吳元潔，鄭書國，方朝暉，吳元波，吳傳云，王玉鳳，劉曉麗，張曉軍

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽合肥 230038;2.皖南醫(yī)學(xué)院，安徽蕪湖 241002;3.安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，安徽合肥 230031;4.安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院，安徽合肥 230001)

近年來，血糖波動(dòng)已日益成為糖尿病及其慢性并發(fā)癥研究的新熱點(diǎn)，研究表明糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展與血糖波動(dòng)密切關(guān)聯(lián)，血糖波動(dòng)是氧化應(yīng)激的可能參與機(jī)制［1-2］。中藥復(fù)方以其整體調(diào)治，療效穩(wěn)定，副作用小的優(yōu)勢(shì)，在糖尿病防治上的作用日趨受到重視，臨床研究發(fā)現(xiàn)益氣養(yǎng)陰活血中藥丹蛭降糖膠囊對(duì)糖尿病有良好的療效［3］，該藥是否對(duì)血糖波動(dòng)存在影響尚值得進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)擬從超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮 (NO)等指標(biāo)探討丹蛭降糖膠囊對(duì)波動(dòng)血糖的影響，為糖尿病波動(dòng)血糖的防治研究提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Sprague-Dawley雄性大鼠120只，體質(zhì)量 (180±20)g，由安徽省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào):scxk(皖)2011-002。實(shí)驗(yàn)過程中對(duì)動(dòng)物處置符合動(dòng)物倫理學(xué)要求。

1.2 藥物與試劑 丹蛭降糖膠囊由太子參、生地黃、牡丹皮、菟絲子、澤瀉、水蛭等藥物組成，是安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院院內(nèi)制劑 (皖藥制字Z20050066)，批號(hào)為20061215，為該院制劑中心按照成熟的水提工藝生產(chǎn)，檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)為以HPLC法測(cè)定丹皮酚和芍藥苷，每1粒膠囊中兩成分的量分別不低于1.0 mg和0.1 mg;臨用時(shí)以蒸餾水加適量CMC-Na配置成一定質(zhì)量濃度。每粒相當(dāng)于生藥0.5 g，成人用量6 g/d;鏈脲佐菌素 (streptozotocin，STZ)購自美國Sigma公司，4℃保存，新鮮配制使用;檸檬酸及檸檬酸鈉購自天津市津宏化工有限公司;血糖儀及同批號(hào)血糖試紙購自德國貝朗公司;普通胰島素購自江蘇萬邦生化醫(yī)藥公司;125I胰島素放免試劑盒購自中國原子能科學(xué)研究院同位素研究所;超氧化物歧化酶、丙二醛、一氧化氮、蛋白定量試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.3 糖尿病大鼠血糖波動(dòng)模型的建立方法 大鼠自由飲水，在22℃，相對(duì)濕度50%的飼養(yǎng)環(huán)境中適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。隨機(jī)取15只作為正常組，其余大鼠禁食12 h后，用檸檬酸緩沖液 (0.1 mmol/L，pH 4.4)溶解配制成含1%STZ溶液，以50 mg/kg STZ腹腔注射誘發(fā)糖尿病。注射STZ 72 h取大鼠尾靜脈血，用血糖儀測(cè)定隨機(jī)血糖值 (最大血糖值為33.3 mmol/L，更高的血糖值儀器顯示為High，按33.3 mmol/L計(jì)算)，造模10 d血糖穩(wěn)定后，隨機(jī)血糖水平≥16.7 mmol/L為造模成功的大鼠，作為糖尿病模型大鼠。造模成功率約80%。取糖尿病模型大鼠80只，按血糖分層隨機(jī)分為持續(xù)高血糖組、波動(dòng)血糖組、波動(dòng)血糖+中藥高劑量組、波動(dòng)血糖+中藥低劑量組，每組20只，波動(dòng)血糖模型及用藥組大鼠每周檢測(cè)2次8∶00和18∶00的血糖值，并根據(jù)這兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)的血糖水平，每日于8∶00和18∶00根據(jù)血糖情況分別皮下注射普通胰島素或灌胃葡萄糖，即當(dāng)血糖值≥16.7 mmol/L時(shí)皮下注射1～3 U普通胰島素，當(dāng)血糖值＜16.7 mmol/L時(shí)，則灌胃葡萄糖2 g/kg體質(zhì)量，造成1日內(nèi)大鼠血糖濃度大幅波動(dòng)模型。正常組和持續(xù)高血糖組大鼠以相同給藥方式給予同體積生理鹽水。共6周。

