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        串聯(lián)質(zhì)譜檢測氨基酸和酰基肉堿的室間質(zhì)量評價

        2014-10-17 09:31:58何法霖高振翔王治國
        中國醫(yī)藥導報 2014年20期
        關鍵詞:及格率肉堿?;?/a>

        何法霖 高振翔 王 薇 鐘 堃 王治國

        北京醫(yī)院衛(wèi)生部臨床檢驗中心,北京 100730

        自1963年利用枯草桿菌抑制試驗進行新生兒苯丙酮尿癥的篩查以來[1],經(jīng)過40多年的發(fā)展,新生兒篩查的概念被普遍認可;篩查技術越來越先進,篩查的方法也越來越靈敏、可靠。我國新生兒篩查工作起步較晚,自1980年代起開始進行遺傳代謝病的新生兒篩查,1995年將新生兒篩查工作納入母嬰保健法,使開展新生兒篩查工作有了根本保障。但是篩查的病種有限,主要為苯丙酮尿癥和先天性甲狀腺功能減退癥,納入遺傳代謝病較多依賴生化與分子生物學方法,對技術和設備的要求較高,往往是臨床診治難點。隨著人類疾病譜的改變和對出生缺陷的重視,近年國際上開展的串聯(lián)質(zhì)譜技術檢測病種多,可在2 min內(nèi)檢測出45種遺傳代謝病,適合大規(guī)模遺傳代謝病篩查和臨床疑似患兒的診斷性檢測[2-4]。目前我國越來越多的實驗室使用串聯(lián)質(zhì)譜開展新生兒篩查工作。鑒于此,衛(wèi)生部臨床檢驗中心選取了部分開展新生兒篩查的實驗室對新生兒遺傳代謝病串聯(lián)質(zhì)譜檢測氨基酸和酰基肉堿項目進行室間質(zhì)量評價調(diào)查。

        1 對象與方法

        1.1 室間質(zhì)量調(diào)查對象

        2013年選取開展新生兒篩查的實驗室19家,為三甲綜合醫(yī)院醫(yī)院和三甲??漆t(yī)院臨床實驗室。

        1.2 室間質(zhì)控品的遞送和批號

        通過特快專遞方式向19家實驗室郵寄5個不同批號血斑質(zhì)控品。質(zhì)控品由杭州寶榮公司提供,批號分別為 201311、201312、201313、201314、201315。

        1.3 樣本處理方法及回報結果注意事項

        質(zhì)評物需在2~8℃條件下保存,將質(zhì)評物當作患者標本進行測定,結果填入對應批號回報表中?;貓蠼Y果的同時填報使用的測定方法、儀器和試劑名稱。

        1.4 評價項目

        氨基酸包括瓜氨酸(Cit)、亮氨酸(Leu)、甲硫氨酸 (Met)、 苯 丙 氨 酸 (Phe)、 酪 氨 酸 (Tyr) 和 纈 氨 酸(Val);酰基肉堿包括游離肉堿(C0)、丙酰肉堿(C3)、異戊酰肉堿(C5)、辛酰肉堿(C8)、月桂酰肉堿(C12)、棕櫚酰肉堿(C16)、十八碳酰肉堿(C18)。

        1.5 評價標準

        2013年參加新生兒遺傳代謝病串聯(lián)質(zhì)譜氨基酸和酰基肉堿檢測項目調(diào)查的實驗室共19家,實際回報結果的單位為18家,有1家實驗室因質(zhì)控品丟失未回報結果,回報率為94.7%?;貓蠼Y果按方法學原理(衍生方法和非衍生方法)同時考慮是否是配套試劑分組,以分組后除外x±3s后的中位數(shù)作為靶值[5-6]。氨基酸項目評價標準:靶值±25%;?;鈮A項目評價標準:靶值±30%。

        2 結果

        2.1 氨基酸和酰基肉堿結果

        選取高、中、低濃度的3個批號(201311、201313、201315)分別按照方法學原理同時考慮是否配套試劑分組統(tǒng)計見表1、2。

        氨基酸項目按方法分組的統(tǒng)計結果,18家回報結果的實驗室有14家實驗室采用衍生方法不配套的試劑盒,有3家采用衍生方法配套的試劑盒,只有1家實驗室采用非衍生的方法。其中,瓜氨基酸項目的變異系數(shù)分布在1.52%~25.01%;亮氨酸項目的變異系數(shù)分布在2.93%~24.66%;甲硫氨酸項目的變異系數(shù)分布在7.83%~43.00%;苯丙氨酸項目的變異系數(shù)分布在1.68%~29.67%;酪氨酸項目的變異系數(shù)分布在1.60%~35.09%;纈氨酸項目的變異系數(shù)分布在6.62%~52.18%。數(shù)據(jù)顯示實驗室檢測氨基酸一致性好變異系數(shù)基本在40%內(nèi)。

