董希光　王超　張偉　于爽　孫晶

[摘要] 目的 對(duì)比研究血竭超微細(xì)粉和普通細(xì)粉在六白白疕巴布劑中主要藥效成分血竭素的體外透皮釋藥情況，為該巴布劑制備工藝研究提供參考依據(jù)。 方法 使用藥物透皮擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)儀，以色譜柱為Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）、流動(dòng)相為乙腈-磷酸二氫鈉溶液（0.05 mol/L）（50∶50）、檢測(cè)波長(zhǎng)440 nm、柱溫40℃、流速1 mL/min的高效液相色譜法（HPLC）色譜條件，檢測(cè)兩種巴布劑樣品中血竭素12 h內(nèi)透過(guò)離體兔皮釋藥情況。 結(jié)果 HPLC檢測(cè)方法顯示血竭素峰分離效果良好，穩(wěn)定性、精密度和加樣回收試驗(yàn)的RSD分別為1.14%、0.92%、0.89%，符合含量測(cè)定要求；兩種樣品巴布劑1～2 h內(nèi)均為快速透皮釋藥階段，2～12 h為平穩(wěn)緩慢透皮釋藥階段。其中超細(xì)粉樣品巴布劑2、4、12 h內(nèi)血竭素累積透皮釋藥率分別為29.12%、38.60%和59.36%，而普通細(xì)粉樣品巴布劑在同一時(shí)間段僅為16.74%、21.77%和44.28%。在考察的12 h內(nèi)，超微細(xì)粉樣品巴布劑血竭素累積透皮釋藥率高于普通細(xì)粉樣品巴布劑15%左右。 結(jié)論 本含量測(cè)定方法良好，以血竭藥物超微細(xì)粉作為該巴布劑的填充劑，血竭素體外透皮釋藥效果明顯優(yōu)于以普通細(xì)粉作為巴布劑填充劑的樣品巴布劑。

[關(guān)鍵詞] 超微細(xì)粉；普通細(xì)粉；血竭素；高效液相色譜法；含量測(cè)定；透皮釋藥

[中圖分類(lèi)號(hào)] R285.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2014）09（b）-0004-05

六白白疕巴布劑是以山東省青島市海慈醫(yī)療集團(tuán)制劑實(shí)驗(yàn)室（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“我室”）中藥制劑六白膏進(jìn)行劑型改革，研制而成的一種新型外用中藥巴布制劑。前期曾就組方藥物提取和主要藥效成分甘草酸體外離體兔皮透皮釋藥進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究[1-2]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)六白白疕巴布劑組方藥物的另一種主要藥物血竭制成超微細(xì)粉和普通細(xì)粉兩種粉體樣品巴布劑中血竭素不同時(shí)段的離體兔皮體外透皮釋藥情況進(jìn)行對(duì)比研究，為該巴布劑制備工藝提供試驗(yàn)參數(shù)。現(xiàn)報(bào)道如下：

1 儀器與材料

RYJ-6B型藥物透皮擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)儀（上海），安捷倫1100高效液相色譜系統(tǒng)（美國(guó)Agilen公司）；DJ-10A電動(dòng)粉碎機(jī)（上海）；WKZ-10型超微粉碎破壁機(jī)（濰坊產(chǎn)）；Rise-2002型激光粒度分析儀（濟(jì)南）。

血竭素高氯酸鹽對(duì)照品（含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110811-200704，）；乙腈（色譜純，天津凱信化學(xué)試劑公司）；水為重蒸水；其他試劑均為分析純。

健康白色家兔，體重（1.85±0.16）kg（市售）；藥材取自我室中藥房。經(jīng)青島市藥檢所中藥科吳愛(ài)英主任藥師鑒定為麒麟竭Daemonorops draco Bl.樹(shù)脂加工品。巴布劑樣品由我室制備。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品巴布劑制備

按不含血竭的處方比例取白鮮皮、甘草等藥材飲片225 g，用50%乙醇制成醇提水沉液200 mL，分別用提取液100、40、60 mL，將阿拉伯膠30 g、聚乙烯醇10 g、西黃耆膠20 g進(jìn)行浸泡，水浴加熱使其溶脹，分別制成透明膠狀液；另將將甘油20 mL、平均粒徑25 μm血竭超微細(xì)粉3 g加到乳缽中研勻；再將阿拉伯膠透明膠狀液、西黃耆膠透明膠狀液、聚乙烯醇透明膠狀液依次倒入乳缽中研勻，待稍冷，趁溫時(shí)均勻涂布于無(wú)紡布上，厚度約為0.70 mm，置40℃烘箱下烘0.5 h，蓋上防粘層，制成每克含血竭30 mg的超微細(xì)粉樣品巴布劑。

