馬曉莉，曹松云，仇金龍，賈鏡鴻

(河北大學中醫(yī)學院，河北保定 071000)

腸梗阻是外科常見的急腹癥之一，其臨床表現(xiàn)為腹痛、腹脹、嘔吐和肛門停止排泄、排氣，中醫(yī)謂之“結(jié)癥”。腸梗阻不但可引起腸管本身解剖與功能上的改變，并可導致全身性生理上的紊亂，臨床病象復雜多變。中醫(yī)治療腸梗阻的方法包括內(nèi)治法、外治法、針灸治療等。穴位貼敷法是常用的中醫(yī)外治法之一，目前臨床多用于哮喘等慢性病的治療，應用于急癥的較少。將穴位貼敷療法應用于腸梗阻治療，可以早期介入，大大縮短療程，降低并發(fā)癥的發(fā)生，降低治療費用。但是穴位貼敷療法存在基礎研究較少、制劑不規(guī)范、缺少質(zhì)量標準和療效評價方法等問題，因此對其進行進一步整理和挖掘，吸收國外先進的透皮治療技術(shù)，選擇新材料和新方法，制備高效中藥透皮給藥系統(tǒng)具有重要的意義［1］。大蒜硝黃膏為《中醫(yī)天灸療法》中的成方［2］，由生大黃、芒硝、大蒜、陳醋適量，調(diào)成糊膏，貼敷于神闕穴治療腸梗阻。方中大黃瀉下熱結(jié)，蕩滌腸胃為君藥，芒硝軟堅潤燥，通導大便為臣藥，米醋辛散芳香，可增強藥物滲透力，助達病所［3］。大黃功效成分體外透皮滲透特性已在另一篇文章中報道。芒硝的主要成分為硫酸鈉(Na2SO2－4·10H2O)，其瀉下作用的主要物質(zhì)基礎與硫酸鈉密切相關，內(nèi)服后其硫酸根離子不被腸黏膜吸收，存留腸內(nèi)形成高滲溶液，使腸內(nèi)水分增加，引起機械刺激和化學刺激，促進腸蠕動，發(fā)生瀉下作用［4-5］。芒硝體外透皮滲透特性未見文獻報道，本研究通過體外透皮實驗，以芒硝中的功效成分SO2－4為指標，考察大蒜硝黃膏穴位貼敷的透皮吸收性能，同時考察不同賦形劑 (醋、姜汁、植物油)和不同配伍對芒硝SO2－4成分透皮釋放行為的影響，為劑型改造和臨床制定更合理的用藥方案提供參考。

1 材料

1.1 儀器與設備 TU-1900雙光束紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限公司);TT-6透皮吸收試驗儀 (天津市正通科技有限公司);島津AUW系列十萬分之一電子天平 (島津國際貿(mào)易有限公司);TDL-5-A型低速臺式離心機 (上海安亭科學儀器廠);KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);螺旋測微器 (哈爾濱量具刃具廠)。

1.2 主要材料與試劑 大黃、芒硝購于安國市昌達中藥材飲片有限公司，經(jīng)我院崔桂華老師鑒定，符合《中國藥典》2010年版標準;陳醋 (河北保定槐茂有限公司);植物油、大蒜、姜 (保定市百樂超市);0.9%氯化鈉 (上海市華中藥業(yè)有限公司，批號11012507);其余試劑均為分析純;水為高純水。皮膚來源:昆明種小鼠，雄性，中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心，動物許可證號:SCXK-(軍)2007-004。

2 方法

2.1 芒硝中SO42－測定方法［6］分別取0.1009 mg/mL的標準硫酸鈉溶液0、1、2、3、4、5、6 mL于10 mL的比色管中，同時分別加入3 mL生理鹽水，加入0.0100 mol/L氯化鋇溶液0.50 mL，搖勻，放置5 min后，加入0.0100 mol/L K2CrO4溶液0.50 mL，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。移入10 mL干燥離心管中，用離心機離心3 min，3500 r/min。吸取5.00 mL上清液于10 mL比色管中，加入pH 3.4的HAc-NaAc緩沖溶液1.50 mL，0.015%聯(lián)鄰甲苯胺溶液3.0 mL，用水稀釋至刻度，搖勻。15 min后以0 mL試劑為空白參比，于620 nm處測量吸光度。以硫酸鈉的質(zhì)量為橫坐標X，以吸光度為縱坐標Y，進行線性回歸，回歸方程為:Y=0.9141X+0.0058，r為0.999。線性范圍為0～0.6054 mg。

