劉丹丹，魏志雄

(東莞市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 東莞 523109)

牛大力水提物抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究

劉丹丹*，魏志雄

(東莞市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 東莞 523109)

目的研究牛大力水提物的抗炎鎮(zhèn)痛作用。方法通過二甲苯誘發(fā)小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)、腹腔注射醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高實(shí)驗(yàn)和大鼠棉球肉芽實(shí)驗(yàn)觀察牛大力水提物的抗炎作用；采用醋酸扭體法和熱板刺激法觀察牛大力水提物的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果牛大力水提物能減輕二甲苯所致小鼠耳廓的腫脹度，抑制醋酸所致腹腔毛細(xì)血管通透性的增高，對(duì)大鼠棉球肉芽腫有明顯的抑制作用，并能減少醋酸所致小鼠的扭體次數(shù)和提高小鼠對(duì)熱刺激的痛閾值。結(jié)論牛大力水提物對(duì)急、慢性炎癥均有抑制作用，對(duì)熱和化學(xué)刺激引起的疼痛反應(yīng)有明顯的鎮(zhèn)痛作用。

牛大力；水提取物；抗炎作用；鎮(zhèn)痛作用

牛大力為我國(guó)南方地區(qū)習(xí)用的中藥材，豆科崖豆藤屬植物美麗崖豆藤M(fèi)illettiaspeciosaChamp.的干燥根，又叫山蓮藕、大力薯，性味甘、平，歸肺、腎經(jīng)，具有補(bǔ)虛潤(rùn)肺、強(qiáng)筋活絡(luò)的功效，在兩廣地區(qū)常作為煲湯原料藥，是一種食藥兩用的嶺南特色藥物。臨床證明其對(duì)多種慢性疾病有治療作用，如腰

肌酸痛、跌打損傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺結(jié)核、慢性支氣管炎、慢性肝炎等均有一定療效[1-2]。目前尚未見有關(guān)牛大力水提物抗炎鎮(zhèn)痛作用的系統(tǒng)報(bào)道，為此本實(shí)驗(yàn)在前期研究的基礎(chǔ)上[3-5]，通過建立動(dòng)物炎癥和疼痛模型，對(duì)牛大力水提取物開展了抗炎鎮(zhèn)痛作用的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與儀器

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)KM小鼠，體重18～22 g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格許可證號(hào)：SCXK(粵)2008-0002(44007200003653)；SD大鼠，體重120～150 g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格許可證號(hào)：SCXK(粵)2008-0002(44007200003654)，均由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物正常飼養(yǎng)3 d后供試。

1.2 受試藥物

牛大力(廣州致信中藥飲片有限公司，批號(hào)：100701)。牛大力水提物制備：采用水煎法自制，取適量牛大力干燥藥材，用8倍體積的蒸餾水浸泡1 h，加熱煮沸2 h，趁熱濾取藥液；殘?jiān)偌?倍量蒸餾水，煮沸1 h，合并兩次濾液，濃縮至1 g生藥·mL-1備用，使用時(shí)用新鮮蒸餾水稀釋至所需給藥濃度。

吲哚美辛腸溶片(廣東華南藥業(yè)有限公司，批號(hào)：121101)；36%乙酸(廣州化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20110801-2)；二甲苯(廣州化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20040704-2)。

1.3 儀器

UV2550型紫外可見分光光度計(jì)(日本Shimadzu公司)，YLS-6B智能熱板儀(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站)，BP211D型電子分析天平(德國(guó)Sartorius公司)。

2 方法

2.1 牛大力水提物抗炎作用實(shí)驗(yàn)

2.1.1 對(duì)小鼠耳廓腫脹的影響[6]取KM小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為5個(gè)組：空白組，陽(yáng)性對(duì)照組，牛大力水提物高(20 g·kg-1·d-1)、中(10 g·kg-1·d-1)、低(5 g·kg-1·d-1)劑量給藥組。陽(yáng)性藥按吲哚美辛腸溶片溶液0.01 g·kg-1·d-1灌胃，空白組給予等容積蒸餾水，連續(xù)4 d。于末次給藥后1 h，將二甲苯20 μL滴于各小鼠右耳兩面致炎，左耳不涂作為對(duì)照。致炎20 min后小鼠頸部脫臼處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用打孔器分別在左、右耳同一部位打下圓耳片，精密稱重，以左、右耳片重量之差作為腫脹度，比較各組間差異。