另取平均粒徑為120 μm的普通細(xì)粉，按上述相同方法制成每克含血竭30 mg的普通細(xì)粉樣品巴布劑。

2.2 血竭素含量測(cè)定方法

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-磷酸二氫鈉溶液（0.05 mol/L）（50∶50）；檢測(cè)波長(zhǎng)為440 nm；柱溫為40℃；流速為1 mL/min；進(jìn)樣量為10 μL。理論板數(shù)按血竭素峰計(jì)算不低于4000。

2.2.2 對(duì)照品儲(chǔ)備液制備 精密稱(chēng)取血竭素高氯酸鹽對(duì)照品0.9615 mg，置于10 mL容量瓶中，加入3%磷酸甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為96.15 μg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.3 供試品溶液制備 揭取樣品巴布劑膏體約2 g，剪碎，精密稱(chēng)重，置具塞錐瓶中，加入20 mL氨試液將膏體浸潤(rùn)、溶脹、堿化，三氯甲烷密塞振搖提取2次，每次用量10 mL，每次提取時(shí)間3 min。合并三氯甲烷提取液，并用三氯甲烷定容至50.0 mL。取提取液5.0 mL，揮干，殘?jiān)?.3%磷酸甲醇溶液溶解定容至5.0 mL，搖勻，微孔濾膜（0.45 μm）過(guò)濾，取續(xù)濾液，即為供試品溶液。

2.2.4 陰性對(duì)照品溶液制備 照處方比例和制備工藝制備不含血竭的陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果表明陰性對(duì)照溶液對(duì)血竭素測(cè)定無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖1～3。

2.2.5 線性關(guān)系考察 分別精密量取濃度為96.15 μg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入3%磷酸甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別制成濃度為1.923、3.846、7.692、11.538、15.384、19.230 μg/mL的對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，測(cè)定峰面積。以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=2.2651×104X+2.8973×103（r=0.9974）。結(jié)果表明，血竭素進(jìn)樣濃度在1.923～19.23 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液（批號(hào)：090612），分別在0、1、2、4、6 h分別精密吸取10 μL，依法測(cè)定峰面積積分值RSD為1.14%，表明供試品溶液在室溫下放置6 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取濃度為7.692 μg/mL的對(duì)照品溶液10 μL，依法連續(xù)測(cè)定5次，峰面積積值RSD為0.92%。說(shuō)明儀器精密度較好。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取5份已知含量濃度為9.22 μg/mL的同一批樣品巴布劑溶液（批號(hào)：090612）0.5 mL，加到1.0 mL的容量瓶中，分別精密加入7.692 μg/mL對(duì)照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4 mL，0.3%磷酸甲醇溶液定容，混勻后按“2.1”項(xiàng)下色譜條件依法測(cè)定、計(jì)算回收率。平均加樣回收率分別為97.846%，RSD為0.89%（n=5）。加樣回收率試驗(yàn)表明，所建方法加樣回收率高，符合含量測(cè)定的要求。結(jié)果見(jiàn)表1。

結(jié)果表明，在選定的色譜條件下，采用適量氨試液浸潤(rùn)、溶脹巴布劑膏體，并堿化解離組方藥物中的血竭素甘草酸，再用三氯甲烷提取血竭素，目標(biāo)成分分離度高，穩(wěn)定性好，儀器精密度和加樣回收率高，其他成分無(wú)干擾，含量測(cè)定準(zhǔn)確性，可以作為六白白疕巴布劑血竭素含量測(cè)定方法。

2.3 血竭素提取方法考察

2.3.1正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn) 由于六白白疕巴布劑組方藥物中的甘草所含甘草酸，易與血竭素形成鹽，影響血竭素在三氯甲烷提取液中轉(zhuǎn)溶。實(shí)驗(yàn)用適量氨試液浸潤(rùn)溶解巴布膏膏體，同時(shí)堿化、游離血竭素的甘草酸鹽，以提高血竭素在三氯甲烷等溶劑中的提取轉(zhuǎn)移率。在單因素考察的基礎(chǔ)上，用20 mL氨試液將約2 g巴布劑膏體浸潤(rùn)并解離血竭素甘草酸鹽，對(duì)三氯甲烷的提取次數(shù)（A）、溶劑用量（B）和提取時(shí)間（C）三個(gè)因素及三個(gè)因素的交互作用進(jìn)行L8（27）試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)。試驗(yàn)方案及實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。

