徐詠梅，張 毅，余江梅，鄒團(tuán)標(biāo)，姚莉琴△（.德宏州婦幼保健院，云南德宏 678400；.云南省婦幼保健院，云南昆明 65005）

血紅蛋白病是由于珠蛋白基因突變或缺如而引起的單基因遺傳病，包括珠蛋白生成障礙性貧血（又稱地中海貧血，簡稱地貧）和異常血紅蛋白病兩大類［1］。云南省為血紅蛋白病高發(fā)區(qū)，在少數(shù)民族地區(qū)尤為多見［2］。為進(jìn)一步了解不同民族兒童血紅蛋白病發(fā)病特征，筆者于2009年6月至2011年9月對保山市漢族和分布于其他22個市（縣）的15種云南省獨有少數(shù)民族7歲以下兒童進(jìn)行了調(diào)查，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以保山市漢族和分布于其他22個市（縣）的15種云南省獨有少數(shù)民族7歲以下兒童為調(diào)查對象，包括常住人口和居住半年以上的非常住人口。當(dāng)父親或母親無法確認(rèn)民族時，以任意一方的民族確定調(diào)查對象的民族。

1.2 方法

1.2.1 抽樣方法 采用分層整群抽樣和典型調(diào)查相結(jié)合的抽樣方法。白族、哈尼族、傣族3個民族總?cè)丝诰^100萬［3］，按無限總體抽樣：n＝Ua2×π（1－π）／δ2，每個市（縣）隨機抽取1～2個鄉(xiāng)，再根據(jù)民族聚集情況隨機抽取數(shù)個自然村，每個民族樣本量均超過900例；佤族、拉祜族、納西族、傈僳族、景頗族5個民族總?cè)丝诰鶠?0～100萬［3］，按有限總體抽樣：Nc＝n／（1＋n／N），在每個市（縣）中隨機抽取上述少數(shù)民族人口數(shù)量在當(dāng)?shù)鼐用裰谐^70%的鄉(xiāng)1～2個，每個民族樣本量不少于500例（若n／N大于0.05，按上式對n進(jìn)行校正，求證Nc）；布朗族、基諾族、德昂族、阿昌族、普米族、怒族、獨龍族7個民族總?cè)丝诰蛔?0萬［3］，樣本量根據(jù)各民族聚集地實際情況而定，每個民族樣本量在350例左右（布朗族、基諾族、獨龍族均只有1個聚集鄉(xiāng)，居住于該地的7歲以下兒童全部納入本次調(diào)查）。分別隨機抽取保山市邊境縣和非邊境縣各1個，從當(dāng)?shù)鼐用裰须S機抽取7歲以下漢族兒童，樣本量不低于900例。各民族7歲以下兒童抽樣范圍及樣本量見表1。

1.2.2 實驗室檢測 （1）血細(xì)胞分析：采集調(diào)查對象乙二胺四乙酸二鉀（EDTA－K2）抗凝靜脈血2～4mL，于采血當(dāng)日采用KX－21N（日本SYSMEX）、XT－1800i（日本SYSMEX）、BC－2800（深圳邁瑞）、BC－2000（深圳邁瑞）等血細(xì)胞分析儀和配套試劑進(jìn)行血紅蛋白（Hb）、紅細(xì)胞（RBC）、紅細(xì)胞平均容積（MCV）、紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量（MCH）、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度（MCHC）、紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)（RDW－CV）等指標(biāo)檢測。（2）Hb電泳分析：血液學(xué)表型陽性的疑似地貧者（MCV＜80 fL和／或MCH＜27pg），采用pH8.6緩沖醋酸纖維薄膜及配套電泳掃描儀進(jìn)行Hb電泳分析（美國Helena）。根據(jù)電泳速度及成像結(jié)果顯示的條帶和位置對異常Hb分組，電泳速度快于HbA者判為快速異常Hb（包括HbH及HbJ），慢于HbA者判為慢速異常 Hb（包括 HbG、HbS及 HbE）［3］。

