楊滋淵 楊玲玲 陜西省人民醫(yī)院（西安710068）

△商洛學院（商洛721000）

紅鹿補腎膠囊由黃芪、紅參、淫羊藿等16味藥材組成，具有益氣養(yǎng)血，溫腎壯陽等功效。臨床用于治療面色白，精神疲乏，四肢少溫，小便清長，舌淡苔薄白，脈沉細弱等癥。方中黃芪、淫羊藿等9味藥材作為水提工藝的主要藥材，淫羊藿中的淫羊藿苷［1］作為淫羊藿的指標性成分。為了有效地控制該工藝，我們通過正交試驗，采用高效液相色譜法［2］測定淫羊藿苷的含量［3］，結(jié)合干浸膏得率兩項指標，確定最佳工藝。

1 儀器與試藥1.1 儀器日本島津LC－2010A高效液相色譜儀；BS210S型電子分析天平（北京賽多利斯科學儀器有限公司）d＝0.1mg；BT25S型電子分析天平（北京賽多利斯科學儀器有限公司）d＝0.01mg；LXJ－Ⅱ型臺式離心沉淀機（南京第一醫(yī)療器械廠）；DK－98－ⅡA型水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）；UP3200H型超聲波清洗器（熊貓集團南京電子計量有限公司）；MH－2000調(diào)溫型電熱套（北京科偉永興儀器有限公司）；JS15－1型電子天平（上海浦春計量儀器有限公司）d＝1g；CS101－3EB型電熱鼓風干燥箱（重慶四達試驗設(shè)備有限公司）；FW177型中草藥粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）；HC·TP 11B－10型架盤藥物天平（北京醫(yī)用天平廠）最小和最大質(zhì)量1g－1000g。

1.2 試藥 淫羊藿苷對照品購于中國藥品生物制品鑒定所（批號：110737－200415）；乙腈為色譜純；其余試劑均為分析純；水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果2.1 檢測方法 2.1.1 干浸膏得率的測定 精密量取離心濾過后的濾液100mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，至烘箱于105℃干燥3h，置干燥器中冷卻0.5h，迅速稱重，計算干浸膏得率。

2.1.2 淫羊藿苷含量測定［4］供試品溶液的制備 按淫羊藿藥材0.2g量計，精密量取離心濾過后的濾液適量，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘渣用稀乙醇20mL轉(zhuǎn)移至具塞錐形瓶中，稱定重量，超聲處理1h，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

對照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對照品3.95mg，置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成每1mL含淫羊藿苷0.158mg的溶液，即得。

色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗 填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；色譜柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈－水（30：70）；檢測波長：270nm；流速：1.0mL。理論塔板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應不低于1500。

含量測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算含量，結(jié)果見表2。

2.2 正交試驗 2.2.1 實驗因素和水平設(shè)定 影響水提取的主要因素有加水量、提取時間和提取次數(shù)，因此我們選擇正交實驗進行設(shè)計研究。為了系統(tǒng)考察水提取的工藝參數(shù)，我們設(shè)計的因素水平表見表1。

表1 試驗因素水平表

2.2.2 正交試驗安排及結(jié)果：見表2－3。

由表2K及R值可知，以干浸膏得率為考察指標A3＞A2＞A1，B2＞B3＞B1，C3＞C2＞C1，C因素影響最大，A、B因素次之。結(jié)合表3干浸膏得率方差分析知，各因素作用主次為C＞A＞B，其中C因素影響極顯著，A、B因素次之，因此水煎煮最佳提取工藝為A3 B2C3。由表2K及R值可知，以淫羊藿苷得量為考察指標時，A3＞A2＞A1，B3＞B2＞B1，C3＞C2＞C1，C因素影響最大，A、B因素次之。結(jié)合表3淫羊藿苷得量方差分析知，各因素作用主次為C＞B＞A，其中C因素影響較顯著，A、B因素次之，水煎煮最佳提取工藝為A3B3C3，從兩項考察指標結(jié)果看，煎煮時間略有不同，為了考慮到含量這一重要指標，故確定最佳工藝為A3B3C3。

表2 紅鹿補腎膠囊L9（34）正交試驗結(jié)果

表3 干浸膏得率及淫羊藿苷得量方差分析

表4 驗證試驗結(jié)果

2.2.3 驗證試驗：由于優(yōu)選的工藝不包括在正交表的9次試驗中，故對其進行了驗證試驗。用同一批藥材，按湯劑處方量比例，稱取炙黃芪30g，菟絲子、熟地、黃精、枸杞子各12g，韭菜籽9g，淫羊藿10g，五味子、甘草各6g共計109g，平行三份，按照優(yōu)選的A3B3C3提取參數(shù)進行試驗，測定干浸膏得率及淫羊藿苷含量，結(jié)果見表4。

由表4可見，以干浸膏得率和淫羊藿苷得量為評價指標，數(shù)據(jù)較穩(wěn)定，且干膏得率和含量均較高。故確定A3B3C3為最佳工藝，即藥材加水煎煮3次，每次12倍量，煎煮2h。

3 討 論本實驗研究黃芪、淫羊藿的水提取工藝，因其主要成分為淫羊藿苷，固本實驗以干膏率及淫羊藿苷為考察指標，通過正交試驗結(jié)合方差分析結(jié)果表明，水提影響干膏得率的主要因素是煎煮次數(shù)，加水量和煎煮時間影響較小。水提影響淫羊藿苷得率的主因素也是煎煮次數(shù)。最佳提取工藝為加水12倍量，煎煮3次，每次2h，所得的浸膏得率和淫羊藿苷含量均較高。

［1］譚 鵬，仲玲利，楊 蕾，等.不同炮制方法巫山淫羊藿中3個黃酮類成分油水分配系數(shù)的比較.藥物分析雜志［J］.2013，33（8）：1289.

［2］佟 杰.高效液相色譜法測定仙靈骨葆丸中淫羊藿苷的含量［J］.當代醫(yī)學，2010，16（32）：139.

［3］國家藥典委員會編，中華人民共和國藥典2010年版：一部［M］.中國醫(yī)藥科技出版社.

［4］梁 穎，孫思雨，劉 芳，等.高效液相色譜法測定復方中藥強骨片中淫羊藿苷含量［J］.制劑與技術(shù)，2013，3（2）；52－70.