劉冬影　吳瓊　于鳳麗

摘 要：以蒲公英幼嫩葉片為外植體，以MS為基本培養(yǎng)基，通過添加不同配比的6-BA 、NAA、2，4-D植物激素，探討外植體愈傷組織的誘導。研究結(jié)果表明：葉片在含0.2mg/LNAA和2mg/L6-BA的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)20天后形成明顯的愈傷組織，誘導率達到86.6%，且絕大多數(shù)愈傷組織狀態(tài)、長勢良好，呈比較濕潤的嫩黃色顆粒狀。

關(guān)鍵詞：堿地蒲公英；愈傷組織；誘導

蒲公英屬菊科多年生草本植物。頭狀花序，種子上有白色冠毛結(jié)成的絨球。蒲公英植物體中含有蒲公英醇、蒲公英素、膽堿、有機酸、菊糖等多種健康營養(yǎng)成分，有利尿、緩瀉、退黃疸、利膽等功效。同時其有豐富的營養(yǎng)價值，可生吃、炒食、做湯，是藥食兼用的植物。

植物組織培養(yǎng)也叫離體培養(yǎng)是指在無菌條件下，將離體的植物器官、組織、細胞以及原生質(zhì)體，培養(yǎng)在人工控制的環(huán)境里，使其再生形成完整的植株。20世紀以來，組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于各種植物，但是有關(guān)蒲公英的組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)公開報道的尚少，本文通過對堿地蒲公英愈傷組織的誘導條件進行比較研究，為其進行品質(zhì)改良提供新的途徑和方法，為應(yīng)用生物技術(shù)培育高品質(zhì)的新品種提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

本實驗所用的蒲公英種子采自黑河學院校園。

1.2 實驗步驟

選取生長狀態(tài)良好的蒲公英種子苗的幼嫩葉片為外植體，經(jīng)過常規(guī)消毒后（70%酒精表面滅菌30s、0.1%HgCl2溶液振蕩3min，無菌水沖洗4次），接種到愈傷組織誘導培養(yǎng)基中。

1.3 愈傷組織誘導

3 結(jié)束語

蒲公英的組織培養(yǎng)工作已有報道，但真正系統(tǒng)的研究并不多見。Song[6]等（1991）以MS+0.2mg/LIAA+1mg/LTDZ為培養(yǎng)基，以葉柄為外植體對蒲公英（Taraxacum mongolicumHand-Mazz）進行組織培養(yǎng)，建立了快速高效的再生系統(tǒng)。陳華等[7]將藥用蒲公英（Taraxacum officinale F.H.Wigg）葉片接種于上述培養(yǎng)基上，也取得了十分理想的結(jié)果。

文章的研究結(jié)果表明6-BA加適量的NAA對蒲公英愈傷組織的誘導和愈傷組織在繼代培養(yǎng)過程中分化能力的保持具有重要的作用。愈傷組織誘導時，需要相對較高濃度的6-BA和相對濃度高一點的NAA，而在繼代培養(yǎng)和分化誘導時則需降低培養(yǎng)基中6-BA和NAA的濃度。

參考文獻

[1]Chan SW， et al.Nat Rev Genet.2005，6 （5）：351-60.

[2]Kidwell KK， Osborn T C.Simple plant DNA isolation procedures， In Plant genomes：methods for genetic and physical mapping[M].J.S.Beckman and T.C.Osborn，eds Dordrecht，The Netherlands： Kluwer Academic Publishers，1992：1-13.

[3]Meyer P， Niedenhof I， Ten L M. Evidence for cytosine methylation of non-symmetrical sequence in transgenic Petunia hybrida[J].The EMBO Journal，1994，13：2084-2088.

[4]Ulian E C， Magill J M， Magill C W， et al.DNA methylation and expression of NPTII in transgenic petunias and progeny[J].Theoretical and Applied Genetics，1996，92：976-981.

[5]Rossi V， Motto M， Pellegrini L.Analysis of the methylation pattern of the maize Opaque-2（O2） promoter and in vitro binding studies indicate that the O2 B-Zip protein and other endosperm factors can bind to methylated target sequences[J].Journal of Biological Chemistry，1997，272：13758-13765.

[6]Song Y H，Chua N H，Wong P F.Tissue culture and genetic transformati -on of dandelion[J].Acta Horticulture，1991，2：261-262.

[7]陳華，李銀心.蒲公英研究進展和用生物技術(shù)培育耐鹽蒲公英展[J].植物學通報，2004，21（1）：19-25.

[8]Kaeppler S M and Phillips R L.Tissue culture-induced DNA methylation variation in maize[J].Proc. Natl. Acad.Sci.USA，1993，90：8773-8776.

[9]Smulders MJM，Rus-Kortekaas W， Vosman B.Tissue culture-induced DNA methylation polymorphisms in repetitive DNA of tomato calli and regenerated plants[J].Theor Appl Genet，1995， 91：1257-1264.

[10]Kaeppler S M，Kaeppler H F， Rhee Y. Epigenetic aspects of somaclonal variation in plants[J]. Plant Mol Biol，2000，43：179-188.