孫 峰，林 蘭，劉繼斌（南通市腫瘤醫(yī)院／南通大學(xué)附屬南通腫瘤醫(yī)院，江蘇南通 226361）

近年來，乳腺癌發(fā)病率顯著上升，且發(fā)病年齡呈年輕化趨勢，嚴(yán)重威脅女性健康［1］。原癌基因 Her－2是p185蛋白的編碼基因，也是乳腺癌的主要致病相關(guān)基因。20%～30%的乳腺癌患者過表達(dá)p185蛋白，且轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者腫瘤組織中的p185蛋白更易進(jìn)入外周血中，導(dǎo)致血清p185蛋白水平的升高［2－3］。本研究采用免疫聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)檢測健康者及乳腺癌患者血清p185蛋白水平，分析了血清p185蛋白檢測在乳腺癌早期診斷及預(yù)后判斷中的臨床價(jià)值，結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 2008～2010年于本院經(jīng)病理學(xué)檢查確診并接受手術(shù)治療的乳腺癌初診患者60例，術(shù)前均未接受任何抗癌治療。同期于本院體檢健康的女性60例納入健康對照組。

1．2 儀器與試劑 德國Biometra公司溫度梯度PCR擴(kuò)增儀，美國Pharmacia公司ECPS3000／150型電泳儀，美國Beckman公司Allegra 64R型高速低溫離心機(jī)，美國BIO－RAD公司凝膠圖像分析儀，上海復(fù)生生物工程公司紫外反射透射儀，上海華美生物工程公司酶標(biāo)軟板（96孔）。瓊脂糖購自中國科學(xué)院上海藥物研究所，溴化乙錠（EB）購自華美生物工程公司，鼠抗人p185單克隆抗體購自北京中山生物技術(shù)有限公司，超敏SP（鼠）試劑盒、DAB顯色試劑盒、蘇木素復(fù)染試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司，IgG－DNA探針購自上海閃晶生物公司。

1．3 方法 （1）采集所有受試對象靜脈血，常規(guī)離心后分離血清標(biāo)本。（2）取酶標(biāo)軟板，每孔加入10g／mL p185單克隆抗體100μL，4℃孵育過夜；洗滌液洗滌3次后每孔加入200μL封閉液，37℃封閉3h；洗滌液洗滌3次后每孔加入100μL血清，37℃孵育40min；洗滌液洗滌3次后每孔加入1∶1 000稀釋的IgG－DNA探針50μL，37℃孵育45min；洗滌液洗滌10次后加入PCR混合物，覆蓋70μL石蠟油，在PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行擴(kuò)增（94℃2min，94℃40s、55℃40s、72℃60s循環(huán)35次，72℃5min）；取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物20μL加入2%瓊脂糖凝膠中電泳，EB染色后在紫外反射透射儀上觀察結(jié)果并照相。同時(shí)設(shè)PCR陽性對照，采用相同方法進(jìn)行PCR擴(kuò)增。（3）對每位患者進(jìn)行隨訪，生存期計(jì)算從治療開始到患者死亡或2011年4月底末次隨訪日終止。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS12．0統(tǒng)計(jì)軟件對計(jì)數(shù)資料進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0．05，P＜0．05為比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1 血清p185蛋白檢測陽性率比較 乳腺癌患者血清p185蛋白陽性率為41．7%（25／60），健康對照組陽性率為0．0%（0／60），組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝31．578，P＜0．05）。

2．2 腫瘤組織與血清p185蛋白的關(guān)系 26例腫瘤組織p185蛋白陽性乳腺癌患者中，25例為血清p185蛋白陽性，陽性率為96．15%（25／26），34例腫瘤組織p185蛋白陰性患者血清p185蛋白均為陰性，二者血清p185蛋白陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝56．043，P＜0．05）。

2．3 血清p185蛋白與患者臨床病理特征的關(guān)系 乳腺癌患者血清p185蛋白與腫瘤大?。é?＝11．421，P＜0．05）、臨床分期（χ2＝9．145，P＜0．05）關(guān)系密切，但與絕經(jīng)狀態(tài)、雌激素受體（ER）狀態(tài)、孕激素受體（PR）狀態(tài)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等均無相關(guān)性（P＞0．05），見表1。

表1 乳腺癌患者血清p185蛋白與臨床病理特征的關(guān)系

2．4 血清p185蛋白與乳腺癌復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的關(guān)系 60例乳腺癌患者在隨訪期中，28例復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，占46．7%（28／60）；25例血清p185陽性患者中，19例復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，占76．0%（19／25），35例血清p185陰性患者中，9例復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，占25．7%（9／35），復(fù)發(fā)率或轉(zhuǎn)移率組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝14．816，P＜0．05）。

3 討 論

原癌基因Her－2是乳腺癌的主要致病相關(guān)基因，95%以上的Her－2基因擴(kuò)增陽性乳腺癌組織標(biāo)本可檢出p185蛋白的過度表達(dá)。目前，血清p185蛋白和腫瘤組織p185蛋白表達(dá)一致性還存在爭議［4］。免疫PCR技術(shù)能檢出血清中極微量的p185蛋白，為乳腺癌早期診斷及病情監(jiān)測提供了新的方法［5－6］。本研究采用該技術(shù)檢測了乳腺癌患者血清p185蛋白，結(jié)果顯示血清p185蛋白和乳腺癌組織p185蛋白具有一定的相關(guān)性。

有研究顯示，乳腺癌腫瘤組織p185蛋白表達(dá)與ER、PR表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、臨床分期無相關(guān)性［7］。但也有學(xué)者認(rèn)為，乳腺癌腫瘤組織p185蛋白表達(dá)與ER、PR表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與臨床分期、腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，與患者年齡、腫瘤大小無相關(guān)性［8］。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌患者血清p185蛋白與腫瘤大小、臨床分期關(guān)系密切，但與絕經(jīng)狀態(tài)、ER、PR、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等均無關(guān)系。由此可見，乳腺癌組織中的p185蛋白可以分泌進(jìn)入外周血，且乳腺癌腫瘤組織越大、臨床分期越高，分泌進(jìn)入外周血中的p185蛋白越多，而分泌量的多少和絕經(jīng)狀態(tài)、ER、PR、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等均無關(guān)系。

乳腺癌預(yù)后評估主要依據(jù)腫瘤部位與大小、臨床分期、病理組織分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，臨床分期高、病理組織低分化以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移通常提示預(yù)后不良。腫瘤組織p185蛋白過度表達(dá)的乳腺癌患者容易復(fù)發(fā)，并且總體生存率和無復(fù)發(fā)生存率都低，其預(yù)后意義僅次于腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，是獨(dú)立于其他預(yù)后因子之外的預(yù)后因子［9－10］。本結(jié)果顯示，血清p185蛋白陽性乳腺癌患者復(fù)發(fā)率或轉(zhuǎn)移率明顯高于血清p185蛋白陰性患者，提示血清p185蛋白檢測亦用于監(jiān)測腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。

綜上所述，乳腺癌患者血清p185蛋白陽性率較高，與腫瘤大小、臨床分期關(guān)系密切，血清p185蛋白陽性患者較陰性患者更易出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移；免疫PCR技術(shù)檢測血清p185蛋白可用于乳腺癌早期診斷、病情監(jiān)測及預(yù)后判斷。

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