2.2 離體鼠皮的制備［7］取質(zhì)量20 g左右的小鼠，用8%硫化鈉 (Na2S)溶液脫去腹部、側(cè)腹部及背部被毛，脫頸椎處死，分別剪下腹部、側(cè)腹部及背部皮膚，除去脂肪及皮下組織，用生理鹽水沖洗干凈，用濾紙吸干表面水分后，用螺旋測微器測量皮厚度，置于生理鹽水中，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 實驗分組及大蒜硝黃膏的制備 前期藥效學實驗結(jié)果表明［8-9］，大蒜硝黃膏穴位貼敷有明顯的促排便、促進腸蠕動和胃排空作用，并能使腸套疊小鼠的腸管還納率和還納程度明顯提高，而非穴位組的作用弱，對大鼠不完全性腸梗阻模型有治療作用，表明大蒜硝黃膏神闕穴給藥可同時發(fā)揮藥物和穴位的雙重作用。為了驗證上述結(jié)論的藥效物質(zhì)基礎，同時為了考察不同黏合賦形劑 (醋、姜汁、植物油)和不同配伍對芒硝透皮釋放行為的影響，設計了不同部位皮膚實驗組、不同賦形劑實驗組和不同配伍實驗組三組實驗，見表1。測量小鼠皮膚，結(jié)果顯示腹部皮膚最薄，背部最厚。

表1 不同實驗組膏的組成、制備方法及所用鼠皮種類和厚度

2.4 體外透皮吸收實驗 體外透皮吸收試驗儀恒溫槽中加入適量水，設定恒溫槽中水溫為 (37±0.1)℃。向Franz擴散池的接收池內(nèi)加入11.5 mL接收液 (生理鹽水)及磁轉(zhuǎn)子，設定接收池的攪拌速度為400 r/min，進行預熱。將按“2.3”項制備好的小鼠皮膚用夾子固定于擴散池的供藥池與接收池之間，角質(zhì)層面向上，真皮層面向下，排盡氣泡。取1.5 g藥膏置于皮膚上，使之與皮膚密切接觸，接觸面積與接收池相當，將Franz擴散池置于透皮吸收儀中，內(nèi)徑為1.53 cm，透皮面積為1.83 cm2。分別于5、10、20、40、60、90、120 min從接收池取樣3 mL，同時向接收池中補充等量的新鮮接收液。將所取3 mL樣品置于10 mL比色管中，同時另取一個10 mL比色管，加入3 mL的生理鹽水為空白對照，加入0.0100 mol/L氯化鋇溶液0.50 mL，按“2.1”項中所述方法操作，測定其吸光度，計算樣品中的質(zhì)量濃度，再計算各時間點累積透過量Q(mg/cm2)。

其中，Cn為第n個取樣點的藥物質(zhì)量濃度 (mg/mL)，Ci為第i(i≤n－1)個取樣點的藥物質(zhì)量濃度 (mg/mL)，V為接收液體積，V0為取樣體積，A為透皮面積。

3 結(jié)果

3.1 由數(shù)學模型擬合結(jié)果的r2可知，將各實驗組的累積透過量Q對t1/2進行線性回歸，顯示Q與t1/2線性關系較好，說明本實驗中芒硝體外滲透藥動學符合Higuchi方程。

3.2 不同部位皮膚對大蒜硝黃膏中芒硝體外透皮特性的影響不同部位皮膚大蒜硝黃膏經(jīng)皮滲透曲線見圖1，滲透藥動學Higuchi方程和滲透參數(shù)見表2。實驗結(jié)果表明:小鼠腹部、側(cè)腹部、背部皮膚厚度依次增厚;的體外累積透過量隨著時間延長而增加;不同部位皮膚的累積透過量、透皮速率以腹部最高，側(cè)腹部次之，背部最差，說明腹部皮膚透過性最好，是最優(yōu)的貼敷部位，此結(jié)果與前期藥效學實驗結(jié)果相符［8-9］。