2.3.2 影響因素正交分析 直觀分析表明，因素影響大小順序?yàn)锽>C>A，最佳工藝為A2B2C2；方差分析顯示提取次數(shù)（A）、溶劑用量（B）和提取時(shí)間（C）三個(gè)因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01），而三個(gè)因素間的交互作用對(duì)試驗(yàn)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)最佳工藝A2B2C2（即試驗(yàn)8）的殘留膏體測(cè)定血竭素成分，結(jié)果未能檢測(cè)出血竭素成分，表明此法血竭素基本提取完整，可以作為樣品含量測(cè)定的提取檢測(cè)方法，即約2 g膏體量，用20 mL氨試液浸潤(rùn)、溶解、堿化，三氯甲烷密塞振搖提取2次，每次用量15 mL，每次提取時(shí)間為3 min。

2.3.3 樣品巴布劑含量測(cè)定 取超微粉樣品巴布劑三批樣品，批號(hào)分別為20130618、20130622、20130627，按“2.3”項(xiàng)下優(yōu)化方案及“2.2.3”項(xiàng)下制備方法，即約2 g膏體量，用20 mL氨試液浸潤(rùn)、溶解、堿化，三氯甲烷密塞振搖提取2次，每次用量15 mL，每次提取時(shí)間3 min。合并三氯甲烷提取液，并用三氯甲烷定容至50.0 mL。取提取液5.0 mL，揮干，殘?jiān)?.3%磷酸甲醇溶液溶解定容至5.0 mL，搖勻，微孔濾膜（0.45 μm）過(guò)濾，取續(xù)濾液，測(cè)定血竭素含量，每批樣品重復(fù)測(cè)定3 次。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。三批樣品3次測(cè)定的RSD分別為1.34%、0.59%和0.40%，表明重復(fù)性好；三批樣品三次測(cè)定均值的RSD為0.81%。同法測(cè)定普通粉樣品巴布劑三次樣品（批號(hào)分別為20130708、20130716、20130724）血竭素平均含量。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5。三批樣品3次測(cè)定的RSD分別為0.52%、0.42%和0.45%，表明重復(fù)性好；三批樣品均值的RSD為0.36%。

2.4 透皮釋藥實(shí)驗(yàn)

2.4.1 離體兔皮的制備 將健康白色家兔腹部皮毛用脫毛劑脫毛，靜養(yǎng)24 h后處死，剝?nèi)「共科つw，除盡皮下黏膜及脂肪組織，用生理鹽水洗凈，置生理鹽水中低溫冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

2.4.2 兔皮安裝 將兔皮固定于樣品室與接受室之間， 接受池中加入（37±1）℃保溫的生理鹽（釋藥接受液），真皮一側(cè)與接受液充分接觸，排凈空氣；給藥室兔皮角質(zhì)層一側(cè)用吸水濾紙吸干水；開(kāi)動(dòng)電磁攪拌器保持恒速攪拌（約200 r/min），維持接受池的動(dòng)態(tài)環(huán)境。

2.4.3 釋藥液制備 取巴布劑樣品，剪成直徑2 cm左右的圓形小塊，揭去防粘層，連帶背襯布精密稱(chēng)重，貼敷于兔皮角質(zhì)層并上夾固定，分別于0.5、1、2、4、8、12、16、24 h共8個(gè)時(shí)間段從接受池側(cè)口中精密吸取0.05 mL釋藥液，揮干后用3%磷酸甲醇0.5 mL溶解，移至1 mL容量瓶中，再加入濃度為96.15 μg/mL對(duì)照品儲(chǔ)備液0.4 mL，加3%磷酸甲醇溶液定容至1.0 mL，混勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，制成釋藥液。每次取樣后立即從接受池側(cè)口補(bǔ)加生理鹽水，排凈接受池氣泡后繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將帶膏背襯布清水洗凈膏體，背襯布干燥稱(chēng)重。折算樣品膏體血竭素含量（mg/g）。依法對(duì)兩種樣品的各3個(gè)批次進(jìn)行試驗(yàn)。

