鄧先清，宋明霞

厚樸果實(shí)中厚樸酚、和厚樸酚的提取工藝比較

*鄧先清，宋明霞

（井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江西，吉安 343009）

測(cè)定厚樸果實(shí)中厚樸酚、和厚樸酚的含量，并對(duì)厚樸果實(shí)中酚類成分的提取方法進(jìn)行探索和優(yōu)化，為厚樸果實(shí)入藥提供依據(jù)和參考。用醇提法、堿提法和超聲輔助提取法提取厚樸果實(shí)中的酚類成分，采用薄層掃描法測(cè)定其中的厚樸酚、和厚樸酚的含量；并采用控制單一變量法優(yōu)化乙醇提取工藝。厚樸果實(shí)中兩種酚的含量是厚樸皮的1/4左右，提示厚樸果實(shí)具有入藥的潛性；乙醇提取法的工藝優(yōu)化結(jié)果顯示最佳提取參數(shù)是60℃下、80%體積的乙醇提取三次（2 、1.5 、1 h）。醇提法、堿提法和超聲提取法對(duì)酚類物質(zhì)提取率沒有顯著影響，提示在選擇提取方法時(shí)我們可以根據(jù)實(shí)際情況和成本來(lái)選擇恰當(dāng)?shù)奶崛》椒ā?/p>

厚樸果實(shí)；厚樸酚；和厚樸酚；提取工藝

厚樸為木蘭科植物，其干皮被歷代草本列為常用中藥材，主要用于燥濕消痰、下氣除滿[1]。厚樸主要活性成分為厚樸酚及和厚樸酚[2]?，F(xiàn)在的藥理研究表明，厚樸酚及和厚樸酚具有抗菌、抗氧化、抗病毒、抗癌、抗炎鎮(zhèn)痛和抗焦慮等多種功效[3-9]。由于其廣泛的生物活性，許多中成藥和保健品種均使用了該原料，市場(chǎng)需求量很大[10]。但是由于厚樸生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，一般要生長(zhǎng)15 年以上才能伐樹剝皮供藥用。而且大量樹木的砍伐不僅違背了生態(tài)環(huán)境的需求，也導(dǎo)致了許多植物資源面臨瀕危[11]。因此，迫切需要尋找新的用藥部位來(lái)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的厚樸樹皮。早在《名醫(yī)別錄》中就有記載，厚樸或凹葉厚樸的果實(shí)或種子同樣具有溫中健胃、理氣消食之功效，且厚樸果實(shí)是每年再生的。因此研究厚樸果實(shí)中厚樸酚及和厚樸酚的含量及其提取工藝，對(duì)綜合利用厚樸藥用資源、緩解厚樸藥林矛盾等具有重要的意義。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料為取自江西井岡山30年樹齡的厚樸果實(shí)，曬干粉碎后待用。所用儀器：島津CS-930薄層掃描儀；定量毛細(xì)管(阿拉丁試劑公司)；PBQ-Ⅰ型薄層自動(dòng)鋪板器(重慶南岸實(shí)驗(yàn)電器廠)；硅膠GF254(青島海洋化工廠)。厚樸酚及和厚樸酚對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，純度99.0% 以上；其他試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 測(cè)定條件

1.2.1.1 薄層條件

薄層板為硅膠GF254與0.5% CMC-Na(1:3)濕法鋪板(厚0.5 mm)晾干，在105 ℃活化1 h，置干燥器中備用；展開劑為環(huán)己烷-醋酸乙酯-甲醇 (12:2:1)。厚樸酚、和厚樸酚斑點(diǎn)在紫外燈下檢視。

1.2.1.2掃描條件

采用雙波長(zhǎng)反射法鋸齒形掃描，掃描波長(zhǎng)λS= 294 nm，參比波長(zhǎng)λR= 362 nm.

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別將厚樸酚標(biāo)準(zhǔn)液3，4，5，6，8，10 μL點(diǎn)于同一薄層板上，飽和，展開，晾開，顯色后掃描，以峰面積積分值(Y)對(duì)點(diǎn)樣量(X，μg)作直線回歸，求得回歸方程為Y=1175.4X + 24.118，r = 0.998。同法求得和厚樸酚的回歸方程Y= Y=1544.1X - 5.0662，r = 0.999。

結(jié)果表明：兩組分在1~5 μg范圍內(nèi)與面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

1.2.3 乙醇提取法

取厚樸果實(shí)粉末各5 g，用60%乙醇在60 ℃下提取3次(50 mL*3)，提取時(shí)間分別為2、1.5、1 h。分別合并提取液并濃縮成浸膏，用甲醇定容。取樣，甲醇稀釋5倍后用CS-9301pc薄層掃描儀測(cè)定厚樸酚、和厚樸酚含量。同條件下測(cè)定了厚樸皮中的厚樸酚、和厚樸酚含量，并進(jìn)行比較。

