林麗飛等

摘要：以無(wú)菌短葶飛蓬試管苗為材料，以MS為基本培養(yǎng)基，在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入不同濃度的AgNO3和 K2Cr2O7，研究Ag+和Cr6+對(duì)短葶飛蓬愈傷組織誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明，培養(yǎng)基中分別加入AgNO3和K2Cr2O7均能降低污染率；低濃度的AgNO3、K2Cr2O7對(duì)短葶飛蓬愈傷組織的誘導(dǎo)影響較小，高濃度對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)具有一定的抑制作用。

關(guān)鍵詞：鉻；銀；短葶飛蓬；愈傷組織

中圖分類(lèi)號(hào)： Q943.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）09-0048-02

收稿日期：2013-11-25

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（編號(hào)：60748002）；云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究項(xiàng)目（編號(hào)：2009ZC131M）；第一批紅河學(xué)院中青年學(xué)術(shù)帶頭人后備人才項(xiàng)目（編號(hào)：2010PY0104）；紅河學(xué)院校級(jí)項(xiàng)目（編號(hào)：XJ1Y0801）。

作者簡(jiǎn)介：林麗飛（1978—） ，女，云南建水人，碩士，副教授，從事植物細(xì)胞工程的研究。E-mail： llf_biology2@126. com。

通信作者：張燦邦，碩士，教授，主要從事光學(xué)物理研究。E-mail：cbzhanguoh@ gmail.com。隨著工農(nóng)業(yè)的發(fā)展，三廢（廢水、廢氣、廢渣）的排放量急劇增加，致使一些重金屬元素在環(huán)境中的含量大增，對(duì)生物造成嚴(yán)重毒害作用。鉻作為工業(yè)的“五毒”之一，是一種毒性較大的致畸、致突變劑[1] 。有關(guān)鉻的研究，主要集中在鉻對(duì)小麥、大麥、水稻等作物的毒害[2-4]。AgNO3在大麥、水稻、二粒小麥、硬粒小麥、玉米等單子葉植物組織培養(yǎng)中均有促進(jìn)愈傷組織分化的作用[5-10] 。短葶飛蓬[Erigeron breviscapus （Vaniot） Hand.-Mazz.]，屬菊科（Compositae）飛蓬屬（Erigeron）植物，產(chǎn)于湖南、廣西、貴州、四川、云南、西藏等省區(qū)，常見(jiàn)于海拔1 200～3 500 m的中山和亞高山開(kāi)闊山坡、草地、林緣[11]，是一種民間常用藥用植物[12]，具有重要的藥用價(jià)值[13-16]，全草入藥，已入《中華人民共和國(guó)藥典》，目前對(duì)于短葶飛蓬研究主要集中于病蟲(chóng)害防治研究方面[17-22]，雖然關(guān)于短葶飛蓬組織培養(yǎng)方面的研究也有報(bào)道[23-28]，但是關(guān)于組織培養(yǎng)過(guò)程中重金屬對(duì)短葶飛蓬的影響鮮見(jiàn)報(bào)道，本試驗(yàn)利用短葶飛蓬的組織培養(yǎng)來(lái)研究鉻、銀對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育的影響，探討重金屬在植物體內(nèi)的積累以及對(duì)植物的毒害作用，從而為減輕和治理土壤鉻、銀污染提供依據(jù)，預(yù)防其對(duì)動(dòng)植物以及人類(lèi)的毒害作用。

1材料與方法

基本培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L，在基本培養(yǎng)基中分別加入10、20、40、50、60、80、100、150、200、250 μmol/L AgNO3和10、20、40、50、60、80、100、150、200 μmol/L K2Cr2O7[28]。

上述培養(yǎng)基均添加2.5%蔗糖、0.7%瓊脂，pH值5.8，培養(yǎng)溫度25 ℃，光照度2 000 lx，光照時(shí)間16 h/d。

選取相同條件下的短葶飛蓬試管苗葉片，切成1～2 cm2，分別接種于不同處理的培養(yǎng)基中，7 d后觀察出愈率。

2結(jié)果與分析

2.1不同濃度的AgNO3對(duì)短葶飛蓬愈傷組織誘導(dǎo)的影響

由表1可以看出，培養(yǎng)基中加入不同濃度AgNO3能夠不同程度抑制愈傷組織的形成，使愈傷組織形成相對(duì)較慢，但與對(duì)照組相比，外植體明顯加厚和卷曲，污染率低。AgNO3濃度從 10 μmol/L 增加至250 μmol/L，都能夠誘導(dǎo)出愈傷組織，但濃度越大，愈傷組織形成越少，其中以培養(yǎng)基中添加10、20、100 μmol/L AgNO3時(shí)愈傷組織生長(zhǎng)最好；當(dāng)濃度增至150～250 μmol/L時(shí)，外植體能夠不同程度膨脹，也能形成愈傷組織，但形成愈傷少而緊密。

2.2不同濃度的K2Cr2O7對(duì)短葶飛蓬愈傷組織誘導(dǎo)的影響

由表2可以看出，培養(yǎng)基中K2Cr2O7的加入使污染率降低，但會(huì)不同程度抑制愈傷組織的形成，使愈傷組織形成時(shí)間較對(duì)照相對(duì)較晚，但較培養(yǎng)基中加入AgNO3的早。K2Cr2O7濃度從10 μmol/L升高到200 μmol/L時(shí)，就總體結(jié)果而言，隨著K2Cr2O7濃度的不斷增大，愈傷組織形成受抑制越明顯，愈傷組織壽命縮短。K2Cr2O7濃度達(dá)到200 μmol/L時(shí)，出現(xiàn)死苗情況。