2.4.4 累積釋藥量測(cè)定 將釋藥液按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定血竭素含量。每一時(shí)段釋藥液共測(cè)3次，取平均值。按不同時(shí)段累積釋藥量（μg）=[實(shí)際測(cè)定值濃度-外加血竭素濃度（96.15 μg/mL×0.4 mL）]/釋藥液吸取量（0.05 mL）×接受池容量（mL），累積釋藥率（%）=累積釋藥量（μg）/[樣品巴布劑凈重（g）×每克樣品巴布劑血竭素含量（μg/g）]×100%，并與相應(yīng)樣品膏體血竭素含量進(jìn)行比較，計(jì)算不同時(shí)段相應(yīng)樣品血竭素釋藥率。

2.4.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 三批次超微粉樣品巴布劑（批號(hào)：20130618、20130622、20130627）在0.5、1、2、4、8、12、16、24 h釋藥率3次測(cè)定平均值依次為7.24%、18.67%、29.12%、38.60%、49.34%、53.88%、57.17%、59.36%，而三批次普通粉樣品巴布劑（批號(hào)：20140708、20140716、20140724）在相同時(shí)段釋藥率三次測(cè)定平均值依次為1.27%、5.84%、16.73%、21.77%、29.29%、34.82%、38.93%、44.28%。以釋藥率為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)做曲線圖，結(jié)果見(jiàn)圖4。

從累積透皮釋藥曲線分析，兩種樣品巴布劑1～2 h內(nèi)均為快速透皮釋藥階段，2～12 h為平穩(wěn)緩慢透皮釋藥過(guò)程，其中超細(xì)粉樣品巴布劑2 h和4 h內(nèi)血竭素累積透皮釋藥率與普通粉樣品巴布劑6 h和10 h內(nèi)相當(dāng)，12 h內(nèi)累積透皮釋藥率超微細(xì)粉樣品巴布劑高于普通細(xì)粉樣品巴布劑15%左右。超微粉樣品巴布劑均明顯優(yōu)于普通粉樣品巴布劑。

3 討論

3.1 關(guān)于流動(dòng)相的選擇

按照《中國(guó)藥典》2010年版中血竭素的的含量測(cè)定方法進(jìn)行操作，參考有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，比較了乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（35∶65、40∶60、45∶55、50∶50）多種不同配比[3-8]，結(jié)果乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（50∶50）作為流動(dòng)相時(shí)能夠?qū)⒀咚嘏c雜質(zhì)峰完全分離，出峰時(shí)間適當(dāng)，峰形好。

3.2 關(guān)于血竭素定容方法

血竭素為色原酮類(lèi)化合物，性質(zhì)不穩(wěn)定，見(jiàn)光易分解，溶液放置顏色會(huì)逐漸加深。因此待測(cè)樣品溶液制備后立即置棕色量瓶中，用3%磷酸甲醇替代《中國(guó)藥典》2010年版中的甲醇進(jìn)行定容，使樣品中的血竭素形成血竭素的磷酸鹽，增強(qiáng)其穩(wěn)定性[9-10]。穩(wěn)定性試驗(yàn)考察結(jié)果表明，同一供試品溶液在0、1、2、4、6 h時(shí)峰面積積分值RSD為1.14%，表明血竭素的磷酸鹽在甲醇溶液中6 h內(nèi)室溫下放置是穩(wěn)定的。

3.3 關(guān)于供試品溶液制備

巴布膏劑含量測(cè)定難點(diǎn)在于排除基質(zhì)的干擾，同時(shí)最大限度提取轉(zhuǎn)移目標(biāo)成分。由于六白白疕巴布劑組方藥物中的甘草所含甘草酸易與血竭素形成鹽，影響血竭素在脂溶性溶劑中的溶解和轉(zhuǎn)移。參考文獻(xiàn)報(bào)道[11]，對(duì)供試品溶液提取檢測(cè)方法進(jìn)行考察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，一定量氨試液既可浸潤(rùn)溶解巴布膏膏體，同時(shí)又能堿化、游離血竭素的甘草酸鹽，減少其他水溶性成分和基質(zhì)的影響。提高血竭素在三氯甲烷等溶劑中的提取轉(zhuǎn)移率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用膏體10倍的氨試液先浸潤(rùn)溶脹巴布膏體，使血竭素甘草酸鹽在堿性環(huán)境下游離，再用三氯甲烷提取，可以增加血竭素在三氯甲烷相中的溶解轉(zhuǎn)溶，殘留膏體未能檢測(cè)出血竭素成分。表明此法可以基本提取轉(zhuǎn)溶血竭素成分，含量測(cè)定精確性高。