由于乙醇提取法在厚樸的酚類提取中是最常見的，因此我們對(duì)該方法進(jìn)行了深入研究。通過(guò)單因素試驗(yàn)研究乙醇濃度、提取溫度、提取次數(shù)對(duì)厚樸酚、和厚樸酚提取率的影響，確定較顯著的影響因素和最佳的提取工藝參數(shù)。(1)乙醇濃度對(duì)厚樸酚、和厚樸酚提取率的影響試驗(yàn)設(shè)40%、60%、80% 3 個(gè)水平；(2)提取溫度對(duì)厚樸酚、和厚樸酚的提取率的影響試驗(yàn)設(shè)40、60、80攝氏度3 個(gè)水平；(3)提取次數(shù)對(duì)厚樸酚、和厚樸酚的提取率的影響試驗(yàn)設(shè)2次(2 h和1.5 h)、3次(2、1.5和1 h)、4次 (2、1.5、1 h和1 h)3個(gè)水平。

1.2.4 堿液提取法

取果實(shí)粉末5 g，用 1%NaOH溶液回流提取2次（50 mL*2，每次1 h）。合并提取液后加6 N鹽酸調(diào)ph至2.5，用氯仿萃取（30 mL*3），合并氯仿層濃縮得浸膏，用甲醇溶解定容。取樣，甲醇稀釋5倍后用CS-9301pc薄層掃描儀測(cè)定厚樸酚、和厚樸酚含量。

1.2.5 超聲提取法

取果實(shí)粉末5 g，用60%的乙醇在60 ℃下超聲提取2次（50 mL*2，每次1 h）。合并提取液并濃縮成浸膏，用甲醇定容。取樣，甲醇稀釋5倍后用CS-9301 pc薄層掃描儀測(cè)定厚樸酚、和厚樸酚含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 乙醇提取法

首先通過(guò)查閱相關(guān)文獻(xiàn)[12]，基于厚樸皮中的酚類提取常用工藝（60 % 乙醇在60 ℃下提取3次），同一條件下對(duì)厚樸皮和厚樸果實(shí)中的酚類成分含量進(jìn)行了測(cè)定。測(cè)定結(jié)果顯示：皮中的厚樸酚、和厚樸酚得率分別為30.870 mg/g和21.229 mg/g；果實(shí)中的厚樸酚、和厚樸酚得率分別為7.796mg/g和5.040mg/g。厚樸果實(shí)中的酚類物質(zhì)含量大約是厚樸皮中的1/4，由于果實(shí)是每年可再生資源，因而其具有替代厚樸皮入藥的潛能。

為了進(jìn)一步確定乙醇提取厚樸果實(shí)中酚類成分的最佳提取參數(shù)，采用單因素試驗(yàn)法分別考察了乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度和提取次數(shù)對(duì)提取率的影響。

圖1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)提取率的影響

由圖1可知，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)從40 % 增加到60 %時(shí)，厚樸酚、和厚樸酚以及總酚的提取得率隨之增加；60 % 乙醇提取厚樸酚、和厚樸酚得率分別為7.796 mg/g 和5.04 mg/g；當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)增大到80 %時(shí)，厚樸酚、和厚樸酚以及總酚的提取得率反而下降?？梢娂訜崽崛『駱惴宇悤r(shí)60 %的乙醇體積分?jǐn)?shù)較為適宜。由于厚樸酚、和厚樸酚易溶于有機(jī)溶劑，因而故隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加其得率明顯增加，但乙醇體積分?jǐn)?shù)過(guò)高時(shí)，可能影響了溶劑對(duì)藥材的滲透作用，從而降低了提取得率。

圖2 溫度對(duì)提取率的影響

隨后測(cè)定了不同提取溫度下厚樸酚、和厚樸酚的提取效率，結(jié)果如圖2 所示，溫度對(duì)厚樸果實(shí)中厚樸酚、和厚樸酚的提取率也有著明顯影響，當(dāng)溫度為60 ℃時(shí)，提取得率最高。對(duì)于大都數(shù)天然產(chǎn)物的有效成分來(lái)說(shuō)，隨著提取溫度的升高，提取效率都會(huì)增加。但對(duì)于一些性質(zhì)不太穩(wěn)定的成分來(lái)說(shuō)，當(dāng)溫度升高到一定值時(shí)，由于其分解，變質(zhì)等影響，會(huì)導(dǎo)致其提取得率降低。厚樸酚、和厚樸酚兩個(gè)化合物中都含有烯鍵和酚羥基，容易發(fā)生加成反應(yīng)和氧化反應(yīng)，因而提取溫度不能太高。本實(shí)驗(yàn)中60 ℃下的提取，總酚得率最高。