1.4 給藥方法 波動(dòng)血糖+中藥高劑量組、波動(dòng)血糖+中藥低劑量組大鼠按人與大鼠單位體質(zhì)量折算系數(shù) (以大鼠200 g與人70 kg比較，折算系數(shù)為0.018)，給予丹蛭降糖膠囊灌胃，以體質(zhì)量60 kg成人用量6 g/d計(jì)算，則波動(dòng)血糖+中藥高劑量組、波動(dòng)血糖+中藥低劑量組大鼠分別予以丹蛭降糖膠囊0.63 g/(kg·d)、1.26 g/(kg·d)灌胃，其他3組灌胃等體積生理鹽水。給藥6周。

1.5 標(biāo)本采集 實(shí)驗(yàn)?zāi)┐谓o藥后禁食12 h，各組大鼠按40 mg/kg體質(zhì)量以1%戊巴比妥鈉溶液行腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈抽血，離心取血清保存;處死大鼠后切取部分胰尾組織，以10%中性甲醛液固定，行HE檢測(cè);取0.4 g胰腺組織制備成10%勻漿，離心取上清液保存。

1.6 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

1.6.1 一般情況觀察 觀察各組大鼠精神狀態(tài)，毛色，體質(zhì)量，進(jìn)食，尿量等。

1.6.2 各組大鼠1日5次血糖水平及血糖穩(wěn)定性每周1次，測(cè)1 d內(nèi)8∶00、10∶00、16∶00、18∶00、20∶00血糖水平，并描繪血糖波動(dòng)6周后各組大鼠1 d內(nèi)8∶00、10∶00、16∶00、18∶00、20∶00血糖變化趨勢(shì)曲線。用血糖日平均水平(MBG)、日平均血糖的標(biāo)準(zhǔn)差 (SDBG)、最大血糖波動(dòng)幅度 (LAGE，日內(nèi)血糖最高值與最低值之差)量化血糖穩(wěn)定性，計(jì)算血糖波動(dòng)6周后各組大鼠MBG、SDBG、LAGE值。

1.6.3 血清及胰腺組織SOD、MDA、NO檢測(cè)以酶標(biāo)儀測(cè)定血清和胰腺SOD、MDA、NO。勻漿蛋白濃度采用微量雙縮脲法，MDA采用TBA比色法，SOD采用黃嘌呤氧化酶法，NO采用硝酸還原酶法測(cè)定。

1.6.4 空腹血清胰島素 (FINS) 采用放免法測(cè)定。

1.6.5 胰腺形態(tài)學(xué)變化 胰尾組織經(jīng)10%中性甲醛液固定后常規(guī)石蠟包埋，4 μm切片，行HE染色。光鏡下觀察胰腺形態(tài)學(xué)變化。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。數(shù)據(jù)行正態(tài)分布檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布用單因素多水平設(shè)計(jì)定量資料的方差分析，并進(jìn)行方差齊性分析，方差齊用LSD檢驗(yàn)，方差不齊用Tamhane's T2檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以表示;非正態(tài)分布進(jìn)行多個(gè)獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以中位數(shù) (M)與四分位間距 (Q)表示;大鼠1日血糖變化用兩因素重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)定量資料的方差分析。相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)分析。各種檢驗(yàn)的顯著性水平設(shè)定為P ＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 造模后持續(xù)高血糖組大鼠精神萎靡，行動(dòng)遲緩，對(duì)外界反應(yīng)遲鈍，毛色無光澤，易臟，進(jìn)食減少，飲水量、尿量增加，尿液腥臊味加重，多數(shù)大鼠體質(zhì)量明顯降低，部分大鼠尿路感染，皮膚出現(xiàn)潰爛、膿腫，波動(dòng)血糖組較持續(xù)高血糖組癥狀更明顯，部分大鼠出現(xiàn)白內(nèi)障表現(xiàn)。波動(dòng)血糖+中藥高劑量組、波動(dòng)血糖+中藥低劑量組大鼠較兩模型組精神明顯好轉(zhuǎn)，活動(dòng)力較強(qiáng)，反應(yīng)較靈敏，毛色較光澤，尿液腥臊味減輕，體質(zhì)量較兩模型組亦明顯增加。波動(dòng)6周后，正常組、持續(xù)高血糖組、波動(dòng)血糖組、波動(dòng)血糖+中藥高劑量組、波動(dòng)血糖+中藥低劑量組大鼠因感染、嚴(yán)重并發(fā)癥、灌胃操作不當(dāng)?shù)仍蚍謩e死亡2只、7只、7只、6只、7只。