3.4 關(guān)于超微粉碎

中藥材超微粉碎后，可使大部分藥材細(xì)胞壁膜破裂，有效成分不必經(jīng)過(guò)壁、膜的釋放過(guò)程，直接暴露在外，有利于提高有效成分的溶出和透皮吸收效果[12-18]；在外用貼膏劑中，由于超微細(xì)粉的粒徑小，一方面易于從基質(zhì)材料中滲透出來(lái)，另一方面填充在基質(zhì)中可以減少基質(zhì)之間的相互作用力，有利于成分釋放，提高釋藥速率[13]。本項(xiàng)研究中，血竭作為組方中的貴重藥，在巴布劑劑型研究中替代硅藻土等用作填充劑，可以提高巴布劑藥物成分相對(duì)比例。本研究結(jié)果表明，以血竭素不同時(shí)段體外透皮釋藥量為指標(biāo)，超微細(xì)粉明顯優(yōu)于普通細(xì)粉，與有關(guān)研究報(bào)道等[13-18]研究結(jié)論基本一致，為中藥以超微粉作為填充劑的外用貼膏劑制劑研究提供了一個(gè)新的思路。

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[14] 卓丹如，闕慧卿，章寧，等.不同粉碎度野生西洋參人參皂苷Rb1的體外溶出度研究[J].藥物評(píng)價(jià)研究，2013， 36（5）：374-376.

[15] 張海英，趙泳波.丹參超微粉碎前后丹參酮ⅡA的溶出行為比較[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2013，30（5）：2335-2338.

[16] 熊慧，郭舟，趙靜文.梔子超微粉與細(xì)粉中梔子苷的體外溶出度比較[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（21）：53-55.

[17] 劉莉，劉強(qiáng)，鐘海巖.丁香普通粉與超微粉中丁香酚的含量及對(duì)小鼠腸運(yùn)動(dòng)作用的研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（8）：128.

[18] 俞忠明，戴詩(shī)文，壽旦，等.超微粉碎工藝對(duì)血竭透皮吸收的影響研究[J].浙江中醫(yī)雜志，2008，43（6）：359-360.

（收稿日期：2014-05-24 本文編輯：衛(wèi) 軻）

從累積透皮釋藥曲線分析，兩種樣品巴布劑1～2 h內(nèi)均為快速透皮釋藥階段，2～12 h為平穩(wěn)緩慢透皮釋藥過(guò)程，其中超細(xì)粉樣品巴布劑2 h和4 h內(nèi)血竭素累積透皮釋藥率與普通粉樣品巴布劑6 h和10 h內(nèi)相當(dāng)，12 h內(nèi)累積透皮釋藥率超微細(xì)粉樣品巴布劑高于普通細(xì)粉樣品巴布劑15%左右。超微粉樣品巴布劑均明顯優(yōu)于普通粉樣品巴布劑。

3 討論

3.1 關(guān)于流動(dòng)相的選擇

按照《中國(guó)藥典》2010年版中血竭素的的含量測(cè)定方法進(jìn)行操作，參考有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，比較了乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（35∶65、40∶60、45∶55、50∶50）多種不同配比[3-8]，結(jié)果乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（50∶50）作為流動(dòng)相時(shí)能夠?qū)⒀咚嘏c雜質(zhì)峰完全分離，出峰時(shí)間適當(dāng)，峰形好。

3.2 關(guān)于血竭素定容方法

血竭素為色原酮類(lèi)化合物，性質(zhì)不穩(wěn)定，見(jiàn)光易分解，溶液放置顏色會(huì)逐漸加深。因此待測(cè)樣品溶液制備后立即置棕色量瓶中，用3%磷酸甲醇替代《中國(guó)藥典》2010年版中的甲醇進(jìn)行定容，使樣品中的血竭素形成血竭素的磷酸鹽，增強(qiáng)其穩(wěn)定性[9-10]。穩(wěn)定性試驗(yàn)考察結(jié)果表明，同一供試品溶液在0、1、2、4、6 h時(shí)峰面積積分值RSD為1.14%，表明血竭素的磷酸鹽在甲醇溶液中6 h內(nèi)室溫下放置是穩(wěn)定的。

