卜艷珍+王美心+趙鵬飛+張路平

摘要：首次應(yīng)用掃描電鏡技術(shù)對冠狀冠環(huán)線蟲（Coronocyclus coronatus）、大唇片冠環(huán)線蟲（C. labiatus）和小唇片冠環(huán)線蟲（C. labratus）的體表結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行觀察和比較。結(jié)果表明，3種線蟲的形態(tài)特征存在明顯差異。冠狀冠環(huán)線蟲外葉冠由22個小葉組成；4個亞中乳突起自口領(lǐng)基部，向口領(lǐng)頂部延伸呈隆起狀；雄蟲生殖錐背唇上有1對卵圓形結(jié)構(gòu)的附屬物，中部相融合，上面分布著許多剛毛狀突起；雌蟲尾部直。大唇片冠環(huán)線蟲外葉冠小葉19個；口領(lǐng)內(nèi)上緣在背腹面和側(cè)面向內(nèi)延伸形成4個大的唇形結(jié)構(gòu)，每個唇片的基部中央伸出1個亞中乳突；雄蟲生殖錐背唇上約分布著10個大小不等的圓錐形附屬物；雌蟲尾部稍彎向背側(cè)。小唇片冠環(huán)線蟲外葉冠小葉18個；口領(lǐng)內(nèi)上緣在背腹面和側(cè)面向內(nèi)延伸形成4個小的唇形結(jié)構(gòu)，每個唇片的基部中央伸出1個亞中乳突；雄蟲生殖錐背唇上有1個兩端呈卵圓的月牙形附屬物；雌蟲尾部直。

關(guān)鍵詞：冠狀冠環(huán)線蟲；大唇片冠環(huán)線蟲；小唇片冠環(huán)線蟲；體表結(jié)構(gòu)；掃描電鏡

中圖分類號：Q959.17；S432.4+5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-1302（2014）08-0214-04

冠環(huán)屬（Coronocyclus）線蟲隸屬于圓線目（Strongylida）圓線科（Strongylidae）盅口亞科（Cyathostominae），是馬屬動物腸道內(nèi)感染率較高的寄生圓線蟲，往往造成宿主消瘦、貧血甚至死亡^[1-5]。1986年，德國學(xué)者Hartwich對盅口族（Cyathostominea）線蟲進(jìn)行了分類修訂，根據(jù)角質(zhì)支環(huán)與口囊壁前端完全分開這一特征建立了一個新屬——冠環(huán)屬（Coronocyclus），并將盅口屬（Cyathostomum）的4個種移入該屬，即冠狀冠環(huán)線蟲（C. coronatus）、大唇片冠環(huán)線蟲（C. labiatus）、小唇片冠環(huán)線蟲（C. labratus）和箭狀冠環(huán)線蟲（C. sagittatus）^[6]。隨后，Dvojnos等又發(fā)現(xiàn)了一個新種，命名為尤氏冠環(huán)線蟲（C. ulambajari）^[7]。近幾年來，筆者對河南省驢腸道寄生線蟲的感染情況進(jìn)行了調(diào)查，僅采集到冠狀冠環(huán)線蟲、大唇片冠環(huán)線蟲和小唇片冠環(huán)線蟲3種冠環(huán)線蟲。盡管國內(nèi)外學(xué)者在光鏡下已經(jīng)對這3種線蟲作了詳細(xì)的描述^[8-10]，但是尚未見掃描電鏡的相關(guān)報道。由于掃描電鏡技術(shù)可以更直觀、更清晰地觀察到線蟲的體表結(jié)構(gòu)特征，因此被廣泛應(yīng)用于線蟲的分類鑒定^[11-14]。本研究首次應(yīng)用掃描電鏡技術(shù)對冠環(huán)屬3種線蟲的體表特征進(jìn)行觀察和比較，不僅可以為線蟲的分類鑒定提供更多、更具體的形態(tài)學(xué)依據(jù)，同時還可以為馬屬動物線蟲病的診斷和防治提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

采自河南省驢腸道內(nèi)的線蟲標(biāo)本經(jīng)過處理后，固定保存于70%乙醇中。固定標(biāo)本先用乳酸苯酚溶液（2份甘油、1份苯酚飽和溶液、1份乳酸、1份水）透明，然后在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)學(xué)初步鑒定，種類鑒定主要采用張路平等提出的分類系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)[8-9，15]。標(biāo)本保存于河南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院。

挑選冠環(huán)屬3種線蟲雌雄蟲體各5頭，用于掃描電鏡觀察。先用0.1 mol/L磷酸緩沖液（pH值 7.2）充分漂洗干凈，再用2.5%戊二醛固定3 h，經(jīng)磷酸緩沖液漂洗后，放入1%鋨酸固定1.5 h，再經(jīng)磷酸緩沖液漂洗，各級乙醇梯度脫水，醋酸異戊酯置換，CO2臨界點(diǎn)干燥，噴金鍍膜后，在S-570掃描電鏡下觀察和拍照（工作電壓15 kV）。

