時(shí)文祥，張乃元

（1.南京瑞爾醫(yī)藥有限公司，江蘇 南京 210061；2.南京海鯨藥業(yè)有限公司，江蘇 南京 210061）

0 引言

黃藤素膠囊由防己科天仙藤屬植物黃藤中提取的黃藤素及適量藥用輔料經(jīng)制粒、干燥、灌裝而成的膠囊。具有清熱解毒的功效，具有較強(qiáng)的抑制霉菌、葡萄球菌、淋球菌、支原體、衣原體、抗酸性分析桿菌的作用。主要用于婦科炎癥，菌痢，腸炎，呼吸道及泌尿道感染，外科感染，眼結(jié)膜炎等［1，2］。本品是根據(jù)黃藤素片改劑型而來(lái)，為有效控制其質(zhì)量，采用薄層色譜法對(duì)黃藤素進(jìn)行了薄層色譜鑒別，采用高效液相色譜法對(duì)測(cè)定溶出度，并測(cè)定了鹽酸巴馬汀的含量。

1 儀器與試藥

島津LC-10ATvp液相色譜儀，SPD-10Avp檢測(cè)器，HW2000色譜工作站；鹽酸巴馬汀對(duì)照品（0732-200005）由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純；黃藤素膠囊（批號(hào)為 090223-1、090225-1、090227-1，由淮安潤(rùn)邦藥業(yè)有限公司提供）、陰性對(duì)照品自制。

2 薄層色譜鑒別

（1）黃藤素的TLC鑒別。取本品內(nèi)容物20mg，加無(wú)水乙醇溶解制成每1ml含2mg的溶液，作為供試品溶液。另取鹽酸巴馬汀對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇溶解制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)樣于同一硅膠GF254 薄層板上，分別以正丁醇-乙酸-水（7∶1∶2）（系統(tǒng) 1）以及甲醇-氨水-水（5 ∶5∶1∶1）（系統(tǒng) 2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)果如圖1所示。

（2）取本品內(nèi)容物適量（約相當(dāng)于黃藤素0.2g），加水20ml，緩緩加熱使溶解，濾過(guò)，濾液水浴蒸干，殘?jiān)恿蛩?，呈黃綠色，微熱后，顏色不變。

圖1 黃藤素的TLC鑒別

3 溶出度研究

3.1 色譜條件

日本島津 C18柱（150×4.6mm，5μm）色譜柱；流動(dòng)相：乙腈﹕0.85%的磷酸二氫鉀溶液（含0.425%的十二烷基磺酸鈉）（60∶40）；流速 1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為 345nm；柱溫 25℃。理論塔板數(shù)按鹽酸巴馬汀計(jì)算，不得低于2500。

3.2 對(duì)照品溶液的配制

精密稱取105℃干燥至恒重的鹽酸巴馬汀對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每1ml含20μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.3 囊殼及空白輔料干擾試驗(yàn)

稱取處方量輔料及空膠囊殼1粒，照溶出度試驗(yàn)法配制成溶液，照溶出度測(cè)定法測(cè)定，結(jié)果表明：輔料及囊殼在溶出度測(cè)定方法中不產(chǎn)生干擾。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線

參照含量測(cè)定時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)曲線A=43005.17c+3406.46，r=0.9998。線性范圍為：0.0506～0.8096μg。

3.5 回收率試驗(yàn)

取已知含量（以鹽酸巴馬汀計(jì)算）的黃藤素原料，按處方量80%，100%，120%的量稱取，輔料按處方量100%稱取，加入1?？漳z囊殼，置100ml量瓶中，用溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液1.0ml至50ml量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，照溶出度測(cè)定法測(cè)定，并計(jì)算測(cè)定的鹽酸巴馬汀的量，由此計(jì)算回收率。結(jié)果如表1所示。

由上述試驗(yàn)可知本法的回收率較高，符合試驗(yàn)的要求。

3.6 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取090223-1批溶出液，在室溫條件下放置，分別于0，0.5，2，4，8，12 小時(shí)進(jìn)樣，依法測(cè)定，考察鹽酸巴馬汀在0.1mol/L鹽酸溶液中的穩(wěn)定性。結(jié)果12小時(shí)內(nèi)，RSD%為0.16。