圖3 提取次數(shù)對(duì)提取率的影響

在確定了乙醇提取的體積分?jǐn)?shù)、提取溫度后，還測(cè)定了不同提取次數(shù)下厚樸酚、和厚樸酚的提取效率，以確定最佳的提取次數(shù)，保證在盡可能取得最大得率的前提下，降低提取的次數(shù)節(jié)約提取成本。如圖3 所示，隨著提取次數(shù)的增加，厚樸酚、和厚樸酚的含量也隨之提高，提取3 次時(shí)，酚類基本提取完全。提取4次的得率與3次相比沒有明顯變化，因而綜合考慮認(rèn)為提取3次較為適宜。

綜合單因素試驗(yàn)法的結(jié)果，可以得出（在本實(shí)驗(yàn)條件下）乙醇提取法提取厚樸果實(shí)中厚樸酚、和厚樸酚的最佳工藝是：60 ℃、60 %乙醇回流3次（2、1.5、1 h）。

2.2 堿液提取法及超聲提取法

由于厚樸酚、和厚樸酚分子中含有酚羥基，因而可以使用堿性水溶液進(jìn)行提取。酚性成分與堿成鹽后溶解在水溶液中，然后通過(guò)加酸使其游離出來(lái)。由于厚樸果實(shí)中含有一些較多的油脂類物質(zhì)，使得加酸后析出的酚類還帶有其他粘稠的雜質(zhì)，無(wú)法直接通過(guò)抽濾的方式得到粗品。最后采用氯仿萃取得到總酚，再進(jìn)行厚樸酚、和厚樸酚的含量測(cè)定。測(cè)定結(jié)果厚樸酚的得率為5.662 mg/g；和厚樸酚得率為3.3 4 mg/g。

近年來(lái)超聲提取法較多應(yīng)用于各種有效成分的輔助提取。本實(shí)驗(yàn)嘗試了應(yīng)用該方法進(jìn)行厚樸果實(shí)中酚類成分的提取。結(jié)果顯示厚樸酚的得率為5.645 mg/g；和厚樸酚得率為3.636 mg/g。

為了更好的分析各種提取方法的提取得率，我們將乙醇提取法、堿液提取法和超聲提取法3種方法在類似條件下的提取率進(jìn)行了比較（提取次數(shù)均為兩次）。如圖4所示，3種方法的提取率相差不大。

圖4 乙醇提取法、堿液提取法和超聲提取法的酚類提取率比較

3 討論

本研究采用了雙波長(zhǎng)薄層掃描法來(lái)進(jìn)行含量測(cè)定。近年來(lái)，由于高效液相及氣相色譜的廣泛使用使得薄層方法已經(jīng)應(yīng)用的越來(lái)越少了。但由于其測(cè)定速度快、檢測(cè)范圍廣、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，使得它并不是完全可以由HPLC代替掉。薄層法中的展開劑的創(chuàng)造性設(shè)計(jì)和色譜的完整性也是HPLC所不具備的優(yōu)勢(shì)[15]。本研究應(yīng)用薄層法，除了方便性的特點(diǎn)外，含量的比較性研究不需要太高的準(zhǔn)確性，也是主要原因之一。而且，雙波長(zhǎng)掃描法相比于傳統(tǒng)薄層掃描，消除了由于薄層厚度局部不均所引起的基線波動(dòng)、由被展開斑點(diǎn)不規(guī)則形狀所引起的測(cè)量誤差以及薄板背景污染的影響，進(jìn)一步提高了測(cè)量的準(zhǔn)確度[16]。

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Comparative Study of Different Extraction Techniques for Extraction of Magnolol and Honokiol from fruits of Magnolia officinalis

*DENG Xian-qing，SONG Ming-xia

（School of Medicine, Jinggangshan University, Ji’an, Jiangxi 343009, China）

：To determine the content of Magnolol and Honokiol from fruits of, and optimize the methods of extraction for Magnolol and Honokiol from fruits of.：Alcohol-reflux extraction, alkali extraction and ultrasonic-assisted extraction were compared for extraction of magnolol and honokiol from fruits of, in which alcohol-reflux extraction were optimized by single factor test. The content of magnolol and honokiol was determined using TLC scanning method.：The content of Magnolol and Honokiol in fruits of Magnolia officinal is a quarter of that in bark of, which indicated that the fruits ofcan be used as medicine. The optimal parameters in the alcohol-reflux extraction in our study is: temperature 60oC, 80% alcohol (v/v), three times of extraction (2, 1.5, 1 h).: Alcohol-reflux extraction, alkali extraction and ultrasonic-assisted extraction have the similar extraction efficiency, which suggested that we can choose the proper extraction method depend on situation.

fruits of; magnolol; honokiol; extraction technology

R284. 2

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2014.06.018

1674-8085(2014)06-0084-04

2014-08-12；

2014-10-08

國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目子項(xiàng)目(2012BAC11B02-6)

*鄧先清(1984-)，男，湖南衡陽(yáng)人，講師，博士，主要從事藥物化學(xué)專業(yè)研究(E-mail:dengxianqing1121@126.com);

宋明霞(1983-)，女，山西介休人，講師，博士，主要從事藥物化學(xué)專業(yè)研究(E-mail:freexiaoxiao83@aliyun.com).