2 結(jié)果與分析

2.1 冠狀冠環(huán)線蟲

口領(lǐng)顯著，頭部頂面觀呈圓形。4個亞中乳突起自口領(lǐng)基部向頂部延伸呈隆起狀，到達(dá)口領(lǐng)頂部后，突出口領(lǐng)之上呈子彈形（圖1-1、圖1-2、圖1-3），乳突長9.7～11.8 μm（10.9 μm）?？陬I(lǐng)頂端兩側(cè)各有1個頭感器，頭感器小，稍微隆起，中間有一裂縫（圖1-4）。口孔較大，近似圓形，直徑為39.4～41.3 μm（40.2 μm）?？诳字車h(huán)繞著1圈外葉冠，由22個小葉組成，小葉長18.3～26.1 μm（22.5 μm），基部寬3.4～4.6 μm（4.1 μm），小葉末端鈍圓，有的伸向口孔，有的向外翻卷。外葉冠的起始部位低于口領(lǐng)表面（圖1-2、圖1-3）。

雄蟲（n=5）：體長7.45～8.51 mm（7.92 mm），最大體寬341.3～392.5 μm（370.2 μm）。尾部具有發(fā)達(dá)的交合傘，由1個較長的背葉和2個卵圓形的側(cè)葉組成，背葉和側(cè)葉分界明顯（圖1-5、圖1-6）。生殖錐短，由腹唇和背唇組成，兩唇之間的橫裂即為泄殖孔。背唇上有1對卵圓形結(jié)構(gòu)的附屬物，中部相融合，上面分布著許多剛毛狀突起（圖1-7）。

雌蟲（n=5）：體長8.90～10.09 mm（10.01 mm），最大體寬372.4～453.2 μm（411.7 μm）。尾部直，尾尖呈指形。陰門卵圓形，靠近肛門。肛門橫裂，呈月牙形（圖1-8、圖1-9）。陰門距肛門110.2～120.4 μm（116.3 μm），肛門距尾端174.2～194.1 μm（183.5 μm）。

2.2 大唇片冠環(huán)線蟲

口領(lǐng)顯著， 頭部頂面觀呈圓形?？陬I(lǐng)內(nèi)上緣在背腹面和側(cè)面向內(nèi)延伸形成4個大的唇形結(jié)構(gòu)，每個唇片的基部中央伸出1個亞中乳突，亞中乳突的大部分與唇片結(jié)合在一起，只有頂部游離在唇片的外面（圖2-1、圖2-2、圖2-3），乳突長6.1～7.2 μm（6.8 μm）?？陬I(lǐng)頂端兩側(cè)各有1個頭感器，頭感器小，稍微隆起，中間有一裂縫（圖2-3）?？诳纵^大，近似圓形，直徑41.5～46.8 μm（44.3 μm）?？诳字車h(huán)繞著1外葉冠，由19個小葉組成，小葉長26.7～29.3 μm（27.4 μm），基部寬4.2～5.3 μm（4.7 μm），小葉末端鈍圓，向外翻卷。外葉冠的起始部位低于口領(lǐng)的表面（圖2-3、圖2-4）。endprint

雄蟲（n=5）：體長7.65～8.19 mm（7.94 mm），最大體寬312.6～428.3 μm（364.7 μm）。尾部具有發(fā)達(dá)的交合傘，背葉較寬闊，稍長于側(cè)葉，背葉和側(cè)葉分界不明顯（圖2-5、圖2-6）。生殖錐短，卵圓形，由腹唇和背唇組成，兩唇之間的橫裂即為泄殖孔。背唇上分布著約10個大小不等的圓錐形附屬物（圖2-7）。

雌蟲（n=5）：體長9.76～11.23 mm（10.54 mm），最大體寬413.6～542.3 μm（486.7 μm）。尾部粗壯，稍彎向背側(cè)，尾尖呈指形。陰門卵圓形，靠近肛門。肛門橫裂，呈月牙形（圖2-8、圖2-9）。陰門距肛門105.3～116.4 μm（112.1 μm），肛門距尾端131.7～162.5 μm（143.9 μm）。

2.3 小唇片冠環(huán)線蟲

口領(lǐng)顯著，頭部頂面觀呈圓形?？陬I(lǐng)內(nèi)上緣在背腹面和側(cè)面向內(nèi)延伸形成4個小的唇形結(jié)構(gòu)，每個唇片的基部中央伸出1個亞中乳突，亞中乳突僅基部與唇片結(jié)合在一起，其他大部分游離在唇片的外面（圖3-1、圖3-2、圖3-3），乳突長5.9～6.8 μm（6.3 μm）。口領(lǐng)頂端兩側(cè)各有1個頭感器，頭感器小，稍微隆起，中間有一裂縫（圖3-2）?？诳咨孕?，近似圓形，直徑為32.6～35.5 μm（34.7 μm）?？诳字車h(huán)繞著1圈外葉冠，由18個小葉組成，小葉長11.4～19.6 μm（16.3 μm），基部寬2.4～4.3 μm（3.5 μm），小葉末端鈍圓，有的伸向口孔，有的向外翻卷。外葉冠的起始部位低于口領(lǐng)表面（圖3-1、圖3-2）。