3.7 溶出曲線與均一性

分別取3批樣品各6粒，照溶出度測(cè)定法（《中國(guó)藥典》2010年版附錄XC第一法），以鹽酸溶液（9→1000）900ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘100轉(zhuǎn)，溫度為37±0.5℃，依法操作，分別于 5，10，15，20，30，45min 取溶出液 5ml（同時(shí)補(bǔ)加溶劑5ml），濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液2.0ml置10ml量瓶中，加上述溶劑稀釋至刻度，作為供試品溶液。

另取裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當(dāng)于平均1粒的裝量）至100ml量瓶中，加流動(dòng)相適量使溶解，用上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，取適量濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液2.0ml，加上述溶劑稀釋到刻度，搖勻。照含量測(cè)定項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，按兩者峰面積的比值計(jì)算每粒在各時(shí)間點(diǎn)的溶出百分量。試驗(yàn)結(jié)果表明，樣品的溶出均一性良好，3批樣品之間溶出亦無(wú)明顯詫異。

3.8 溶出度的測(cè)定

取本品，照溶出度測(cè)定法（《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄XC第一法），以鹽酸溶液（9→1000）900ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘100轉(zhuǎn)，依法操作，45分鐘時(shí)，取溶液，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液適量，用上述溶劑稀釋成每1ml約含20μg的溶液。另取裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當(dāng)于平均1粒的裝量），加流動(dòng)相適量使溶解，用上述溶劑稀釋?zhuān)瑸V過(guò)，取續(xù)濾液適量，按標(biāo)示量用上述溶劑稀釋成每1ml約含20μg的溶液。取上述兩種溶液，照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，按兩者峰面積比值計(jì)算每粒溶出度；擬定黃藤素膠囊45min，溶出限度為75%，結(jié)果如表2所示。

表1 溶出度試驗(yàn)的回收率試驗(yàn)結(jié)果（以鹽酸巴馬汀計(jì)）

表2 溶出度測(cè)定結(jié)果（%）

4 含量測(cè)定

根據(jù)參考文獻(xiàn)［3］，用同樣方法測(cè)得10批樣品含量平均為98.89mg（以鹽酸巴馬汀計(jì)）。

5 討論與小結(jié)

（1）本品系根據(jù)黃藤素片劑改劑型而來(lái)，在原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，增加了對(duì)黃藤素進(jìn)行了薄層色譜鑒別研究，試驗(yàn)結(jié)果確證，該鑒別方法簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性和專(zhuān)屬性良好。曾研究比較了自然光、300nm、254nm、365nm等不同觀察條件下的斑點(diǎn)顯示，結(jié)果以300nm、254nm斑點(diǎn)較為清晰，且能清晰的顯示雜質(zhì)斑點(diǎn)。由于300nm為非常用波長(zhǎng)，因此最終選擇254nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

（2）由于中國(guó)藥典1977年版黃藤素片標(biāo)準(zhǔn)中并沒(méi)有溶出度檢查項(xiàng)目，我們根據(jù)新頒布的有關(guān)規(guī)定，參照化學(xué)藥品中對(duì)溶出度的研究方法，對(duì)本品進(jìn)行溶出度研究。

測(cè)定波長(zhǎng)及方法選擇，稱取鹽酸巴馬汀適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解，照分光光度法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄IV A）測(cè)定，在200～500nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果表明本品0.1mol/L鹽酸溶液在345nm波長(zhǎng)處有最大吸收。因此，選擇345nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

樣品溶劑選擇，根據(jù)其主要成分黃藤素的溶解性質(zhì)（在熱水中易溶，在水中略溶），參考化學(xué)藥品同類(lèi)品種，我們選擇溶出度方法為溶出度測(cè)定法第一法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄 XC），以鹽酸溶液（9→1000）900ml為溶劑。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1977.

［2］國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草第3冊(cè)［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2000.

［3］何廣雄，張發(fā)成，潘海祥，等.黃藤素膠囊含量的RP-HPLC測(cè)定［J］.江蘇藥學(xué)與臨床研究，2005（5）：42～44.