2.2 血糖波動(dòng)6周后各組大鼠1日5點(diǎn)時(shí)間血糖變化及血糖日平均水平、日平均血糖的標(biāo)準(zhǔn)差、最大血糖波動(dòng)幅度 見圖1、表1。圖1可看出，波動(dòng)血糖組大鼠血糖在8∶00較高，然后呈下降趨勢(shì)至10∶00血糖降至最低，之后血糖持續(xù)上升至18∶00達(dá)高峰，然后下降。在1日內(nèi)形成2個(gè)明顯的血糖波動(dòng)高峰和低谷;兩用藥組大鼠血糖波動(dòng)趨勢(shì)基本和波動(dòng)血糖組一致，但血糖變化趨勢(shì)相對(duì)平緩;持續(xù)高血糖組血糖變化趨勢(shì)較波動(dòng)血糖組亦相對(duì)平緩，在8∶00最高，然后下降，至10∶00血糖降至最低，之后持續(xù)呈上升趨勢(shì)至20∶00達(dá)最高。正常組血糖1日內(nèi)血糖變化幅度最小，基本保持穩(wěn)定低值。單因素多水平方差分析顯示:與正常組比較，其他4組MBG、SDBG、LAGE明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01);與持續(xù)高血糖組比較，波動(dòng)血糖組大鼠SDBG、LAGE明顯增高，MBG降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01);兩用藥組MBG、SDBG、LAGE與波動(dòng)血糖組比較均有減少的趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 血糖波動(dòng)6周后各組大鼠1日5點(diǎn)血糖變化趨勢(shì)Fig.1 Intraday variation of blood glucose in diabetic rats

表1 血糖波動(dòng)6周后各組大鼠血糖日平均水平、日平均血糖標(biāo)準(zhǔn)差、最大血糖波動(dòng)幅度變化 ()Tab.1 Changes in MBG，SDBG and LAGE in rats after blood glucose fluctuation for 6 weeks()

表1 血糖波動(dòng)6周后各組大鼠血糖日平均水平、日平均血糖標(biāo)準(zhǔn)差、最大血糖波動(dòng)幅度變化 ()Tab.1 Changes in MBG，SDBG and LAGE in rats after blood glucose fluctuation for 6 weeks()

注:與正常組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與持續(xù)高血糖組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01

組別 動(dòng)物數(shù) 血糖日平均水平/(mmol·L-1) 日平均血糖標(biāo)準(zhǔn)差/(mmol·L-1)最大血糖波動(dòng)幅度/(mmol·L-1)13 5.77±0.21 0.41±0.13 0.50±0.28持續(xù)高血糖組 13 29.83±1.97＊＊ 2.58±0.85＊＊ 5.29±2.24＊＊波動(dòng)血糖組 13 22.31±5.97＊＊△△ 8.86±1.63＊＊△△ 16.22±5.14＊＊△△波動(dòng)血糖+中藥高劑量組 14 21.38±4.05＊＊△△ 7.10±2.02＊＊△△ 9.61±4.60＊＊波動(dòng)血糖+中藥低劑量組 13 21.74±4.01＊＊ 8.09±1.38＊＊△△ 10.89±4.56正常組＊＊△△

2.3 血糖波動(dòng)6周后各組大鼠空腹血清胰島素水平 見表2。經(jīng)多個(gè)獨(dú)立樣本比較的Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，血糖波動(dòng)6周后5組大鼠FINS水平χ2=14.179，P=0.007，F(xiàn)INS水平總體分布存在顯著性差異，其中正常組大鼠FINS水平最高 (平均秩45.50)，波動(dòng)血糖組大鼠FINS水平最低 (平均秩19.13)。持續(xù)高血糖組、波動(dòng)血糖組、波動(dòng)血糖+中藥低劑組與正常組FINS水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05，P＜0.01);波動(dòng)血糖+中藥高劑組FINS與波動(dòng)血糖組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);波動(dòng)血糖組與持續(xù)高血糖組FINS水平比較，差異則無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05)。

