汝秋明，楚云杰

(1.吉林省食品藥品檢驗所，吉林 長春 130033；2.長春中醫(yī)藥大學(xué) 附屬醫(yī)院，吉林 長春 130021)

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汝秋明，副主任藥師，研究方向：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；E-mail：rqiuming@sina.cn

舒神靈膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

汝秋明1*，楚云杰2

(1.吉林省食品藥品檢驗所，吉林 長春 130033；2.長春中醫(yī)藥大學(xué) 附屬醫(yī)院，吉林 長春 130021)

目的建立舒神靈膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法對該制劑中的丹參、五味子、甘草、人參進行定性鑒別；采用HPLC測定該制劑中五味子的有效成分五味子醇甲的含量。結(jié)果薄層色譜可鑒別出丹參、五味子、甘草、人參的特征斑點，且陰性對照無干擾。HPLC法測定五味子醇甲在0.040 7～0.366 5 μg線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為100.38%，RSD=1.2%(n=6)。結(jié)論該方法簡便可靠，專屬性強，重現(xiàn)性好，可用于舒神靈膠囊的質(zhì)量控制。

舒神靈膠囊；薄層色譜法；高效液相色譜法；五味子醇甲；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

舒神靈膠囊由丹參、五味子等11味中藥組成，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第十冊，具有舒肝理氣，解郁安神的功效，用于神經(jīng)衰弱，神經(jīng)官能癥，更年期綜合癥。原標(biāo)準(zhǔn)中只有兩個化學(xué)反應(yīng)鑒別，專屬性不強。筆者通過實驗研究，增加了丹參、五味子、甘草、人參的薄層色譜鑒別。五味子具有收斂固澀，益氣生津，補腎寧心的功效，與該制劑的功能主治有密切關(guān)系，因此建立了五味子中五味子醇甲的含量測定方法，以更好地控制該制劑質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津LC-2010HT高效相色譜儀，CLASS-VP色譜工作站，ZF-I紫外光燈。預(yù)制硅膠G薄層板、預(yù)制硅膠GF254薄層板、預(yù)制高效硅膠G薄層板(薄層層析用，青島海洋化工集團)。

1.2 試藥

丹參、五味子、甘草、人參對照藥材；丹參酮ⅡA，五味子甲素，人參皂苷Rg1、Re等對照品，均購自中國食品藥品檢定研究院。舒神靈膠囊(規(guī)格：0.3 g/粒，吉林省輝南天泰藥業(yè)股份有限公司，批號：090201，090401，090402；吉林省輝南長龍藥業(yè)股份有限公司，批號：090401，090402，090403)，五味子醇甲對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110857-200406，規(guī)格：20 mg，供含量測定用)。乙腈為色譜純，水為純化水。其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 丹參的鑒別 取本品內(nèi)容物18 g，研細(xì)，加乙醚50 mL，超聲處理10 min，濾過，藥渣備用，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對照藥材0.5 g，加乙醚30 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為丹參對照藥材溶液。再取丹參酮ⅡA對照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。按處方比例及生產(chǎn)工藝制備缺丹參陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述4種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯(19∶1)[1]為展開劑，展開，取出，晾干，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，結(jié)果見圖1。

1.陰性對照品 2～4.供試品 5.丹參酮ⅡA對照品 6.丹參對照藥材圖1 丹參薄層色譜圖

2.1.2 五味子的鑒別 取2.1.1丹參鑒別項下的藥渣，揮干溶劑，加三氯甲烷70 mL，加熱回流30 min，濾過，藥渣備用，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取五味子對照藥材1 g，加三氯甲烷30 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。再取五味子甲素對照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含五味子甲素1 mg的溶液，作為對照品溶液。按處方比例及生產(chǎn)工藝制備缺五味子陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述4種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(30～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視[2-4]。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，結(jié)果見圖2。

1.陰性對照品 2～4.供試品 5.五味子甲素對照品 6.五味子對照藥材圖2 五味子薄層色譜圖

2.1.3 甘草的鑒別 取2.1.2五味子鑒別項下的藥渣，揮干溶劑，加甲醇70 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30 mL微熱使溶解，移至分液漏斗中，用乙酸乙酯50 mL提取，分取乙酸乙酯層，水層溶液備用，乙酸乙酯液蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取甘草對照藥材0.5 g，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 mL使溶解，移至分液漏斗中，用乙酸乙酯30 mL提取，分取乙酸乙酯層，蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。按處方比例及生產(chǎn)工藝制備缺甘草陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述3種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇(7∶3∶1)為展開劑[5-7]，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同顏色的斑點，紫外光下顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾，結(jié)果見圖3、4。

1.陰性對照品 2～4.供試品 5.甘草對照藥材圖3 甘草(日光)薄層色譜圖

1.陰性對照品 2～4.供試品 5.甘草對照藥材圖4 甘草(紫外光)薄層色譜圖

2.1.4 人參的鑒別 取2.1.3甘草鑒別項下的水層液，用水飽和正丁醇提取2次，每次50 mL，合并正丁醇液，用氨試液提取2次，每次30 mL，分取正丁醇層，蒸干，殘渣用乙醇5 mL使溶解，置中性氧化鋁柱(200～300目，5 g，內(nèi)徑1～1.5 cm)用40%乙醇50 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取人參對照藥材1 g，加水0.5 mL潤濕，加水飽和正丁醇15 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液用3倍量氨試液提取，分取正丁醇液，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。再取人參皂苷Rg1、Re對照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。按處方比例及生產(chǎn)工藝制備缺人參陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取對照品與對照藥材溶液各5 μL、供試品溶液10 μL、陰性對照溶液10 μL，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10 ℃以下放置下層溶液為展開劑[8-10]，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，結(jié)果見圖5。

