宋欽蘭，林海青

(山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東濟(jì)南250011)

糖尿病被稱(chēng)為冠心病的等危癥，70% ～80%的患者存在心血管系統(tǒng)并發(fā)癥，主要為心肌彌漫性小血管病變，使心肌硬度增加，彈性降低。益氣生津活血方主要由肉桂、三七、紅花、川芎等中藥組成，具有活血、益氣、生津的功效，能顯著改善糖尿病病人的冠心病癥狀。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察益氣生津活血方藥對(duì)糖尿病大鼠動(dòng)物模型的影響，考察益氣生津活血方治療糖尿病大鼠并發(fā)冠心病的作用機(jī)制，為臨床有效防治糖尿病并發(fā)冠心病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物及分組 SD雄性大鼠(120±15)g 80只，購(gòu)于山東中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心，合格證號(hào):SCX(魯)2011003。以上大鼠分組，分別為益氣生津活血方低劑量組、益氣生津活血方高劑量組、二甲雙胍組、模型對(duì)照組、空白對(duì)照組、益氣生津活血方預(yù)防組。

1.2 藥品及試劑 白介素－1(IL－1)酶聯(lián)免疫試劑盒，細(xì)胞間粘附分子(SICAM－1)酶聯(lián)免疫試劑盒，內(nèi)皮素－1(ET－1)放射免疫試劑盒(試劑盒均為進(jìn)口分裝，由迪耐商貿(mào)有限公司提供)。益氣生津活血方水煎液:益氣生津活血方中各味中藥由山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院提供，處方劑量混合后按常規(guī)中藥煎煮方法煎煮并濃縮至1 g·mL－1備用。

1.3 儀器 勻漿機(jī)(IKA)，酶標(biāo)儀(BIOTEK)，全自動(dòng)放射免疫R計(jì)數(shù)器(SN－695，上海)，DD－5冷凍離心機(jī)(JOUAN)，血糖儀(強(qiáng)生)。

2 試驗(yàn)方法

2.1 造模 高脂飼料+STZ法，按分組大鼠適應(yīng)環(huán)境飼養(yǎng)7天，空白對(duì)照組大鼠用普通飼料。其他5組喂養(yǎng)高脂飼料，同時(shí)預(yù)防組灌胃益氣生津活血方(9.09 g·kg－1)水煎液，90 d 后一次性腹腔注射STZ 15 mg·kg－1，然后繼續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料 20 d，然后空腹測(cè)體重和血糖，把不符合糖尿病體征大鼠剔除，每組10只。

2.2 試驗(yàn)方法 除空白對(duì)照組外，其余各組灌胃給藥，高、低劑量(36.36、18.18 g·kg－1)分別按臨床用量 2、4 倍量(計(jì)算公式為 d大鼠=0.71 k人/0.11)，空白對(duì)照組用同體積蒸餾水灌胃，同時(shí)預(yù)防組繼續(xù)灌胃益氣生津活血方水煎液，連續(xù)灌胃12周，每7 d稱(chēng)一次體重，按新體重調(diào)整灌胃劑量，灌胃結(jié)束后禁食不禁水12 h，用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，腹腔靜脈取血，測(cè)血糖，然后3 000 rpm離心20 min，血清－80℃保存?zhèn)溆?。然后取大鼠心臟，一部分用冰生理鹽水沖洗，在冰上沿左心室方向解剖左心室，4%多聚甲醛固定，HE染色，做病理切片。另一部分精確稱(chēng)重，以5 mL·g－1冰生理鹽水勻漿，制備20%心肌組織漿液，然后于低溫離心機(jī)上3 000 rpm離心20 min，取上清液4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 取以上待測(cè)液，分別按 SICAM－1、IL－1、ET－1試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定，所得數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理結(jié)果見(jiàn)表1、2。

表1 益氣生津活血方對(duì)血糖的影響(±s，n=10)

表1 益氣生津活血方對(duì)血糖的影響(±s，n=10)

注:與空白對(duì)照模型組比較，*P＜0.05;與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05

組別 動(dòng)物數(shù) 造模前血糖 造模后血糖 用藥后血糖空白對(duì)照組10 5.31 ±0.56 5.47 ±0.56 5.21 ±1.02低劑量組 10 5.42 ±0.59 8.17 ±1.02# 6.24 ±1.11#高劑量組 10 5.71 ±0.11 8.23 ±1.60# 6.08 ±0.93#預(yù)防組 10 5.23 ±0.61 8.30 ±2.11# 5.89 ±1.57#二甲雙胍組 10 4.98 ±1.11 8.86 ±1.64# 5.77 ±1.14#模型對(duì)照組 10 6.05 ±1.32 8.11 ±1.25* 9.01 ±2.33*

表2 益氣生津活血方對(duì)SICAM－1、IL－1、ET－1的影響(±s，n=10)

表2 益氣生津活血方對(duì)SICAM－1、IL－1、ET－1的影響(±s，n=10)

注:與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05;模型組與空白對(duì)照模型組比較，#P＜0.05

