朱黎霞 王利勝 張英豐

1.南方醫(yī)科大學珠江醫(yī)院中醫(yī)科，廣東廣州 510282；2.廣州中醫(yī)藥大學中藥學院，廣東廣州 510006

隨著生活水平的提高和生活方式的轉(zhuǎn)化，高脂血癥在臨床中呈現(xiàn)多發(fā)性、低齡化趨勢[1]。丹參和山楂是臨床常用的降脂藥對[2-4]，對高脂血癥確有療效，丹參總酚酸[5-7]、山楂總黃酮[8-9]是降脂的主要物質(zhì)基礎。對中藥復方而言，配伍和劑量決定了臨床療效。

中藥組分配伍是當前研究的熱點。組分配伍從臨床出發(fā)，遵循傳統(tǒng)方劑配伍理論與原則，保持組分配伍的中醫(yī)特色，針對有限適應證，降低方劑研究的難度[10-11]。本文在丹參、山楂臨床用量的基礎上，采用基線等比增減設計法重組丹參總酚酸、山楂總黃酮劑量，以高脂血癥大鼠為模型動物，探討不同組分配伍對高脂血癥大鼠血脂、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）的影響，為研發(fā)出“安全、有效、穩(wěn)定、可控”的現(xiàn)代中藥制劑奠定基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Anke TDL-40B離心機 （上海安亭科學儀器廠），羅氏P800全自動生化分析儀（瑞士羅氏儀器中心）。

1.2 藥物及試劑

丹參總酚酸（自制，采用60%乙醇回流提取法結合大孔樹脂精制，經(jīng)紫外分光光度法測定總酚酸含量61.23%）。山楂總黃酮（自制，采用乙醇回流提取結合大孔樹脂純化，經(jīng)紫外分光光度法測定總黃酮含量71.25%）。MDA、SOD檢測試劑盒（均購自南京建成生物工程研究所）。高脂飼料 （膽固醇4.0%，豬油10.0%，丙基硫氧嘧啶0.2%，膽酸鈉0.3%，基礎飼料85.5%，委托飼料廠商生產(chǎn)）。阿托伐他?。ㄉ唐访⑵胀?，10 mg/片，美國輝瑞制藥公司）。

1.3 實驗動物

清潔級 SD 大鼠，雌雄各半，體重（230±10）g，廣州中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供，動物合格證號SCXK2008-0020。

2 方法與結果

2.1 丹參總酚酸和山楂總黃酮組分配伍設計

根據(jù)丹參、山楂的臨床用量，活性部位轉(zhuǎn)移率結合前期藥效初篩，確定丹參-山楂組分總有效劑量為120 mg/kg。在總量恒定的前提下以120 mg/kg為配伍基線，丹參總酚酸以25%遞減，山楂總黃酮以25%遞增向極點擴展，依次做為組分配伍比例。復制高脂血癥大鼠模型，評價不同配伍對高脂血癥大鼠血脂的影響。組分配伍見表1。實驗前，有效組分均分散于0.5%羧甲基纖維素鈉溶液內(nèi)形成混懸液，灌胃給藥。

表1 丹參總酚酸、山楂總黃酮組分配伍表

2.2 分組及給藥

80只SD大鼠適應性喂養(yǎng)1周后，隨機分為8組，每組10只，雌雄各半。整個實驗周期內(nèi)正常組予以普通飼料喂養(yǎng)，丹參、山楂配伍 A、B、C、D、E 組和立普妥（降脂陽性對照組）組均給予高脂飼料（35 g/d）。丹參山楂配伍組分別按表1所設劑量灌胃給藥，立普妥組按2.2 mg/kg灌胃給藥，正常組和模型組均給予等體積生理鹽水。開始給予高脂飼料15 d后各組分別灌胃給藥[12-13]。連續(xù)給藥至第30天，各組大鼠腹主動脈取血，分離血清，檢測血清總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）及MDA、SOD活性，并計算動脈粥樣硬化指數(shù)（TC/HDL-C）。實驗過程中，每周稱重1次，根據(jù)動物體重調(diào)整藥物劑量。

2.3 統(tǒng)計學方法

采用統(tǒng)計軟件SAS 9.0對實驗數(shù)據(jù)進行分析，計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（±s）表示，進行單因素方差分析（ANOVA），組間兩兩比較采用LSD-t檢驗；兩組間比較采用t檢驗。計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2.4 結果

2.4.1 丹參總酚酸、山楂總黃酮不同配伍比例對高脂血癥大鼠血清TC和脂蛋白的影響 采用高脂飼料復制高脂血癥大鼠模型，模型組大鼠TC、TG、LDL-C、TC/HDL-C顯著升高，具有典型的脂質(zhì)代謝紊亂狀態(tài)，和正常組相比，差異有高度統(tǒng)計學意義 （P<0.01）。丹參酚酸和山楂黃酮按不同比例配伍后均可明顯降低 TC、TG、LDL-C、TC/HDL-C 水平， 提高HDL-C水平。丹參酚酸、山楂黃酮在配伍比例接近時降脂效果明顯優(yōu)于其他組，說明丹參和山楂具有協(xié)同降脂作用。見表2。

表2 丹參總酚酸、山楂總黃酮配伍對高脂血癥大鼠血脂的影響（±s，n=10）

表2 丹參總酚酸、山楂總黃酮配伍對高脂血癥大鼠血脂的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01；TC：總膽固醇；TG：三酰甘油；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇；TC/HDL-C：動脈粥樣硬化指數(shù)