雄蟲（n=5）：體長5.67～6.78 mm（6.54 mm），最大體寬238.4～297.1 μm（254.8 μm）。尾部具有發(fā)達(dá)的交合傘，由1個稍長的背葉和2個卵圓形的側(cè)葉組成，背葉和側(cè)葉分界明顯（圖3-4、圖3-5）。生殖錐短小，由腹唇和背唇組成，兩唇之間的橫裂即為泄殖孔。背唇上有1個月牙狀的附屬物，兩端呈卵圓形（圖3-6、圖3-7）。

[CM（24]雌蟲（n=5）：體長6.96～7.92 mm（7.68 mm），最大體寬294.8～345.3 μm（328.2 μm）。尾部直，尾尖呈指形。陰門卵圓形，靠近肛門。肛門橫裂，呈月牙形（圖3-8、圖3-9）。陰門距肛門64.2～87.1 μm（76.4 μm），肛門距尾端86.3～98.2 μm（92.5 μm）。

3 結(jié)論與討論

首次采用掃描電鏡對冠環(huán)屬3種線蟲的體表結(jié)構(gòu)進(jìn)行了詳細(xì)的觀察和描述，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3種線蟲外部形態(tài)特征具有明顯的差異：（1）冠狀冠環(huán)線蟲的外葉冠由22個小葉組成，小葉長18.3～26.1 μm（22.5 μm），基部寬3.4～4.6 μm（4.1 μm）；大唇片冠環(huán)線蟲外葉冠小葉為19個，小葉長 26.7～29.3 μm（27.4 μm），基部寬4.2～5.3 μm（4.7 μm）；小唇片冠環(huán)線蟲為18個小葉，小葉長11.4～19.6 μm（16.3 μm），基部寬2.4～4.3 μm（3.5 μm）。外葉冠形態(tài)特征的差異是鑒定圓線蟲種類的重要依據(jù)之一，外葉冠的形狀和數(shù)量在光鏡下有時難以辨別，但在掃描電鏡下可以觀察得十分清楚。在以往的報道中，只是對外葉冠小葉的數(shù)量進(jìn)行了描述^[8-10]，而本研究提供了更多、更具體的形態(tài)特征。（2）冠狀冠環(huán)線蟲的4個亞中乳突起自口領(lǐng)基部，向口領(lǐng)頂部延伸呈隆起狀；大唇片冠環(huán)線蟲口領(lǐng)內(nèi)上緣在背腹面和側(cè)面向內(nèi)延伸形成4個大的唇形結(jié)構(gòu)；小唇片冠環(huán)線蟲口領(lǐng)內(nèi)上緣在背腹面和側(cè)面向內(nèi)延伸形成4個小的唇形結(jié)構(gòu)。從觀察結(jié)果來看，冠環(huán)屬3種線蟲亞中乳突基部的形態(tài)特征明顯不同。大唇片冠環(huán)線蟲和小唇片冠環(huán)線蟲的頭部特征比較相似，只是大唇片冠環(huán)線蟲的口領(lǐng)基部形成4個特別顯著的唇形隆起，而小唇片冠環(huán)線蟲形成的唇形隆起小而低，與光鏡下的觀察結(jié)果^[8-10]一致。（3）冠狀冠環(huán)線蟲雄蟲生殖錐背唇上有1對卵圓形結(jié)構(gòu)的附屬物，中部相融合，上面分布著許多剛毛狀突起；大唇片冠環(huán)線蟲生殖錐背唇上約有10個大小不等的圓錐形附屬物；小唇片冠環(huán)線蟲生殖錐上有1個兩端呈卵圓的月牙形附屬物。生殖錐一般包埋在雄蟲交合傘下面，不易被觀察，而在掃描電鏡下，生殖錐的立體感較強(qiáng)，結(jié)構(gòu)非常清晰。本結(jié)果與Lichtenfels等的描述^[9]稍有不同。在Lichtenfels等的報道中，大唇片冠環(huán)線蟲生殖錐上有2對圓錐形突起，而小唇片冠環(huán)線蟲生殖錐上有1對梨形附屬物，中部相融合。筆者認(rèn)為產(chǎn)生這些差異的原因可能有2個：一是由于地理分布不同造成的種內(nèi)變異；二是由于在光鏡下生殖錐附屬物形態(tài)結(jié)構(gòu)不容易分辨，使得研究者的描述和看法不同。（4）冠狀冠環(huán)線蟲雌蟲尾部直，尾長174.2～194.1 μm（183.5 μm）；大唇片冠環(huán)線蟲尾部粗壯，稍彎向背側(cè)，尾長131.7～162.5 μm（143.9 μm）；小唇片冠環(huán)線蟲尾部直，尾長86.3～98.2 μm（92.5 μm）。3種線蟲雌蟲尾部形態(tài)與以往的報道^[8-10]基本一致。本研究結(jié)果進(jìn)一步證明，通過掃描電鏡能夠清晰、準(zhǔn)確地觀察到線蟲的體表結(jié)構(gòu)特征，可以為線蟲的分類鑒定提供更多、更詳細(xì)的形態(tài)鑒別依據(jù)。

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