圖1 不同部位皮膚大蒜硝黃膏中經(jīng)皮滲透曲線 (n=3)

3.3 不同賦形劑對芒硝體外透皮特性的影響 實驗結(jié)果表明，賦形劑醋、姜汁、植物油對大蒜硝黃膏中芒硝成分經(jīng)皮滲透的影響各不相同。以醋為賦形劑，芒硝透皮效果最好，其次為姜汁，植物油最差。醋為賦形劑芒硝中成分2 h累積透過量及透皮速率均高于姜汁和植物油。不同賦形劑大蒜硝黃膏中經(jīng)皮滲透曲線見圖2，滲透藥動學Higuchi方程和滲透參數(shù)見表3。

表2 不同部位皮膚體外滲透藥動學方程和透皮速率J

表2 不同部位皮膚體外滲透藥動學方程和透皮速率J

皮膚部位 回歸方程(Q-t1/2) r2 J/(mg·cm－2·min－1)腹部皮膚 Q=0.128t1/2－0.0360.988 0.128側(cè)腹部皮膚 Q=0.087t1/2－0.057 0.973 0.087背部皮膚 Q=0.058t1/2－0.0390.974 0.058

圖2 不同賦形劑大蒜硝黃膏中經(jīng)皮滲透曲線(n=3)

表3 不同賦形劑藥膏體外滲透藥動學方程和透皮速率J

3.4 不同配伍對大蒜硝黃膏中芒硝體外透皮特性的影響實驗結(jié)果顯示，不同配伍對芒硝成分經(jīng)皮滲透的影響是不同的，全方的2 h積累透過量和透皮速率最高，去掉大黃或大蒜后芒硝的Q值和J值均減少，但這兩組相差較小，將大蒜大黃同時都去掉后，Q值和J值最小。表明大黃、大蒜與芒硝配伍，可促進芒硝的透皮滲透。不同配伍大蒜硝黃膏芒硝成分的經(jīng)皮滲透曲線見圖3，滲透藥動學Higuchi方程和滲透參數(shù)見表4。

圖3 不同配伍大蒜硝黃膏中經(jīng)皮滲透曲線(n=3)

4 結(jié)論與討論

表4 不同配伍藥膏體外滲透藥動學方程和透皮速率J

4.2 體外透皮實驗中，為了增加中藥有效成分的溶解度，常在接收液 (生理鹽水)中加入不同體積分數(shù)的乙醇。通過預試發(fā)現(xiàn)，接收液中加入乙醇，對吸光度有影響，而芒硝的水溶性好，故本實驗采用生理鹽水為接收液。

4.3 穴位貼敷藥物常用賦形劑主要有:植物油、藥汁、醋、姜汁、水等，功效各不相同。常根據(jù)治療目的不同，選用不同的賦形劑。大蒜硝黃膏中選用醋為賦形劑，醋具有走竄通經(jīng)、活血化瘀、散結(jié)止痛的作用，是良好的穴位貼敷基質(zhì)。目前臨床穴位貼敷應用的貼劑為了便于長期保存，將不同賦形劑均以植物油代替，雖然保證了制劑的穩(wěn)定性，但臨床功效大大降低。本實驗考察了醋、姜汁、植物油等賦形劑對大蒜硝黃膏透皮特性的影響。研究結(jié)果顯示:不同賦形劑醋、姜汁、植物油對芒硝經(jīng)皮滲透的影響是不同的，醋促進芒硝透皮吸收作用最大，可見大蒜硝黃膏的成方具有科學性。

4.4 本課題組前期研究已經(jīng)證實，大蒜硝黃膏貼敷于神闕穴可以增強胃排空、腸蠕動，促進排便，并能使腸套疊小鼠的腸管還納率和還納程度明顯提高，對大鼠不完全性腸梗阻模型有治療作用［8-9］。芒硝外用治療腸梗阻等的臨床研究較多［10-12］，但藥效學實驗研究較少［13］，缺乏藥效物質(zhì)基礎和藥代動力學研究，難以為臨床劑型改造和制定更合理的用藥方案提供依據(jù)。本實驗通過大蒜硝黃膏中芒硝成分的體外透皮研究，探討了大蒜硝黃膏的透皮吸收規(guī)律，從而為大蒜硝黃膏的開發(fā)研究和臨床推廣提供參考。

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