表2 血糖波動(dòng)6周后各組大鼠空腹血清胰島素水平Tab.2 Levels of FINS in rats after blood glucose fluctuation for 6 weeks

2.4 各組大鼠氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)變化比較 見表3。單因素多水平方差分析顯示:與正常組比較，持續(xù)高血糖組、波動(dòng)血糖組大鼠血清SOD、胰腺SOD水平明顯降低，血清MDA、胰腺M(fèi)DA水平明顯升高 (P＜0.01);持續(xù)高血糖組血清NO水平明顯升高 (P＜0.05)，持續(xù)高血糖組、波動(dòng)血糖組胰腺NO水平明顯升高 (P＜0.05，P＜0.01)。與波動(dòng)血糖組比較，波動(dòng)血糖+中藥高劑量組、波動(dòng)血糖+中藥低劑量組血清SOD水平明顯升高(P＜0.01);而中藥兩組血清MDA、NO以及胰腺M(fèi)DA、NO水平較波動(dòng)血糖組有降低趨勢(shì)，胰腺SOD水平有上升趨勢(shì)，其中，波動(dòng)血糖+中藥低劑量組血清MDA和胰腺SOD與波動(dòng)血糖組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。

表3 各組大鼠血清及胰腺SOD、MDA、NO比較 ()Tab.3 Levels of SOD，MDA，NO in serum and pancreatic tissue of rats()

表3 各組大鼠血清及胰腺SOD、MDA、NO比較 ()Tab.3 Levels of SOD，MDA，NO in serum and pancreatic tissue of rats()

注:與正常組比較，*P ＜0.05，＊＊P＜0.01;與波動(dòng)血糖組比較，▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01

組別 動(dòng)物數(shù) 血清SOD/(U·mL-1)血清MDA/(nmol·mL-1)血清NO/(μmol·L-1)胰腺SOD/(U·mgprot-1)胰腺M(fèi)DA/(nmol·mgprot-1)胰腺NO/(μmol·mgprot-1)正常組 13 239.73±15.56 2.28±0.56 1.48±0.24 10.16±2.21 1.40±0.56 2.79±1.05持續(xù)高血糖組 13 196.98±21.37＊＊ 3.35±1.06＊＊2.26±0.42* 7.35±1.47＊＊ 2.06±0.49＊＊ 5.50±2.69*波動(dòng)血糖組 13 194.88±17.66＊＊ 3.38±0.94＊＊1.81±0.32 8.42±1.49＊＊ 2.36±0.88＊＊ 6.24±2.71＊＊波動(dòng)血糖+中藥高劑量組 14 217.63±26.75＊＊▲▲ 2.73±1.27 1.72±0.25 8.55±1.51* 1.62±0.89 3.60±2.39波動(dòng)血糖+中藥低劑量組 13 228.53±20.358▲▲ 2.55±0.97▲ 1.62±0.30 9.29±3.00▲1.65±0.81 3.81±1.73

2.5 相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析顯示血清SOD與血清NO(r=-0.317，P＜0.05)、胰腺NO(r=-0.408，P＜0.01)呈負(fù)相關(guān)，血清MDA與血清NO呈正相關(guān) (r=0.330，P＜0.01)，胰腺M(fèi)DA與胰腺NO呈正相關(guān) (r=0.574，P＜0.01);SDBG與FINS呈負(fù)相關(guān) (r=-0.328，P＜0.01)，SDBG與胰腺NO呈正相關(guān) (r=0.250，P＜0.05)，LAGE與FINS負(fù)相關(guān) (r=-0.303，P＜0.05)。

