王波WANG Bo；李玉明LI Yu-ming；趙旭燕ZHAO Xu-yan；蔡紹皙CAI Shao-xi；張延威ZHANG Yan-wei

（①貴州師范學(xué)院實(shí)驗(yàn)教學(xué)管理中心，貴陽(yáng)550018；②武警后勤學(xué)院平津醫(yī)院心血管病研究所，天津 300162；③重慶大學(xué)生物工程學(xué)院生物力學(xué)與組織工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶400044；④貴州師范學(xué)院貴州省生物資源開發(fā)利用特色重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽(yáng)550018）

0 引言

本文在查閱國(guó)內(nèi)外有關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，利用基因芯片技術(shù)，進(jìn)行了糖脂消治療胰島素抵抗高血壓的作用機(jī)制實(shí)驗(yàn)，并得出了相關(guān)結(jié)論，從而驗(yàn)證了糖脂消可以用于糖尿病治療。

1 研究材料與方法

1.1 藥物 主要研究藥物為糖脂消，本實(shí)驗(yàn)中所用到的糖脂消為由丹參、漢防以、黃芪等各種中藥成分組成的膠囊，是由中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)后勤學(xué)院平津醫(yī)院中醫(yī)科提供的，藥品質(zhì)量較高。

1.2 建立胰島素抵抗動(dòng)物模型 在建立模型時(shí)，研究人員要選取33只4-5周齡的雄性SD大鼠，并將其體重控制在130-140g之間。在實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)，研究人員應(yīng)將這些大鼠隨機(jī)等分為3組，并按照一般標(biāo)準(zhǔn)喂食，并嚴(yán)格控制其飼料中的蛋白質(zhì)、脂肪以及碳水化合物和淀粉的含量。而模型組中，研究人員則按照Reaven[9]要求喂其一些高果糖、高脂肪的飼料。

1.3 提取RNA和標(biāo)記探針 各小組都選取5只密封完好的比目魚肌，并在液氮低溫的條件下，將其磨碎成粉狀。磨碎完成后，研究人員要使用Trizol試劑提取RNA，再通過(guò)電泳分析、等量混合、逆轉(zhuǎn)標(biāo)記等一系列操作最終實(shí)現(xiàn)探針標(biāo)記和提純。

1.4 芯片雜交 本實(shí)驗(yàn)所使用的大鼠表達(dá)芯片是由上海聯(lián)合基因公司研究和開發(fā)出來(lái)的，其生物功能較為穩(wěn)定。在進(jìn)行芯片雜交時(shí)，先將芯片和探針置于95℃的水浴中進(jìn)行變性，待浸泡5min后，實(shí)驗(yàn)人員再將芯片加針密封，封片完成后浸入42℃的水浴中連續(xù)雜交16h。

1.5 檢測(cè)與分析 使用Gene Pix 4100掃描，并分析和對(duì)比兩種熒光信號(hào)Cy3和Cy5的強(qiáng)度值大小和比值，使用管家基因進(jìn)行補(bǔ)充均衡。在檢測(cè)和分析時(shí)須注意：①當(dāng)二者的信號(hào)比值小于0.5時(shí)為下調(diào)，大于2.0則為上調(diào)，位于0.5至2.0之間時(shí)為不存在顯著表達(dá)差異。②二者的信號(hào)比值至少有一個(gè)大于200。③在進(jìn)行檢測(cè)與分析時(shí)，必須保證同一基因點(diǎn)的兩次檢測(cè)結(jié)果相同，否則將不予采用。

2 結(jié)果

2.1 胰島素抵抗大鼠模型的建立 通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)比，可以觀察到普通組與高糖組大鼠的各項(xiàng)指標(biāo)存在明顯差異，這表明模型建立是較為科學(xué)合理的。（表1）

2.2 芯片雜交信號(hào)散點(diǎn)圖由于芯片雜交時(shí)所使用的雙探針分別是由普通組和高糖組的模板分析組合而成的，因此用Cy3代表普通組，用Cy5代表高糖組，并用斜率表示各自的基因上下調(diào)情況。其中，斜率小于0.5附近的信號(hào)表示基因下調(diào)，分布于斜率1.0附近的信號(hào)表示無(wú)表達(dá)差異，而斜率超過(guò)2.0附近的信號(hào)則表示基因上調(diào)。詳見圖1，圖2。

表1

2.3 普通組和高糖組基因表達(dá)差異 通過(guò)對(duì)比可以發(fā)現(xiàn)，二者有140條基因進(jìn)行了2次差異表達(dá)，新基因22條，已知基因61條，上調(diào)基因62條，功能不清的57條。

2.4 治療組和高果糖組基因表達(dá)差異比較 經(jīng)過(guò)治療后，基因有了明顯變化，重復(fù)差異表達(dá)的基因數(shù)量明顯下降，下降至95條，而新基因和功能不清的基因則分別變?yōu)?3條和38條。

圖1 果糖組散點(diǎn)圖

圖2 糖脂消組散點(diǎn)圖

3 討論

本文在國(guó)內(nèi)外大量研究結(jié)果的基礎(chǔ)上，采用對(duì)比試驗(yàn)的方式建立起了一個(gè)胰島素抵抗大鼠模型，研究了中藥在抵抗胰島素方面的具體作用，并得出了相關(guān)結(jié)論。但中藥的具體作用機(jī)制以及基因芯片技術(shù)在治療中的使用仍有待進(jìn)一步研究。

[1]ovel 2-ethyl-5-phenylthiazole-4-carboxamide derivatives as protein tyrosine phosphatase 1B inhibitors with improved cellular efficacy[J].Eur JMed Chem,2013,9,69C:399-412.

[2]Aguilar DC,Strom J,Xu B,et al.Expression of glucocorticoid-induced leucine zipper(GILZ)in cardiomyocytes[J].Cardiovasc Toxicol.2013,13(2):91-99.

[3]趙旭燕，李玉明，王波.糖脂消對(duì)胰島素抵抗高血壓大鼠血脂水平的影響[J].中成藥，2005（09）.