3.3 關(guān)于供試品溶液制備

巴布膏劑含量測(cè)定難點(diǎn)在于排除基質(zhì)的干擾，同時(shí)最大限度提取轉(zhuǎn)移目標(biāo)成分。由于六白白疕巴布劑組方藥物中的甘草所含甘草酸易與血竭素形成鹽，影響血竭素在脂溶性溶劑中的溶解和轉(zhuǎn)移。參考文獻(xiàn)報(bào)道[11]，對(duì)供試品溶液提取檢測(cè)方法進(jìn)行考察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，一定量氨試液既可浸潤(rùn)溶解巴布膏膏體，同時(shí)又能堿化、游離血竭素的甘草酸鹽，減少其他水溶性成分和基質(zhì)的影響。提高血竭素在三氯甲烷等溶劑中的提取轉(zhuǎn)移率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用膏體10倍的氨試液先浸潤(rùn)溶脹巴布膏體，使血竭素甘草酸鹽在堿性環(huán)境下游離，再用三氯甲烷提取，可以增加血竭素在三氯甲烷相中的溶解轉(zhuǎn)溶，殘留膏體未能檢測(cè)出血竭素成分。表明此法可以基本提取轉(zhuǎn)溶血竭素成分，含量測(cè)定精確性高。

3.4 關(guān)于超微粉碎

中藥材超微粉碎后，可使大部分藥材細(xì)胞壁膜破裂，有效成分不必經(jīng)過(guò)壁、膜的釋放過(guò)程，直接暴露在外，有利于提高有效成分的溶出和透皮吸收效果[12-18]；在外用貼膏劑中，由于超微細(xì)粉的粒徑小，一方面易于從基質(zhì)材料中滲透出來(lái)，另一方面填充在基質(zhì)中可以減少基質(zhì)之間的相互作用力，有利于成分釋放，提高釋藥速率[13]。本項(xiàng)研究中，血竭作為組方中的貴重藥，在巴布劑劑型研究中替代硅藻土等用作填充劑，可以提高巴布劑藥物成分相對(duì)比例。本研究結(jié)果表明，以血竭素不同時(shí)段體外透皮釋藥量為指標(biāo)，超微細(xì)粉明顯優(yōu)于普通細(xì)粉，與有關(guān)研究報(bào)道等[13-18]研究結(jié)論基本一致，為中藥以超微粉作為填充劑的外用貼膏劑制劑研究提供了一個(gè)新的思路。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 張偉，張?jiān)汽?，楊一丁，?六白白疕巴布劑藥物提取正交實(shí)驗(yàn)研究[J].齊魯藥事，2010，29（11）：645-646.

[2] 張偉，高文勇，張?jiān)汽?，?六白白疕巴布劑經(jīng)皮吸收研究[J].齊魯藥事，2010，29（12）：710-711.

[3] 李小曲.HPLC法測(cè)定骨傷跌打止痛膠囊中血竭素的含量[J].中國(guó)藥師，2014，17（2）：343-345.

[4] 劉長(zhǎng)龍，高鵬.提取溶劑酸度對(duì)血竭及玉紅生肌凝膠中血竭素含量的影響[J].遼寧中醫(yī)雜志，2013，40（3）：520-522.

[5] 湯小燕，陳越，李炯.HPLC測(cè)定神農(nóng)鎮(zhèn)痛膏中血竭素的含量[J].中國(guó)執(zhí)業(yè)藥師，2014，（4）：14-16.

[6] 李長(zhǎng)達(dá).安陽(yáng)固本膏中血竭素的HPLC含量測(cè)定[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2012，6（19）：119-120.

[7] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：133.

[8] 楊瑞瑞，李雪，喬蓉霞，等.展筋活血散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2013，14（4）：251-255.

[9] 胡世強(qiáng)，張偉.《中國(guó)藥典》2010年版血竭中血竭素含量測(cè)定提取方法的改進(jìn)[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2013，14（1）：36-37.

[10] 陳振振，張靈英，李莉，等.HPLC法測(cè)定創(chuàng)傷愈合藥噴霧劑中血竭素的含量[J].中國(guó)獸藥雜志，2012，46（10）：24-26，35.

[11] 陳佳，孫磊，金紅宇，等.HPLC法測(cè)定薄荷護(hù)表膏中血竭素的含量[J].中國(guó)藥事，2011，25（3）：271-272.

[12] 鹿麗麗，蕭偉，徐連明，等.不同粒徑龍血竭粉的物理性質(zhì)及體外溶出度比較[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（10）：14-16.

[13] 胡琴，孫娥，張振海.不同粒徑血竭粉體對(duì)ZJHX橡膠膏透皮吸收和黏附性的影響[J].中國(guó)中藥雜志，2012，37（23）：3549-3552.