3結(jié)論

3.1不同濃度AgNO3對(duì)短葶飛蓬愈傷組織誘導(dǎo)的影響

與對(duì)照相比，培養(yǎng)基中添加AgNO3能夠抑制愈傷組織的形成，使得形成愈傷組織的時(shí)間較對(duì)照晚，愈傷組織也沒(méi)有對(duì)照的疏松、透明。本試驗(yàn)中，培養(yǎng)基中AgNO3濃度增加至 250 μmol/L，仍能夠長(zhǎng)出少量愈傷。

3.2不同濃度的K2Cr2O7對(duì)短葶飛蓬愈傷組織誘導(dǎo)的影響

與對(duì)照相比，培養(yǎng)基中添加K2Cr2O7能夠抑制愈傷組織的形成，使得形成愈傷組織的時(shí)間較對(duì)照晚，愈傷組織也沒(méi)有對(duì)照的疏松、透明。隨著K2Cr2O7濃度的不斷增大，對(duì)短葶飛蓬愈傷組織形成的抑制呈現(xiàn)規(guī)律性，即濃度越大，抑制越嚴(yán)重。當(dāng)Cr6+濃度增加至200 μmol/L時(shí)，部分愈傷組織呈現(xiàn)出不同程度的死亡和褐化現(xiàn)象，部分外植體不膨脹也不長(zhǎng)出愈傷組織，只有少部分葉片和莖段能夠長(zhǎng)出少量愈傷組織。

形成的愈傷組織較松散，形成時(shí)間早，后期形成無(wú)菌苗10857689.42731.8+++部分形成的愈傷組織緊密，且形成的愈傷組織不完全20272385.015.0+++部分褐化死亡，形成的愈傷組織疏松，形成完全40252080.012.5++形成的愈傷組織不完全 50852934.189.4+++愈傷組織形成不完全，外植體特別膨脹60282382.011.7+形成的愈傷組織少，愈傷組織緊密80272385.000+部分不形成愈傷組織，愈傷組織少100806075.078.8++葉片膨脹，形成的愈傷組織不完全，愈傷組織松散透明150905864.088.9++愈傷組織形成緊密，愈傷組織少200793848.200+++葉片膨脹，莖段形成的愈傷組織完全、愈傷組織疏松250391846.0615.0++愈傷組織形成緊密（包括莖段），形成的愈傷組織較少。注：+++表示膨脹度好，++表示膨脹度一般，+表示幾乎不膨脹。

形成愈傷組織較早，愈傷組織形成完全、松散、透明，后期長(zhǎng)出大量的苗形成愈傷組織完全，愈傷組織疏松、透明愈傷組織形成完全、疏松、透明，部分出現(xiàn)葉片褐化部分愈傷組織出現(xiàn)褐化，呈黑色水浸狀，部分形成的愈傷組織較緊愈傷組織不完全，且愈傷組織少愈傷組織疏松，部分出現(xiàn)細(xì)菌污染，呈點(diǎn)狀愈傷組織完全，尤其是莖段最好，愈傷組織松散、透明部分愈傷組織中夾帶死苗，莖段愈傷組織形成完全，呈船狀愈傷組織緊密，形成愈傷組織少愈傷組織少，不膨大，出現(xiàn)黃`苗現(xiàn)象注：+++表示膨脹度好，++表示膨脹度一般，+表示幾乎不膨脹。

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：50-53.

形成愈傷組織較早，愈傷組織形成完全、松散、透明，后期長(zhǎng)出大量的苗形成愈傷組織完全，愈傷組織疏松、透明愈傷組織形成完全、疏松、透明，部分出現(xiàn)葉片褐化部分愈傷組織出現(xiàn)褐化，呈黑色水浸狀，部分形成的愈傷組織較緊愈傷組織不完全，且愈傷組織少愈傷組織疏松，部分出現(xiàn)細(xì)菌污染，呈點(diǎn)狀愈傷組織完全，尤其是莖段最好，愈傷組織松散、透明部分愈傷組織中夾帶死苗，莖段愈傷組織形成完全，呈船狀愈傷組織緊密，形成愈傷組織少愈傷組織少，不膨大，出現(xiàn)黃`苗現(xiàn)象注：+++表示膨脹度好，++表示膨脹度一般，+表示幾乎不膨脹。

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：50-53.

形成愈傷組織較早，愈傷組織形成完全、松散、透明，后期長(zhǎng)出大量的苗形成愈傷組織完全，愈傷組織疏松、透明愈傷組織形成完全、疏松、透明，部分出現(xiàn)葉片褐化部分愈傷組織出現(xiàn)褐化，呈黑色水浸狀，部分形成的愈傷組織較緊愈傷組織不完全，且愈傷組織少愈傷組織疏松，部分出現(xiàn)細(xì)菌污染，呈點(diǎn)狀愈傷組織完全，尤其是莖段最好，愈傷組織松散、透明部分愈傷組織中夾帶死苗，莖段愈傷組織形成完全，呈船狀愈傷組織緊密，形成愈傷組織少愈傷組織少，不膨大，出現(xiàn)黃`苗現(xiàn)象注：+++表示膨脹度好，++表示膨脹度一般，+表示幾乎不膨脹。

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