        ?;鈮A的統(tǒng)計結果可以看出,18家實驗室中有14家實驗室采用衍生非配套的試劑檢測?;鈮A,有3家實驗室采用衍生配套的試劑檢測?;鈮A,有1家實驗室采用非衍生的方法檢測?;鈮A。其中,游離肉堿項目變異系數(shù)分布在4.31%~61.40%;丙酰肉堿項目變異系數(shù)分布在5.31%~78.69%;異戊酰肉堿項目變異系數(shù)分布在16.29%~64.29%;辛酰肉堿項目變異系數(shù)分布在4.81%~80.00%;月桂酰肉堿項目變異系數(shù)分布在8.12%~55.56%;棕櫚酰肉堿項目變異系數(shù)分布在5.75%~34.78%;十八碳酰肉堿項目變異系數(shù)分布在3.64%~19.17%。數(shù)據(jù)顯示實驗室檢測酰基肉堿的一致性不好。

        2.2 按方法學分組計算各組及格率

        以項目的中位數(shù)為靶值,測定值在靶值±30%內(nèi)判定為及格。氨基酸項目及格率統(tǒng)計結果中瓜氨酸項目及格率為71.4%~100.0%,亮氨酸項目的及格率為71.4%~100.0%,甲硫氨酸項目的及格率為42.5%~100.0%,苯丙氨酸項目及格率為71.4%~100.0%,酪氨酸項目及格率為71.4%~100.0%,纈氨酸項目的及格率為66.7%~100.0%。?;鈮A及格率統(tǒng)計結果中游離肉堿項目的及格率為42.9%~100.0%,丙酰肉堿項目的及格率為28.6%~100.0%,異戊酰肉堿項目的及格率為33.3%~92.9%,辛酰肉堿項目的及格率為28.6%~100.0%,月桂酰肉堿項目的及格率為46.2%~100.0%,棕櫚酰肉堿項目的及格率為64.3%~100.0%,十八碳酰肉堿項目的及格率為71.4%~100.0%。結果表明,各氨基酸項目成績好于?;鈮A結果的成績。

        3 討論

        從調(diào)查結果看出,串聯(lián)質(zhì)譜檢測氨基酸和?;鈮A大都采用衍生的方法,同時大部分的實驗室都沒有使用配套的試劑,從本次調(diào)查結果看使用配套試劑的3家實驗室變異系數(shù)較小,但是由于配套試劑的實驗室數(shù)較少,所以不能說明配套試劑比非配套試劑檢測結果更具有一致性。結果還能看出,氨基酸檢測結果的一致性比?;鈮A好,及格率較高,這可能與建立的方法有關。MS/MS與以前大多數(shù)篩查實驗室所采用的系統(tǒng)是完全不同的技術。它具有多種用途、較復雜的系統(tǒng),基于疾病篩查的特殊性建立方法時應該注意3個方面[7-9]:①方法的確認,主要是對本室建立的方法進行特異性、重復性、精密度和準確性、線性、干擾實驗、基質(zhì)效應考核。②性能驗證,建立方法并確認后,可取一定數(shù)量已知含量的樣本進行分析,驗證方法的準確性,或者通過比對實驗來考核。③建立并確認截斷值。通過分析正?;颊叩母裳邩吮窘⒎治鑫锏慕財嘀?,同時必須考慮方法和儀器的參數(shù)以及可接受的假陽性結果的數(shù)量。

        表1 各氨基酸按方法分組統(tǒng)計結果

        串聯(lián)質(zhì)譜檢測在遺傳代謝病篩查的應用具有很重要的社會效益和經(jīng)濟效益,一次性檢測30~50種氨基酸、有機酸、脂肪酸代謝病等多種疾病,其科學性、臨床價值和社會意義有目共睹,而質(zhì)量控制方面還有待提高。為了保證檢驗結果一致性,實驗室需要做好室內(nèi)質(zhì)量控制[10-13]:使用前需優(yōu)化串聯(lián)質(zhì)譜儀自身參數(shù),使其具有較高的分辨率和靈敏度;長時間的關機開機,離子源的噴霧針及進樣孔容易堵塞,需要定期檢測調(diào)試;樣品的處理過程也會對檢驗結果產(chǎn)生很大的影響,比如內(nèi)標試劑的配制及每次樣品吹干時的氣流,氨基酸較難溶于甲醇,配制時需超聲足夠的時間,衍生化的過程可能會導致某些代謝物或內(nèi)標的降解(如谷氨酰胺脫氨基轉(zhuǎn)化為谷氨酸);另外,良好的實驗環(huán)境、嚴格的實驗室管理制度保證工作人員各司其職、重視預防性質(zhì)控(如優(yōu)選試驗方法、建立操作規(guī)程、儀器的調(diào)式和校正、試劑的標定、標本的正確處理、遵章操作、準確計算、做好實驗記錄等)、重視工作人員的業(yè)務培訓和考核等也有利于保證結果的準確。

        表2 ?;鈮A按方法分組統(tǒng)計結果

        我國疆域遼闊,地域發(fā)展不平衡,實驗室的質(zhì)量控制水平也參差不齊,目前部分發(fā)達地區(qū)的實驗室參加美國CDC的室間質(zhì)評,并且加強對實驗室管理,而一些實驗室則只關注新技術新方法卻缺乏相關質(zhì)量控制知識并且未開展實驗室間的比對。另一方面,衛(wèi)生部臨床檢驗中心計劃增加串聯(lián)質(zhì)譜檢測氨基酸和?;鈮A的室間質(zhì)評項目,此舉無疑會提高我國遺傳代謝病的研究領域整體水平。

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