jìn)行分析,不同日齡段的豬群血清PCV-2抗體平均陽(yáng)性率有較大差異。母豬抗體陽(yáng)性率最高為90.27%,其次為公豬和育肥豬,抗體陽(yáng)性率分別是83.3%、83.5%,仔豬抗體陽(yáng)性率最低為79.09%,這與先前報(bào)道的PCV-2病毒感染隨豬的年齡增長(zhǎng)而升高結(jié)論是一致的[5],與國(guó)內(nèi)報(bào)道的同一豬群豬的年齡越大,PCV-2的抗體陽(yáng)性率就越高一致[6]。

        經(jīng)過(guò)對(duì)庫(kù)車縣生豬的組織病料進(jìn)行PCV-2的病原學(xué)檢測(cè),檢測(cè)了18份病料,陽(yáng)性病料10份,陽(yáng)性率是55.6%。測(cè)序結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)與其他地方的PCV-2相比,PCV-2的流行和分布具有一定的地域性,在已確定庫(kù)車縣的生豬未經(jīng)免疫的時(shí)候已經(jīng)存在PCV-2病毒,為我縣以后的預(yù)防和控制此病提供了科學(xué)的數(shù)據(jù)。分析和確診我縣PCV-2毒株的基因組,對(duì)于研究其分子流行病學(xué)具有十分重要的意義。

        PCV-2感染在我國(guó)豬群中已十分普遍,現(xiàn)己證實(shí)圓環(huán)病毒會(huì)導(dǎo)致斷奶仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合征(PMWS)的主要病原豬是圓環(huán)病毒的天然宿主,病毒通過(guò)胎盤(pán)垂直傳播,或在豬群中水平傳播,各種年齡段、不同性別的豬都可感染,公豬和母豬發(fā)病率高。由于PMWS是一種免疫抑制性疾病,往往會(huì)給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的威脅和損失。因此各養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)嚴(yán)格按生豬計(jì)劃免疫程序,提高其他疫病的免疫保護(hù)率,減少混合或繼發(fā)感染。重點(diǎn)加強(qiáng)豬瘟、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征的免疫,同時(shí)加強(qiáng)豬偽狂犬病、豬細(xì)小病毒病的免疫工作,提高豬的抵抗力,減少其他疾病與豬圓環(huán)病毒病的協(xié)同作用,從而降低生豬疫病的發(fā)生。

        [1]蔡林,胡冬梅,李曉霞,等.豬圓環(huán)病毒2型10JS-2株的分離與全基因組序列分析[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2012,39(7):6-10.

        [2]王忠田,楊漢春.規(guī)?;i場(chǎng)豬圓環(huán)病毒2型感染的流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2010,46(5):3-4.

        [3]王亞丹,盧權(quán)威,陳紅英,等.豬圓環(huán)病毒2型河南株全基因組的克隆與序列分析[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2012,32(10):1429-1434.

        [4]趙東升,劉有昌,安福生,等.近年來(lái)我國(guó)豬圓環(huán)病毒病的流行狀況及分析[J].養(yǎng)豬,2009,1:57-59.

        [5]盧寄軍,王祝榮,張進(jìn).湖南省豬圓環(huán)病毒2型流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫,2012,29(2):42-43.

        [6]高利波,高洪,趙汝,等.豬圓環(huán)病毒2型感染血清學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2011,38(12):207-208.

        猜你喜歡
        血清
        血清免疫球蛋白測(cè)定的臨床意義
        中老年保健(2021年3期)2021-08-22 06:50:04
        Meigs綜合征伴血清CA-125水平升高1例
        慢性腎臟病患者血清HIF-1α的表達(dá)及臨床意義
        慢性鼻-鼻竇炎患者血清IgE、IL-5及HMGB1的表達(dá)及其臨床意義
        血清H-FABP、PAF及IMA在冠心病患者中的表達(dá)及其臨床意義
        血清IL-6、APC、CRP在膿毒癥患者中的表達(dá)及臨床意義
        血清HBV前基因組RNA的研究進(jìn)展
        血清馴化在豬藍(lán)耳病防控中的應(yīng)用
        LC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定養(yǎng)血清腦顆粒中14種成分
        中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:18:47
        血清胱抑素C與小動(dòng)脈閉塞型卒中的關(guān)系
        国产我不卡在线观看免费| 无码成人aaaaa毛片| 不卡av网站一区二区三区| 手机在线亚洲精品网站| 麻豆亚洲av熟女国产一区二| 内射欧美老妇wbb| 亚洲国产av一区二区三区四区 | 无码人妻精品丰满熟妇区| 日韩在线看片| 中文字幕中乱码一区无线精品 | 久久久久99精品国产片| 手机看片福利盒子久久青| 日本二区三区视频免费观看| 亚洲最近中文字幕在线| 亚洲人成无码网站在线观看| 中字无码av电影在线观看网站| 亚洲无av高清一区不卡| 性人久久久久| 高潮迭起av乳颜射后入| 亚洲AV永久无码制服河南实里| 97超在线视频免费| 中文字幕一区二区三区在线视频 | 亚洲AⅤ无码国精品中文字慕| 亚洲欧美久久婷婷爱综合一区天堂| 自拍情爱视频在线观看| 在线观看人成视频免费| 国产极品美女高潮抽搐免费网站| 亚洲综合一| 国产激情自拍在线视频| 国产对白国语对白| 黄色视频免费在线观看| 成人动漫久久| 久久久99精品国产片| 亚洲av无码国产精品色| 国产精品永久免费| 中文文精品字幕一区二区| 国产av一区二区三区国产福利 | 久久午夜福利无码1000合集| 欧美极品美女| 日韩丝袜人妻中文字幕| 偷拍偷窥女厕一区二区视频|