2.1.2 對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響[7]分組和給藥方法同2.1.1。于末次給藥后1 h，各鼠尾靜脈注射1%伊文思藍(lán)0.9%氯化鈉溶液10 g·kg-1體重，立即腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL/只，20 min后小鼠脫頸椎處死，剪開腹腔，用5 mL 0.9%氯化鈉溶液沖洗腹腔數(shù)次，收集洗液，1 000 r·min-1離心5 min，取上清液用紫外分光光度計(jì)于590 nm處測(cè)吸光度(A)，比較各組間差異。

2.1.3 對(duì)大鼠棉球肉芽腫的影響[6]取SD大鼠60只，雌雄各半，體重為180～220 g，隨機(jī)分成5組：空白組，吲哚美辛陽(yáng)性對(duì)照組(0.005 g·kg-1·d-1)，牛大力水提物高(10 g·kg-1·d-1)、中(5 g·kg-1·d-1)、低(2.5 g·kg-1·d-1)劑量給藥組。在乙醚淺麻醉下，腹部去毛消毒，將滅菌棉球[每個(gè)棉球重(25±0.5) mg，高壓滅菌，每個(gè)各加入氨芐青霉素1 mg·(0.1 mL)-1，50 ℃烘干]植入大鼠皮下，然后縫合。術(shù)后次日開始給藥，空白對(duì)照組給等量的飲用水，連續(xù)10 d。第11天脫頸椎處死大鼠，打開原切口，將棉球連同周圍結(jié)締組織一起取出，剔除脂肪組織，放在烘箱里60 ℃烘干12 h后稱重，將稱得的重量減去棉球重量即得棉球肉芽腫重量，比較各組差異。

2.2 牛大力水提物鎮(zhèn)痛作用實(shí)驗(yàn)

2.2.1 對(duì)醋酸所致小鼠疼痛的影響[8]分組和給藥方法同2.1.1。于末次給藥后1 h，每組每只小鼠腹腔注射0.6%的醋酸溶液0.2 mL，記錄注射醋酸后15 min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)，比較各組間差異。

2.2.2 對(duì)熱刺激所致小鼠疼痛的影響[8]取KM雌性小鼠，將其置于恒溫(55±0.5)℃的熱板測(cè)痛儀上，用秒表記錄小鼠出現(xiàn)舔后足的時(shí)間(s)作為給藥前痛閾值，選取60只痛閾值5～30 s的合格小鼠，分組和給藥方法同2.1.1，連續(xù)給藥3 d，于末次給藥后1 h再測(cè)定各小鼠的痛閾值，觀察時(shí)間為60 s。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 對(duì)小鼠耳廓腫脹的影響

牛大力水提物各給藥組均能減輕二甲苯致炎小鼠的耳腫脹度，高劑量組效果明顯，與空白組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示牛大力水提物對(duì)急性炎性腫脹具有抑制作用。見表1。

表1 牛大力水提取物對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01；下同

3.2 對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響

牛大力水提物高、中劑量組可明顯減少醋酸所致的小鼠腹內(nèi)炎性物質(zhì)的滲出，抑制毛細(xì)血管通透性的增高，與空白組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或0.05)，提示牛大力水提物對(duì)炎性過程中毛細(xì)血管通透性增高具有一定的抑制作用。見表2。

表2 牛大力水提物對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響

3.3 對(duì)大鼠棉球肉芽腫的影響

牛大力水提物高、中、低劑量組均可明顯減輕大鼠棉球肉芽的凈重，與模型組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或0.01)，低劑量組效果最好，其肉芽抑制率與陽(yáng)性對(duì)照組相當(dāng)，提示牛大力水提物具有抑制大鼠肉芽腫增重的抗炎消腫作用。見表3。

表3 牛大力水提物對(duì)大鼠棉球肉芽腫抑制的影響

3.4 對(duì)醋酸所致小鼠疼痛的影響

牛大力水提物高、中、低劑量組均可減少醋酸所致小鼠15 min內(nèi)的扭體次數(shù)，其中高、中劑量組效果明顯，與空白組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，提示牛大力有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用。見表4。

表4 牛大力水提物對(duì)醋酸所致小鼠疼痛的影響

3.5 對(duì)熱刺激所致小鼠疼痛的影響

牛大力水提物高、中劑量組可明顯提高小鼠痛閾值，延長(zhǎng)小鼠痛閾時(shí)間，與空白組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示牛大力有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用。見表5。