1.人參對照藥材 2.人參皂苷Rg1、Re對照品 3～5.供試品 6.陰性對照圖5 人參薄層色譜圖

2.2 五味子醇甲的含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 采用Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；以乙腈-水(40∶60)為流動相[2-4，11]；流速：0.8 mL·min-1；柱溫：30 ℃；檢測波長：250 nm；進樣量：10 μL；理論板數(shù)為8 562。

2.2.2 對照品溶液的制備 取五味子醇甲對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL中含五味子醇甲25 μg的溶液，即得。HPLC圖見圖6。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品裝量差異項下內(nèi)容物，研細(xì)，取約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。HPLC圖見圖6。

2.2.4 陰性對照溶液的制備 按處方比例及生產(chǎn)工藝制備缺五味子陰性樣品，并按2.2.3供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。HPLC圖見圖6。

A.五味子醇甲對照品 B.供試品 C.陰性對照品圖6 舒神靈膠囊及對照品HPLC圖

2.2.5 線性關(guān)系考察 精密稱取五味子醇甲對照品9.95 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取1，2，5，10，15，20，25 μL測定，以對照品進樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=2 638 714X+181 1，r=0.999 9，結(jié)果表明五味子醇甲進樣量在0.040 7～0.366 5 μg呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)6次，記錄其色譜峰面積值，計算RSD=0.1%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液(吉林省輝南長龍藥業(yè)股份有限公司，批號：090401)，分別于0，7，14，21，28 h按上述色譜條件測定，計算RSD=0.8%。結(jié)果表明28 h內(nèi)供試品溶液中五味子醇甲的含量基本穩(wěn)定。

2.2.8 重復(fù)性試驗 取供試品(吉林省輝南長龍藥業(yè)股份有限公司，批號：090401)，按供試品溶液處理方法制備6份供試品溶液，進行測定，其平均含量為0.140 mg/粒，RSD=1.3%。表明重復(fù)性良好。

2.2.9 回收率試驗 精密稱取已知含量的供試品(吉林省輝南長龍藥業(yè)股份有限公司，批號：090401)0.5 g，精密加入五味子醇甲對照品溶液(0.039 8 mg·mL-1)5 mL，再精密加入甲醇15 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液即得。共處理6份，按上述色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 舒神靈膠囊中五味子醇甲回收率試驗

注：五味子醇甲對照品加入量均為0.199 0 mg

2.2.10 樣品測定結(jié)果 按上述方法測定6批樣品中的五味子醇甲含量，樣品的平均含量在0.14～0.16 mg/粒，結(jié)果見表2。建議質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定五味子醇甲含量不低于0.14 mg/粒。

表2 舒神靈膠囊中中五味子醇甲含量測定 mg/粒

3 討論

由于五味子鑒別和人參鑒別中陰性對照均有一定的干擾，故對照品溶液中未采用五味子乙素和人參皂苷Rb1對照品，且人參鑒別須用高效薄層板才可達(dá)到較好的分離效果。

取五味子醇甲對照品溶液，經(jīng)UV-2201紫外-可見分光光度計在220～300 nm的波長范圍內(nèi)進行掃描，確定五味子醇甲在254 nm波長處有最大吸收，參考《中國藥典》2010年版一部五味子藥材項下規(guī)定[2]，選擇250 nm為本實驗的測定波長。

參照《中國藥典》2010年版一部五味子藥材項下規(guī)定[2]的甲醇-水(65∶35)流動相，但本品用此流動相分離效果不好，后參考文獻(xiàn)[3-4，11]改為乙腈-水(60∶40)能很好分離，且不同品牌色譜柱耐用性良好。

供試品溶液分別超聲20，30，40 min；提取溶劑量分別為15，20，30 mL，計算五味子醇甲含量均為0.14 mg/粒。說明按上述方法配制供試品溶液完全能使樣品提取完全。

實驗建立的薄層色譜鑒別方法及五味子醇甲的含量測定方法，可以更好地控制舒神靈膠囊質(zhì)量，研究為舒神靈膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供了參考依據(jù)。

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QualityStandardforShushenlingCapsules

RUQiuming1*，CHUYunjie2

(1.JinlinProvicialInstituteforFoodandDrugControl，Changchun130033，China；2.AffiliatedHospitalofChangChunUniversityofTraditionalChineseMedicine，Changchun130021，China)

Objective：To establish quality standard for Shushenling Capsules.MethodsSalviae miltiorrhizae Radix et Rhizoma，Schisandrae chinensis Fructus，Glycyrrhizae Radix et Rhizoma，Ginseng Radix et Rhizoma were identified by TLC，and the content of schisandrin in Schisandrae chinensis Fructus was determined by HPLC.ResultsTLC could identify Salviae miltiorrhizae Radix et Rhizoma，Schisandrae chinensis Fructus，Glycyrrhizae Radix et Rhizoma，and Ginseng Radix et Rhizoma.schisandrin showed a good linear relationship at a range of 0.040 7～0.366 5 μg.The average recovery was 100.38%(n=6)，and RSD was 1.2%.ConclusionThe method is simple，accurate，high specificity，and with good repeatability.The method can be used for Shushenling Capsules quality control.

Shushenling Capsules；TLC；HPLC；Identification；Quality standard

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.02.013

2013-05-22)