組別 動(dòng)物數(shù) SICAM－1(ng·mL －1)IL－1(pg·mL －1)ET－1(pg·mL －1)10 369.1 ±31.2 60.6 ±14.1 109.3 ±39.7預(yù)防組 10 377.4 ±21.6* 61.7 ±11.3* 112.6 ±29.5*低劑量組 10 382.3 ±27.5* 66.7 ±15.6* 127.3 ±39.3*高劑量組 10 379.1 ±31.5* 61.8 ±16.4* 119.5 ±26.7*二甲雙胍組 10 379.8 ±31.7* 73.2 ±21.3* 139.6 ±21.5*模型對(duì)照組 10 495.7 ±51.1# 95.2 ±11.8# 157.7 ±26.1空白對(duì)照組#

3.2 HE染色后顯微鏡下觀察 模型對(duì)照組可見(jiàn)部分心肌纖維呈灶性肥大，且有多個(gè)小空泡，細(xì)胞變寬變大，細(xì)胞核不在中間位置，偏向一側(cè)，有的心肌橫紋消失，心肌間質(zhì)有纖維結(jié)締組織樣增生，二甲雙胍組顯微鏡下觀察其心肌細(xì)胞與模型對(duì)照組形狀相似，但程度明顯減輕，預(yù)防組與二甲雙胍組顯微鏡下觀察形狀相近，程度也相近。益氣生津活血方組顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞與模型對(duì)照組相似，程度介于模型對(duì)照組與二甲雙胍組和預(yù)防組之間。各組心肌細(xì)胞顯微鏡下觀察見(jiàn)圖1。

4 討論

有學(xué)者［1］認(rèn)為，糖尿病早期即可出現(xiàn)微血管內(nèi)皮功能損傷和活性物質(zhì)分泌異常，其中Nishikawa T等［2］認(rèn)為，高血糖可增強(qiáng)細(xì)胞氧化應(yīng)激性，這種氧化應(yīng)激能激活有關(guān)的信號(hào)傳導(dǎo)通道，通過(guò)激活核因子(NF－KB)來(lái)上調(diào)細(xì)胞間黏附分子及炎性因子(SICAM－1、IL－1、ET－1)基因轉(zhuǎn)錄，通過(guò)一系列生物反應(yīng)，心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞則出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致微循環(huán)障礙發(fā)生，因此糖尿病與微血管病變存在必然聯(lián)系。

祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，陰虛為糖尿病發(fā)生的實(shí)質(zhì)，氣虛是糖尿病不愈之癥結(jié)，血瘀是糖尿病并發(fā)癥的關(guān)鍵，陰陽(yáng)兩虛是糖尿病發(fā)病的趨勢(shì)［3］，李賽美等［4］臨床研究顯示，中醫(yī)益氣養(yǎng)陰、活血化瘀對(duì)糖尿病心肌缺血有一定的效果，且活血效果更佳。吳勇等［5］研究表明，黃芪多糖可降低糖尿病大鼠血糖水平，對(duì)早期糖尿病大鼠內(nèi)皮細(xì)胞具有良好的保護(hù)作用。

圖1 各組心肌細(xì)胞顯微鏡下觀察照片

益氣生津活血方主要由肉桂、黃芪、桂枝、仙靈脾、三七、紅花、川芎、黃連、川牛膝組成，其各組分含量比是經(jīng)過(guò)正交試驗(yàn)獲得，具有活血、溫養(yǎng)、補(bǔ)中益氣之功效。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)高脂飼料+STZ法成功造成符合臨床Ⅱ糖尿病模型，給模型動(dòng)物灌胃益氣生津活血方，且通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析得知，益氣生津活血方能顯著降低糖尿病大鼠心肌漿液SICAM－1、IL－1、ET－1含量;鏡下觀察，能顯著降低心肌橫紋消失，心肌間質(zhì)纖維結(jié)締組織樣增生，顯著降低心肌纖維肥大和脂肪細(xì)胞堆積。實(shí)驗(yàn)證明，益氣生津活血方對(duì)鏈脲霉素引發(fā)糖尿病心肌微血管損傷具有保護(hù)作用。

［1］Suwaidi JA，Hamasaki S，Higano ST，et al.Long － term follow－up of patients with mild coronary artery disease endothelial dysfunction［J］.Circulation，2000，101(9):948－954.

［2］Nishikawa T，Edelstein D，Du XL，et al.Normalizing mitochondrial superoxide production blocks three pathways of hyperglycaemic damage［J］.Nature，2000，404(6779):787－790.

［3］周魯，周曉芳，付超，等.271首治療糖尿病中藥復(fù)方用藥規(guī)律研究［J］.新中醫(yī)，2004，36(11):40 －41.

［4］李賽美，熊曼琪，林安鐘，等.中醫(yī)不同治法對(duì)糖尿病大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎致心肌缺血預(yù)防作用的對(duì)比觀察［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2000，20(6):438 －440.

［5］吳勇，歐陽(yáng)靜萍，涂淑珍，等.黃芪多糖對(duì)糖尿病大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2002，29(1):22－23.