2.6 各組大鼠胰島組織形態(tài)學(xué)變化 見圖2。正常組大鼠胰島形態(tài)規(guī)則呈圓形，數(shù)量較多，細(xì)胞核呈圓形藍(lán)色著染，胞質(zhì)豐富淺粉色著染;持續(xù)高血糖組和波動(dòng)血糖組大鼠均可見胰島萎縮，β細(xì)胞數(shù)量減少，顆粒脫失，空泡變性，部分β細(xì)胞體積代償性增大等，波動(dòng)血糖組病理表現(xiàn)尤為嚴(yán)重;波動(dòng)血糖+中藥高劑量組、波動(dòng)血糖+中藥低劑量組大鼠仍有部分β細(xì)胞體積代償性增大，但較持續(xù)高血糖組和波動(dòng)血糖組胰島明顯增大，形狀較規(guī)則。

3 討論

圖2 各組大鼠胰島組織形態(tài)學(xué)變化 (HE×400)Fig.2 Morphologic variations of rat pancreatics islets(HE×400)

與糖調(diào)節(jié)正常人群相比，糖尿病患者由于胰島β細(xì)胞功能缺陷、胰島素抵抗等因素，導(dǎo)致血糖調(diào)節(jié)機(jī)制障礙，從而引起持續(xù)性或間歇性的血糖波動(dòng)。本研究在腹腔注射鏈脲佐菌素建立糖尿病持續(xù)高血糖模型的基礎(chǔ)上，通過每日2次皮下注射普通胰島素或灌服葡萄糖誘導(dǎo)糖尿病血糖波動(dòng)模型，采用MBG、SDBG、LAGE等量化指標(biāo)評(píng)價(jià)血糖的穩(wěn)定性。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)糖尿病持續(xù)高血糖模型和血糖波動(dòng)模型組大鼠MBG、SDBG、LAGE較正常組明顯增高 (P＜0.05，P＜0.01)，而血糖波動(dòng)模型組SDBG、LAGE顯著高于持續(xù)高血糖模型組 (P＜0.01)，說明糖尿病波動(dòng)血糖模型成功，同時(shí)也反映了糖尿病高血糖狀態(tài)較糖調(diào)節(jié)正常狀態(tài)而言，本身也存在著一定的血糖波動(dòng)。

血糖波動(dòng)狀態(tài)較持續(xù)性高糖更能誘導(dǎo)胰島和INS-1細(xì)胞分泌胰島素功能損傷。Guerra等［4］體外實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，與正常血糖 (5.5 mmol/L)培養(yǎng)的人胰島β細(xì)胞相比，波動(dòng)葡萄糖刺激處理 (5.5與16.7 mmol/L隔日交替)的β細(xì)胞胰島素釋放功能受損，細(xì)胞凋亡增加;體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究［5］亦證實(shí)波動(dòng)性高血糖較持續(xù)性高血糖更能抑制GK大鼠胰島素釋放功能和胰島素相關(guān)基因表達(dá)，對(duì)β細(xì)胞損害更為明顯。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)血糖波動(dòng)6周后持續(xù)高血糖組和血糖波動(dòng)組SD大鼠FINS水平明顯低于正常組 (P＜0.05，P＜0.01)，其中血糖波動(dòng)組FINS水平最低;大鼠胰島組織形態(tài)學(xué)顯示糖尿病模型組大鼠胰島萎縮，β細(xì)胞數(shù)量減少，部分β細(xì)胞體積代償性增大，細(xì)胞凋亡，以血糖波動(dòng)模型組病理表現(xiàn)尤為嚴(yán)重。相關(guān)分析顯示SDBG、LAGE與FINS呈負(fù)相關(guān)。提示血糖波動(dòng)與胰島素相關(guān)，且較持續(xù)高血糖對(duì)胰島素的損傷更加嚴(yán)重。

