孫旭

摘 要：目的 調(diào)查我院婦科門診18～60歲女性宮頸人乳頭瘤病毒（HPV）感染的情況，確定本地區(qū)的主要感染型別。方法 采用人乳頭瘤病毒分型基因芯片檢測系統(tǒng)對527例女性進行23種HPV基因型檢測，分析宮頸病變中HPV亞型感染分布特點。結(jié)果 在被調(diào)查的527例女性中HPV感染總陽性率為43.8%（231/527），單項感染占陽性感染的60%（139/231），其中，低危感染占陽性感染的35%（81/231），高危感染占陽性感染的25%（58/231），高低危混合感染占陽性感染的40%（92/231）。主要感染型別為6、11、43、16、58和56，占單項及混合感染率為：6型占35.9%；11型占18.7%；43型占18.7%；16型占16.6%；58型占15.7%；56型占10.5%。結(jié)論 本地區(qū)HPV型別感染分布以6、11、43、16和58型感染為主。

關(guān)鍵詞：人乳頭瘤病毒 宮頸癌

中圖分類號：R442 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2014）08（c）-0226-01

人乳頭瘤病毒（human papillomavrius，HPV）是一種雙鏈DNA病毒，具有球形外殼，直徑約55 nm，主要感染皮膚粘膜上皮，導(dǎo)致不同病變。大量流行病學(xué)研究已證實，HPV的感染與子宮頸癌的關(guān)聯(lián)最為密切，高危型HPV持續(xù)感染是發(fā)生子宮頸癌的重要原因。HPV感染檢測是篩查和預(yù)防宮頸癌的必要手段。

1 資料和方法

1.1 資料

（1）病例來源：2011年10月至2014年7月在我院婦科門診就診行HPV檢測的女性527例（年齡18～60歲）。

（2）標本采集：采用一次性宮頸脫落細胞采集器，暴露宮頸，用棉拭子擦去宮頸口過多的分泌物。將采集器置于宮頸口，單向旋轉(zhuǎn)4～5周，慢慢抽出。將采集器放入細胞保存液中，沿柄刷折痕處折斷。旋緊管蓋，做好標識，直立放置。冷凍保存。

（3）儀器與試劑：人乳頭瘤病毒基因分型檢測試劑盒Ⅰ和Ⅱ（亞能生物技術(shù)深圳有限公司），Hema9600PCR儀（珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司）。FYY-3型分子雜交儀（江蘇省興化市分析儀器廠）。

1.2 方法

（1）DNA提取：洗脫→離心（13000 rpm）→（去上清）加液→裂解→離心（13000 rpm）→保存（保留上清液即DNA，待用），注：樣本DNA，24 h內(nèi)4 ℃保存，長期-20 ℃保存。

（2）PCR擴增：編號→離心（5000 rpm，2 s）→加樣（5 ul待測DNA加到PCR管內(nèi)）→離心（5000 rpm，2 s）→擴增。擴增條件50℃15 min；95℃10 min；以下為，40個循環(huán)：94℃30 sec，42 ℃90sec，72 ℃30 sec；72℃5 min；4 ℃HOLD。注：PCR儀需熱蓋加熱；PCR產(chǎn)物可于4 ℃或-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

（3）雜交檢測：備膜（膜條編號并依次放入15 ml離心管中）→加液（5～6 mlA液及對應(yīng)編號的PCR產(chǎn)物加入離心管）→變性（離心管沸水浴10 min）→雜交（迅速取出離心管，放入雜交箱雜交；同時將50 mlB液管放入雜交箱預(yù)熱，要求51℃，≥1.5 h且<4 h）→洗膜（膜條放入B液管，且≤4張條/管，置于雜交箱輕輕洗滌）→孵育（放入配好孵育液中孵育30 min）→搖洗（膜條放入盛有A液的洗滌盒中，室溫浸泡搖洗2次，5 min/次）→洗膜（膜條放入C液中，室溫洗膜1次，1～2 min）→顯色（現(xiàn)配顯色液，避光顯色≥30 min）→判讀（清水漂洗1次，判讀結(jié)果）→保存（4 ℃保存膜條）。

2 結(jié)果

在被調(diào)查的527例女性中HPV感染總陽性率為43.8%（231/527），單項感染占陽性感染的60%（139/231），其中，低危感染占陽性感染的35%（81/231），高危感染占陽性感染的25%（58/231），高低?；旌细腥菊缄栃愿腥镜?0%（92/231）。主要感染型別為6、11、43、16、58和56，占單項及混合感染率為：6型占35.9%；11型占18.7%；43型占18.7%；16型占16.6%；58型占15.7%；56型占10.5%。

3 討論

宮頸癌是全球婦女中僅次于乳腺癌和結(jié)直腸癌的第3個常見的惡性腫瘤，在發(fā)展中國家是僅次于乳腺癌居第2位常見的惡性腫瘤，是最常見的女性生殖道惡性腫瘤。也是目前唯一一個病因明確的婦科惡性腫瘤，與高危型人乳頭瘤病毒（human papillomaviruses，HPV）的持續(xù)感染相關(guān)。臨床HPV檢測對于發(fā)現(xiàn)宮頸癌高?；颊咴缙诜乐斡兄匾饬x。

人乳頭瘤病毒分型基因芯片檢測系統(tǒng)采用PCR-反向點雜交法，一次雜交反應(yīng)可以檢測多種靶序列。PCR技術(shù)特點是具有高度的靈敏性（PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的）；反向點雜交技術(shù)具有高特異性、高通量，固定化探針，一次雜交即可檢測多種靶序列，可同時分型檢測23種HPV基因型，包括18種高危型：16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，73，83 ，MM4；5種低危型：6，11，42，43，44。

本文利用人乳頭瘤病毒分型基因芯片檢測系統(tǒng)對本院婦科門診的女性進行HPV感染型別篩查，從檢測結(jié)果調(diào)查中可見6、11、43、16和58型別較其它亞型檢出例明顯增高，可見本地區(qū)以6、11、43、16和58型別感染為主。

持續(xù)感染高危型HPV的女性，是宮頸癌的高發(fā)人群。子宮頸的癌前病變（CIN）到癌是一個相對較長時間的過程，即宮頸感染HPV→宮頸持續(xù)感染HPV→CIN→原位癌→早期浸潤癌→浸潤癌，研究表明要經(jīng)歷10年左右時間。目前，我國生活水平和醫(yī)療保健意識不斷提，這對減少宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有積極的意義。HPV檢測是篩查預(yù)防宮頸癌早診早治的關(guān)鍵。

HPV感染有一定的地域性，感染亞型存在一定的地域差別。本地區(qū)在被調(diào)查的527例女性中HPV感染總陽性率為43.8%，以6、11、43、16和58型別感染為主。HPV亞型根據(jù)地域人口分布的復(fù)雜性，地域差別較大，感染趨勢有向多向性發(fā)展的方向，本次HPV感染所獲得的資料可為本地區(qū)宮頸癌防治提供參考數(shù)據(jù)。

參考文獻

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