鐘毓

【中圖分類號(hào)】R378.11 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1004-7484（2014）06-3532-01

金黃色葡萄球菌是造成人類食物中毒的常見(jiàn)致病菌。近年來(lái)，我國(guó)由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事件在全國(guó)已占據(jù)第四位。金葡腸毒素是金黃色葡萄球菌食物中毒的主要因子，它是一類結(jié)構(gòu)相關(guān)、毒力相似、抗原性不同的胞外蛋白質(zhì)，共有腸毒素A-E、G-R共17個(gè)血清型。據(jù)報(bào)道，攝入1ug/kg的金葡腸毒素即能引起嘔吐和腹瀉等癥狀，嚴(yán)重者可致昏迷有生命危險(xiǎn)[1]?！镀咸亚蚓澄镏卸镜脑\斷標(biāo)準(zhǔn)、判定原則和處理原則（WS/T 80-1996）》中規(guī)定“從中毒食品、患者吐瀉物中經(jīng)培養(yǎng)檢出金黃色葡萄球菌，菌株經(jīng)腸毒素檢測(cè)證實(shí)在不同樣品中檢出同一型別腸毒素?！辈拍芘袛嗍怯纱耸澄镆鸬氖澄镏卸?。因此，準(zhǔn)確、快速的檢測(cè)金葡腸毒素能為因金黃色葡萄球菌引起的食品安全事故處理提供重要依據(jù)?，F(xiàn)就金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測(cè)方法研究進(jìn)展作一綜述。

1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

生物學(xué)試驗(yàn)是較早采用的一種金黃色葡萄球菌腸毒素檢測(cè)方法。通常采用染毒食品或分離的產(chǎn)腸毒素的菌株培養(yǎng)液喂飼敏感動(dòng)物，或用腹腔注射及皮膚試驗(yàn)，然后觀察動(dòng)物可能出現(xiàn)的各種異常的生理或形態(tài)變化，這是測(cè)定食物中腸毒素較早采用的一種方法。由于試驗(yàn)動(dòng)物對(duì)腸毒素不敏感或感應(yīng)性差，無(wú)特異性，且易產(chǎn)生假陽(yáng)性，實(shí)用價(jià)值低，目前基本不采用。

2放射免疫法（RIA）

經(jīng)典放射免疫分析是采用標(biāo)記抗原（Ag*）和非標(biāo)記抗原（Ag）競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合定量抗體（Ab）的方法。Ag*和Ag結(jié)合抗體的能力相同，可形成Ag*Ab復(fù)合物和Ag Ab復(fù)合物。當(dāng)Ag*定量同時(shí)限制抗體濃度。且Ag*和Ag的量大于抗體的結(jié)合數(shù)目時(shí)，Ag*和Ag通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)方式與抗體結(jié)合。隨著非標(biāo)記抗原的增加標(biāo)記抗原與抗體的結(jié)合機(jī)會(huì)減少，形成Ag* Ab復(fù)合物減少，從而放射量也降低。RIA法將同位素測(cè)定的高靈敏性和抗原抗體反應(yīng)的高度特異性有效結(jié)合起來(lái)，特異性強(qiáng)，敏感性高，檢測(cè)樣品中各型SE可達(dá)1ng/mL。[2]。但該方法存在放射性污染和需要專門(mén)的防護(hù)設(shè)備、檢測(cè)儀器等問(wèn)題，也不易推廣。

3酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

ELISA方法基本原理是將抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，檢測(cè)時(shí)將樣品和酶標(biāo)抗原或抗體與結(jié)合在固相載體上的抗原或抗體結(jié)合形成復(fù)合物，反應(yīng)終止，結(jié)合在固相載體上的酶標(biāo)抗原或抗體量與標(biāo)本中待測(cè)抗原或抗體量相關(guān)，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合物，然后加入底物顯色，結(jié)合物中的酶水解底物，生成有色的反應(yīng)物，根據(jù)顏色的深淺，進(jìn)行檢測(cè)，即可確定被測(cè)物含量。目前較常用的有微孔板法（ELISA）和酶聯(lián)熒光免疫法（EIFA）。

3.1酶聯(lián)熒光免疫法（EIFA），其原理是將鼠抗葡萄球菌腸毒素單克隆抗體SEA-E同時(shí)包被在固相容器（SPR）上，通過(guò)樣品在SPR內(nèi)定時(shí)循環(huán)，樣品中的腸毒素與多個(gè)抗體結(jié)合，未結(jié)合的樣品則被洗去?？贵w-堿性磷酸酶復(fù)合物通過(guò)SPR循環(huán)并與SPR壁上的相應(yīng)腸毒素抗原結(jié)合，最后洗去未結(jié)合復(fù)合物。熒光底物在SPR內(nèi)外反復(fù)循環(huán)，SPR上存留的酶催化底物分解為熒光底物。本法可采用自動(dòng)化VIDAS設(shè)備的光掃描儀在450nm處自動(dòng)測(cè)定熒光強(qiáng)度。[3]

3.1微孔板法（ELISA）與酶聯(lián)熒光免疫法（EIFA）的檢測(cè)原理相似，均為雙抗體夾心法。不同之處在于，微孔法所用的酶底物是顯色酶底物而非熒光酶底物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果是通過(guò)顏色變化來(lái)判斷。

4聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)

聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)是通過(guò)DNA聚合酶擴(kuò)增基因?yàn)闄z測(cè)特異基因片斷提供了可能性。PCR模擬DNA的自然復(fù)制過(guò)程，引物與DNA模板互補(bǔ)結(jié)合以后，在DNA聚合酶的作用下，按照堿基配對(duì)的原則，從引物開(kāi)始合成與模板DNA互補(bǔ)的DNA鏈。經(jīng)變性、退火，延伸等一次循環(huán)，DNA鏈數(shù)量增加一倍。目前較為常用的有定性PCR和熒光定量PCR法兩種。熒光PCR技術(shù)在普通PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累檢測(cè)整個(gè)PCR反應(yīng)的進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量。[4]

總之，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法由于靈敏度低，結(jié)果不準(zhǔn)確，已經(jīng)逐漸不為采用。目前，金葡腸毒素的檢測(cè)方法主要有微孔析法（ELISA）、酶聯(lián)熒光免疫法（ELFA）、PCR法和熒光PCR法。前兩種方法的檢測(cè)對(duì)象是金葡菌產(chǎn)生的腸毒素蛋白質(zhì)，后兩種方法則是檢測(cè)菌株的腸毒素基因。ELFA法具有靈敏度高，對(duì)樣品中金葡菌被熱處理破壞時(shí)，對(duì)熱穩(wěn)定的腸毒素仍能檢出。熒光PCR法的優(yōu)勢(shì)在于可以分型、試劑便宜、操作簡(jiǎn)單、無(wú)需專用儀器。在檢測(cè)工作中，可以根據(jù)各自的儀器設(shè)備條件以及相應(yīng)技術(shù)選擇適當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法。

參考文獻(xiàn)

[1][3][4]王冰，黎桂蓮，陳妙玲，等.3種金黃色葡萄球菌腸毒素檢測(cè)方法的評(píng)估[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2013，23（2）：359-362.

[2]梁毅珊.金黃色葡萄球菌腸毒素及其檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2008，8（9）：1658-1659.