活性氧簇 (ROS)如超氧陰離子和過氧化氫和活性氮基團(tuán) (RNS)如一氧化氮、過氧亞硝酸鹽的生理信號(hào)功能的紊亂被認(rèn)為是糖尿病的重要特征［6］。有研究表明血糖波動(dòng)易引發(fā)氧化應(yīng)激，Stadler等［7］研究認(rèn)為氧化應(yīng)激是糖尿病慢性并發(fā)癥的主要發(fā)病機(jī)制之一。Monnier等［8］發(fā)現(xiàn)尿中8-iso-PGF(2α)排出率與血糖波動(dòng)強(qiáng)度呈高度正相關(guān)。氧化應(yīng)激狀態(tài)下產(chǎn)生了過量的ROS，引起DNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)氧化的損傷，胰島β細(xì)胞由于氧自由基清除酶水平很低而最易被損傷。Bian等［9］通過多元線性逐步回歸分析發(fā)現(xiàn)住院糖尿病患者平均血糖波動(dòng)幅度 (MAGE)是精氨酸刺激試驗(yàn)C肽增值 (ACP)的獨(dú)立影響因素，認(rèn)為血糖波動(dòng)對(duì)胰島β細(xì)胞功能的損傷較持續(xù)性的高血糖更嚴(yán)重。另外，活性氧 (ROS)與NO關(guān)系亦較密切。NO是由L-精氨酸在一氧化氮合成酶 (NOS)催化下合成的。一經(jīng)產(chǎn)生，NO即能迅速與超氧陰離子()產(chǎn)生強(qiáng)大的有毒氧化劑過氧化亞硝酸鹽(ONOO-)，由于NO與超氧陰離子反應(yīng)形成ONOO-的速度比銅/鋅超氧化物歧化酶與超氧陰離子的反應(yīng)速度快6倍［10］，且胰島β細(xì)胞本身的氧自由基清除酶水平很低，所以過氧化亞硝酸鹽對(duì)線粒體功能和DNA合成造成嚴(yán)重的毒性作用，不僅能直接氧化和損傷胰島細(xì)胞DNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)，還可能影響蛋白激酶C和B，磷脂酰肌醇3'-激酶，細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶催化的酶/基因調(diào)控的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)，導(dǎo)致胰島素基因表達(dá)障礙［7］。有實(shí)驗(yàn)通過外源性的一氧化氮對(duì)大鼠胰島細(xì)胞、肝細(xì)胞、居民活化的巨噬細(xì)胞、主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞和小鼠腫瘤細(xì)胞系等不同細(xì)胞的毒性作用比較，證實(shí)胰島細(xì)胞是上述細(xì)胞中對(duì)NO最敏感的細(xì)胞，推斷NO可在胰島炎導(dǎo)致的胰島素依賴型糖尿病中發(fā)揮著重要作用［11］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)糖尿病大鼠較正常組血清和胰腺SOD水平明顯降低，MDA水平明顯升高 (P＜0.01);MDA為脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的標(biāo)志，SOD是評(píng)價(jià)抗氧化能力的經(jīng)典指標(biāo)，SOD水平明顯降低，MDA水平明顯升高說明糖尿病持續(xù)高血糖和波動(dòng)血糖狀態(tài)下均存在明顯的氧化應(yīng)激。實(shí)驗(yàn)亦發(fā)現(xiàn)持續(xù)高血糖組血清和胰腺NO水平明顯升高，波動(dòng)血糖組胰腺 NO水平明顯升高 (P＜0.05，P＜0.01)，相關(guān)分析顯示血清SOD與血清NO以及胰腺NO均呈負(fù)相關(guān);血清MDA與血清NO呈正相關(guān);胰腺M(fèi)DA與胰腺NO呈正相關(guān)。說明糖尿病持續(xù)高血糖和波動(dòng)血糖狀態(tài)下抗氧化能力減低以及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的增加均與NO有關(guān)。

糖尿病病機(jī)復(fù)雜，中醫(yī)整體觀念的認(rèn)識(shí)觀符合糖尿病的診治模式。糖尿病屬于中醫(yī)“消渴”范疇，以“氣虛陰虧血瘀”為基本病機(jī)，丹蛭降糖膠囊以太子參補(bǔ)益脾腎之氣，生地黃滋養(yǎng)脾腎之陰，菟絲子補(bǔ)腎固精;丹皮、水蛭行氣化瘀通絡(luò);澤瀉清熱瀉濁。共奏益氣養(yǎng)陰，活血化瘀之功，在改善糖尿病癥狀、胰島細(xì)胞功能及氧化應(yīng)激等方面有良好作用［12-14］。為研究其對(duì)糖尿病血糖波動(dòng)大鼠的影響，本實(shí)驗(yàn)對(duì)糖尿病血糖波動(dòng)大鼠進(jìn)行了6周的丹蛭降糖膠囊治療，發(fā)現(xiàn)中藥高低劑量組的大鼠胰島較兩組模型組明顯增大，血清胰島素水平高于血糖波動(dòng)組，其中，與波動(dòng)血糖組比較，中藥高劑量組提高FINS水平顯著 (P＜0.05);中藥高低劑量組血清SOD水平明顯升高 (P＜0.01)，中藥低劑量組血清MDA水平明顯減低，胰腺SOD水平明顯升高 (P＜0.05);此外，中藥高低劑量組MBG、SDBG、LAGE以及血清 NO和胰腺 MDA、NO水平較血糖波動(dòng)組均有降低趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05)。說明丹蛭降糖膠囊能夠提高胰島β細(xì)胞數(shù)量，促進(jìn)其再生而提高胰島素水平，從而改善糖尿病癥狀，并能有效抑制糖尿病波動(dòng)血糖狀態(tài)下的氧化應(yīng)激，其作用主要在抗氧化方面。由于糖尿病波動(dòng)血糖的影響因素和機(jī)制復(fù)雜，因此，關(guān)于丹蛭降糖膠囊影響β細(xì)胞分泌的機(jī)制及抗氧化機(jī)制尚有待進(jìn)一步深入研究。