[14] 卓丹如，闕慧卿，章寧，等.不同粉碎度野生西洋參人參皂苷Rb1的體外溶出度研究[J].藥物評(píng)價(jià)研究，2013， 36（5）：374-376.

[15] 張海英，趙泳波.丹參超微粉碎前后丹參酮ⅡA的溶出行為比較[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2013，30（5）：2335-2338.

[16] 熊慧，郭舟，趙靜文.梔子超微粉與細(xì)粉中梔子苷的體外溶出度比較[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（21）：53-55.

[17] 劉莉，劉強(qiáng)，鐘海巖.丁香普通粉與超微粉中丁香酚的含量及對(duì)小鼠腸運(yùn)動(dòng)作用的研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（8）：128.

[18] 俞忠明，戴詩(shī)文，壽旦，等.超微粉碎工藝對(duì)血竭透皮吸收的影響研究[J].浙江中醫(yī)雜志，2008，43（6）：359-360.

（收稿日期：2014-05-24 本文編輯：衛(wèi) 軻）

從累積透皮釋藥曲線分析，兩種樣品巴布劑1～2 h內(nèi)均為快速透皮釋藥階段，2～12 h為平穩(wěn)緩慢透皮釋藥過(guò)程，其中超細(xì)粉樣品巴布劑2 h和4 h內(nèi)血竭素累積透皮釋藥率與普通粉樣品巴布劑6 h和10 h內(nèi)相當(dāng)，12 h內(nèi)累積透皮釋藥率超微細(xì)粉樣品巴布劑高于普通細(xì)粉樣品巴布劑15%左右。超微粉樣品巴布劑均明顯優(yōu)于普通粉樣品巴布劑。

3 討論

3.1 關(guān)于流動(dòng)相的選擇

按照《中國(guó)藥典》2010年版中血竭素的的含量測(cè)定方法進(jìn)行操作，參考有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，比較了乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（35∶65、40∶60、45∶55、50∶50）多種不同配比[3-8]，結(jié)果乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（50∶50）作為流動(dòng)相時(shí)能夠?qū)⒀咚嘏c雜質(zhì)峰完全分離，出峰時(shí)間適當(dāng)，峰形好。

3.2 關(guān)于血竭素定容方法

血竭素為色原酮類(lèi)化合物，性質(zhì)不穩(wěn)定，見(jiàn)光易分解，溶液放置顏色會(huì)逐漸加深。因此待測(cè)樣品溶液制備后立即置棕色量瓶中，用3%磷酸甲醇替代《中國(guó)藥典》2010年版中的甲醇進(jìn)行定容，使樣品中的血竭素形成血竭素的磷酸鹽，增強(qiáng)其穩(wěn)定性[9-10]。穩(wěn)定性試驗(yàn)考察結(jié)果表明，同一供試品溶液在0、1、2、4、6 h時(shí)峰面積積分值RSD為1.14%，表明血竭素的磷酸鹽在甲醇溶液中6 h內(nèi)室溫下放置是穩(wěn)定的。

3.3 關(guān)于供試品溶液制備

巴布膏劑含量測(cè)定難點(diǎn)在于排除基質(zhì)的干擾，同時(shí)最大限度提取轉(zhuǎn)移目標(biāo)成分。由于六白白疕巴布劑組方藥物中的甘草所含甘草酸易與血竭素形成鹽，影響血竭素在脂溶性溶劑中的溶解和轉(zhuǎn)移。參考文獻(xiàn)報(bào)道[11]，對(duì)供試品溶液提取檢測(cè)方法進(jìn)行考察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，一定量氨試液既可浸潤(rùn)溶解巴布膏膏體，同時(shí)又能堿化、游離血竭素的甘草酸鹽，減少其他水溶性成分和基質(zhì)的影響。提高血竭素在三氯甲烷等溶劑中的提取轉(zhuǎn)移率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用膏體10倍的氨試液先浸潤(rùn)溶脹巴布膏體，使血竭素甘草酸鹽在堿性環(huán)境下游離，再用三氯甲烷提取，可以增加血竭素在三氯甲烷相中的溶解轉(zhuǎn)溶，殘留膏體未能檢測(cè)出血竭素成分。表明此法可以基本提取轉(zhuǎn)溶血竭素成分，含量測(cè)定精確性高。