組別 TC（mmol/L）TG（mmol/L）HDL-C（mmol/L）LDL-C（mmol/L） TC/HDL-C正常組模型組A組B組C組D組E組立普妥組1.45±0.27 5.98±0.53**4.83±0.44#4.46±0.41##3.97±0.23##4.17±0.31##4.96±0.28#2.29±0.46##0.69±0.14 1.27±0.36**0.93±0.12#0.89±0.10##0.75±0.19##0.87±0.27##0.92±0.13#0.74±0.09##0.91±0.11 0.58±0.09**0.64±0.15 0.69±0.19 0.72±0.11#0.83±0.07##0.77±0.09##0.95±0.11##0.91±0.11 0.58±0.09**0.64±0.15 0.69±0.19 0.72±0.11#0.83±0.07##0.77±0.09##0.95±0.11##1.59±0.22 10.31±0.42**7.54±0.59**6.46±0.75**5.51±0.48**5.02±0.27**6.44±0.34**2.41±0.40**

2.4.2 丹參總酚酸、山楂總黃酮不同配伍比例對高脂血癥大鼠血清SOD、MDA水平的影響 與正常組相比，高脂模型組SOD活性明顯降低（P<0.01），MDA水平顯著升高（P<0.01）。丹參、山楂的不同配伍均可升高SOD水平，降低MDA水平，而具有顯著的抗氧化活性。在不同配伍組中，山楂黃酮比例越高，抗氧化活性越好。但單用山楂總黃酮或單用丹參總酚酸，效果反而不如配伍組。見表3。

表3 丹參總酚酸、山楂總黃酮配伍對高脂血癥大鼠血清SOD、MDA 水平的影響（±s，n=10）

表3 丹參總酚酸、山楂總黃酮配伍對高脂血癥大鼠血清SOD、MDA 水平的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01；SOD：超氧化物歧化酶；MDA：丙二醛

組別 SOD（U/mL） MDA（nmol/mL）正常組模型組A組B組C組D組E組立普妥組246.78±33.27 137.56±23.43**189.55±49.56##209.67±20.89##212.56±30.64##230.08±27.94##195.67±17.56##235.13±25.34##5.63±0.54 9.69±0.69**7.81±0.78#7.13±0.37##6.01±0.45##6.53±0.64##7.29±0.40##6.07±0.51##

3 討論

中藥復方既有藥味數(shù)目的不同，又有劑量的變化，更內(nèi)含比例的差異，功能主治、作用范圍、適應病證、療效機制等隨配伍變化而變化，構成“彼此協(xié)同、相互制約”的有機體。在病證結合、理法方藥一致的條件下，通過成分群介導的多靶點、多環(huán)節(jié)、多途徑的整合調(diào)節(jié)作用而發(fā)揮整體效應。

中藥復方配伍后會產(chǎn)生物理、化學、生物等多方面變化。成分群數(shù)、量、比例的相對變化是配伍的物質(zhì)基礎，色澤、氣味等物理狀態(tài)是配伍的外在表現(xiàn)，藥理效應、毒副作用、臨床適應證、功能主治是配伍的終極目標，成分群體內(nèi)吸收、分布、代謝、排泄等環(huán)節(jié)是配伍與藥效的必要路徑。配伍是“因”，藥效是“果”，因果之間的內(nèi)在聯(lián)系可借助于配伍產(chǎn)生的物理、化學、生物變量，采用信息學手段予以闡明。

實驗設計、數(shù)理統(tǒng)計學在配伍機制研究中起重要作用。方劑配伍的實驗設計多是從配伍前后的藥理效應或化學成分變化作為評價指標，利用數(shù)學統(tǒng)計方法探討方劑配伍模式（如正交設計、均勻設計、聚類分析、主成分分析、多目標優(yōu)化的ED/NM/MO三聯(lián)法[14]）。如譚曉梅等[15]和賀豐等[16]用正交設計法系統(tǒng)研究了配伍對葛根芩連湯中系列成分含量及人體內(nèi)過程的影響等。鐘志勇等[17]用多指標正交設計合并線性回歸法探討芍藥甘草湯的最佳配伍。

本文采用基線等比增減設計法探討了丹參酚酸和山楂黃酮對高脂血癥大鼠模型血脂及SOD、MDA水平的影響。相比正交設計和均勻設計，等比增減設計非常適合藥效物質(zhì)基礎相對明確、藥味相對較少的小復方（或君藥、臣藥），根據(jù)研究目的以兩藥主要效應和次要效應為評價指標，通過綜合信息分析，進行各配伍的優(yōu)化篩選[18-19]。

丹參酚酸和山楂黃酮均是已知的較強的中藥抗氧化活性部位[20-21]。丹酚酸對超氧陰離子、羥自由基有很強的清除作用和抗脂質(zhì)過氧化作用。山楂黃酮具有提高抗氧化能力、減輕自由基損傷、促進體內(nèi)氧化-抗氧化系統(tǒng)平衡恢復等作用[22]。研究發(fā)現(xiàn)，單用丹參酚酸和單用山楂黃酮其降脂、抗氧化活性均不如配伍組，且丹參酚酸和山楂黃酮劑量接近時降脂、抗氧化效果最好，具有類似的趨勢，協(xié)同增效作用明顯，C、D組降脂、抗氧化活性明顯優(yōu)于其他組，具體機制尚有待深入研究。

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