［1］Kilpatrick E S，Rigby A S，Atkin S L.The effect of glucose variability on the risk of microvascular complications in type 1 diabetes［J］.Diabetes Care，2006，29(7):1486-1490.

［2］Chang C M，Hsieh C J，Huang J C，et al.Acute and chronic fluctuations in blood glucose levels can increase oxidative stress in type 2 diabetes mellitus［J］.Acta Diabetol，2012，49(Suppl 1):S171-177.

［3］劉懷珍，劉 劍，鮑陶陶，等.丹蛭降糖膠囊對(duì)2型糖尿病患者B細(xì)胞功能的影響［J］.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，26(4):5-7.

［4］Del Guerra S，Grupillo M，Masini M，et al.Gliclazide protects human islet beta-cells from apoptosis induced by intermittent high glucose［J］.Diabetes Metab Res Rev，2007，23(3):234-238.

［5］蔡 燕，劉翠萍，茅曉東，等.血糖波動(dòng)對(duì)糖尿病大鼠胰島素釋放和胰島素敏感性的影響［J］.南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，29(1):60-64.

［6］Afanas'evⅠ.Signaling of reactive oxygen and nitrogen species in diabetes mellitus［J］.Oxid Med Cell Longev，2010，3(6):361-373.

［7］Stadler K，Jenei V，Von Bolcshazy G，et al.Role of free radicals and reactive nitrogen species in the late complications of diabetes mellitus in rats［J］.Orv Hetil，2004，145(21):1135-1140.

［8］Monnier L，Mas E，Ginet C，et al.Activation of oxidative stress by acute glucose fluctuations compared with sustained chronic hyperglycemia in patients with type 2 diabetes［J］.JAMA，2006，295(14):1681-1687.

［9］Bian H，Gao X，Gao J.Relationship between glucose fluctuation and beta cell function in patients with diabetes［J］.Chin Med J，2009，89(10):664-668.

［10］Beckman J S，Koppenol W H:Nitric oxide，superoxide，and peroxynitrite:The good，the bad，and the ugly［J］.Am J Physiol，1996，271(5 Pt 1):C1424-1437.

［11］Kr?ncke K D，Brenner H H，Rodriguez M L，et al.Pancreatic islet cells are highly susceptible towards the cytotoxic effects of chemically generated nitric oxide［J］.Biochim Biophys Acta，1993，1182(2):221-229.

［12］吳元潔，方朝暉，鄭書國，等.丹蛭降糖膠囊聯(lián)合運(yùn)動(dòng)對(duì)糖尿病大鼠胰腺氧化應(yīng)激及胰島功能的影響［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，32(11):1531-1534.

［13］吳元潔，方朝暉，鄭書國，等.丹蛭降糖膠囊聯(lián)合運(yùn)動(dòng)對(duì)糖尿病大鼠胰腺JNK信號(hào)通路的影響研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào)，2012，10(11):1279-1285.

［14］吳元潔，方朝暉，鄭書國，等.丹蛭降糖膠囊聯(lián)合運(yùn)動(dòng)對(duì)糖尿病大鼠NADPH氧化酶亞單位p22phox表達(dá)水平的影響［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，33(5):641-645.