3.4 關(guān)于超微粉碎

中藥材超微粉碎后，可使大部分藥材細(xì)胞壁膜破裂，有效成分不必經(jīng)過(guò)壁、膜的釋放過(guò)程，直接暴露在外，有利于提高有效成分的溶出和透皮吸收效果[12-18]；在外用貼膏劑中，由于超微細(xì)粉的粒徑小，一方面易于從基質(zhì)材料中滲透出來(lái)，另一方面填充在基質(zhì)中可以減少基質(zhì)之間的相互作用力，有利于成分釋放，提高釋藥速率[13]。本項(xiàng)研究中，血竭作為組方中的貴重藥，在巴布劑劑型研究中替代硅藻土等用作填充劑，可以提高巴布劑藥物成分相對(duì)比例。本研究結(jié)果表明，以血竭素不同時(shí)段體外透皮釋藥量為指標(biāo)，超微細(xì)粉明顯優(yōu)于普通細(xì)粉，與有關(guān)研究報(bào)道等[13-18]研究結(jié)論基本一致，為中藥以超微粉作為填充劑的外用貼膏劑制劑研究提供了一個(gè)新的思路。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 張偉，張?jiān)汽?，楊一丁，?六白白疕巴布劑藥物提取正交實(shí)驗(yàn)研究[J].齊魯藥事，2010，29（11）：645-646.

[2] 張偉，高文勇，張?jiān)汽?，?六白白疕巴布劑經(jīng)皮吸收研究[J].齊魯藥事，2010，29（12）：710-711.

[3] 李小曲.HPLC法測(cè)定骨傷跌打止痛膠囊中血竭素的含量[J].中國(guó)藥師，2014，17（2）：343-345.

[4] 劉長(zhǎng)龍，高鵬.提取溶劑酸度對(duì)血竭及玉紅生肌凝膠中血竭素含量的影響[J].遼寧中醫(yī)雜志，2013，40（3）：520-522.

[5] 湯小燕，陳越，李炯.HPLC測(cè)定神農(nóng)鎮(zhèn)痛膏中血竭素的含量[J].中國(guó)執(zhí)業(yè)藥師，2014，（4）：14-16.

[6] 李長(zhǎng)達(dá).安陽(yáng)固本膏中血竭素的HPLC含量測(cè)定[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2012，6（19）：119-120.

[7] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：133.

[8] 楊瑞瑞，李雪，喬蓉霞，等.展筋活血散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2013，14（4）：251-255.

[9] 胡世強(qiáng)，張偉.《中國(guó)藥典》2010年版血竭中血竭素含量測(cè)定提取方法的改進(jìn)[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2013，14（1）：36-37.

[10] 陳振振，張靈英，李莉，等.HPLC法測(cè)定創(chuàng)傷愈合藥噴霧劑中血竭素的含量[J].中國(guó)獸藥雜志，2012，46（10）：24-26，35.

[11] 陳佳，孫磊，金紅宇，等.HPLC法測(cè)定薄荷護(hù)表膏中血竭素的含量[J].中國(guó)藥事，2011，25（3）：271-272.

[12] 鹿麗麗，蕭偉，徐連明，等.不同粒徑龍血竭粉的物理性質(zhì)及體外溶出度比較[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（10）：14-16.

[13] 胡琴，孫娥，張振海.不同粒徑血竭粉體對(duì)ZJHX橡膠膏透皮吸收和黏附性的影響[J].中國(guó)中藥雜志，2012，37（23）：3549-3552.

[14] 卓丹如，闕慧卿，章寧，等.不同粉碎度野生西洋參人參皂苷Rb1的體外溶出度研究[J].藥物評(píng)價(jià)研究，2013， 36（5）：374-376.

[15] 張海英，趙泳波.丹參超微粉碎前后丹參酮ⅡA的溶出行為比較[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2013，30（5）：2335-2338.

[16] 熊慧，郭舟，趙靜文.梔子超微粉與細(xì)粉中梔子苷的體外溶出度比較[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（21）：53-55.

[17] 劉莉，劉強(qiáng)，鐘海巖.丁香普通粉與超微粉中丁香酚的含量及對(duì)小鼠腸運(yùn)動(dòng)作用的研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（8）：128.

[18] 俞忠明，戴詩(shī)文，壽旦，等.超微粉碎工藝對(duì)血竭透皮吸收的影響研究[J].浙江中醫(yī)雜志，2008，43（6）：359-360.

（收稿日期：2014-05-24 本文編輯：衛(wèi) 軻）