表5 牛大力水提物對(duì)熱刺激所致小鼠疼痛的影響

4 討論

炎癥是許多疾病的基本病理過程，其基本病理變化為局部微血管反應(yīng)和血液成分的滲出，局部臨床特征是紅腫熱痛和功能障礙。炎癥發(fā)生發(fā)展過程一般分為3期，早期以毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性亢進(jìn)為主，中期為血小板吸附及白細(xì)胞游走，晚期為肉芽組織增生[7]。本實(shí)驗(yàn)主要從炎癥的早期和晚期入手研究牛大力水提取物的抗炎作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明牛大力水提取物可減輕二甲苯引起的小鼠耳腫脹，在以血管通透性為主要改變的急性炎癥模型中，能明顯抑制醋酸所致小鼠急性腹膜炎的毛細(xì)血管通透性，說明牛大力水提物對(duì)炎癥反應(yīng)早期的急性滲出性腫脹有明顯抑制作用，能有效對(duì)抗急性炎癥。在以肉芽組織增生為指標(biāo)的慢性炎癥模型實(shí)驗(yàn)中，牛大力水提物能夠顯著抑制異物所致大鼠炎癥的肉芽增生，但沒有表現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系，說明牛大力水提物對(duì)異物所致大鼠炎癥肉芽增生的抑制作用具有最佳作用劑量，并非劑量越大越好。

本實(shí)驗(yàn)研究鎮(zhèn)痛的動(dòng)物模型采用了醋酸致痛小鼠扭體實(shí)驗(yàn)及熱板實(shí)驗(yàn)。扭體實(shí)驗(yàn)是常用來篩選非甾體類抗炎藥鎮(zhèn)痛作用的一種敏感而簡(jiǎn)便的方法，與外周神經(jīng)鎮(zhèn)痛有很大的關(guān)系，常用一些化學(xué)刺激物如強(qiáng)酸等給入動(dòng)物體內(nèi)造成疼痛模型。熱板實(shí)驗(yàn)是常用于篩選中樞鎮(zhèn)痛藥的一種動(dòng)物模型，中樞鎮(zhèn)痛藥可相對(duì)延長(zhǎng)熱板刺激的反應(yīng)時(shí)間，而外周鎮(zhèn)痛藥則不能，主要通過對(duì)動(dòng)物施加一定的傷害性刺激如熱、電等引起疼痛反應(yīng)。牛大力水提物在這兩個(gè)模型中均表現(xiàn)出較好的鎮(zhèn)痛作用，能夠顯著減少醋酸致痛小鼠的扭體次數(shù)，明顯提高熱刺激致痛小鼠的痛閾值，表明牛大力水提取物對(duì)物理和化學(xué)因素引起的疼痛均有明顯的對(duì)抗作用，具有一定的外周鎮(zhèn)痛及中樞鎮(zhèn)痛作用，可緩解臨床炎癥反應(yīng)引起的疼痛。

綜上所述，牛大力水提取物具有抗炎鎮(zhèn)痛作用，為臨床用于炎癥反應(yīng)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，但關(guān)于其藥理作用機(jī)制可能是多方面的，尚有待于進(jìn)一步探討。

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ExperimentalStudiesontheAnti-inflammatoryandAnalgesicEffectsoftheWaterExtractfromMillettiaeSpeciosaeRadix

LIUDandan*，WEIZhixiong

(Dongguan Institutes For Food And Drug Control，Dongguan 523109，Guangdong)

Objective：To study the anti-inflammatory and analgesic effects ofMillettiaeSpeciosaeradix water extract.MethodsAnti-inflammatory effects were determined by xylene induced ear acute inflammatory edema，capillary permeability of peritoneal and granuloma induced with cotton ball in mice.Analgesic effects were observed by acid causing body distortion test and action to pain caused by heat in mice.ResultsThe water extract ofM.Speciosaeradix resisted the swelling of pinna of mice caused by xylene and capillary permeability of peritoneal in mice，with depressant effect on the tampon granuloma obviously.In addition，it could decreased the times of stretching and raised the pain threshold.ConclusionThe water extract fromM.Speciosaeradix manifested obvious anti-inflammatory effects on acute and chronic inflammatory reactions.The pain reactions induced by heat and chemical stimulus were significantly relieved by the water extract ofM.Speciosaeradix.

MillettiaeSpeciosaeradix；Water extract；Anti-inflammatory effect；Analgesic effect

*

劉丹丹，主管中藥師，研究方向：藥品檢驗(yàn)；Tel：(0769)22017096，E-mail：269517874@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.07.005

2014-03-31)