表1 各民族7歲以下兒童抽樣范圍及樣本量

1.2.3 質(zhì)量控制 （1）調(diào)查的質(zhì)量控制：統(tǒng)一課題設(shè)計、多中心協(xié)作；由省級調(diào)查隊成員對各地區(qū)工作人員進(jìn)行培訓(xùn)，省級調(diào)查隊成員全程參與調(diào)查和質(zhì)量控制；除血細(xì)胞分析儀配套試劑外的所有試劑均由省級調(diào)查隊統(tǒng)一購買后分發(fā)至各地調(diào)查組；所有資料均由云南省婦幼保健院錄入及分析。（2）血細(xì)胞分析質(zhì)量控制：各地確定所用分析儀后，提前比對校準(zhǔn)，校準(zhǔn)合格后用于檢測（以廠家校準(zhǔn)合格的分析儀作為標(biāo)準(zhǔn)，取新鮮血標(biāo)本對各地分析儀進(jìn)行比對校準(zhǔn)）。使用儀器配套試劑及質(zhì)控品，每日標(biāo)本檢測前、后進(jìn)行質(zhì)控檢測，結(jié)果在控時認(rèn)為標(biāo)本檢測結(jié)果有效；不在控時，及時進(jìn)行校準(zhǔn)后再行檢測。嚴(yán)格按照試劑及儀器說明書操作。確保所有標(biāo)本均為合格標(biāo)本。（3）Hb電泳質(zhì)量控制：各地采集標(biāo)本后及時送至云南省婦幼保健院，由專人進(jìn)行Hb電泳檢測。嚴(yán)格按試劑及儀器說明書操作。每次標(biāo)本檢測前均進(jìn)行配套質(zhì)控品檢測，質(zhì)控品檢測結(jié)果在控時進(jìn)行標(biāo)本檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用Epidata和SPSS15.0軟件建立數(shù)據(jù)庫和分析數(shù)據(jù)。采用人工及統(tǒng)計軟件兩種方式進(jìn)行數(shù)據(jù)審核、邏輯檢查和核對，采用箱式圖進(jìn)行離群值或異常值分析和處理。計數(shù)資料以百分率表示，采用趨勢χ2和四格表χ2檢驗進(jìn)行分析；多因素分析采用雙變量Logistic回歸分析及多重線性逐步回歸分析。P＜0.05為比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 一般情況 共納入調(diào)查兒童14 088例，因2例兒童資料不完整，未納入后續(xù)統(tǒng)計分析。最終確定納入統(tǒng)計分析的兒童14 086例，男7 208例，女6 878例。其中血液學(xué)表型陽性8 559例，基因分析確診561例（西雙版納州傣族β－地貧209例、α－地貧202例；新平縣花腰傣族β－地貧102例、α－地貧48例）。5例先征者家系分析顯示，父母為近親結(jié)婚162例，有遺傳家族史128例，雙胞胎57對。

表2 70例Hb電泳結(jié)果異常兒童分布

2.2 Hb電泳檢測結(jié)果 8 559例血液學(xué)表型陽性兒童中，共檢出異常血紅白蛋白病患兒70例，檢出率由高到低依次為德宏州（2.0%）、怒江州（1.8%）、玉溪市（1.0%）、西雙版納州（0.7%）、麗江市（0.6%）、臨滄市（0.4%）和普洱市（0.3%），上述地區(qū)檢出患兒例數(shù)在所有患兒中的所占比依次為45.0%、21.3%、6.3%、18.8%、2.5%、3.8%和2.5%。80例患兒中，包括HbH 2例、HbJ 4例、HbCS 19例、HbD 1例，HbG 44例。80例Hb電泳結(jié)果異常兒童分布見表2。以HbA2＞10%為HbE，共有580例為HbE陽性，占6.8%。16個民族兒童均檢出HbE陽性者。HbE陽性檢出率超過10%的民族依次為景頗族（29.6%）、阿昌族和德昂族（27.1%）、基諾族（24.7%）、傣族（德宏州17.2%、西雙版納州5.3%、新平縣1.4%）、傈僳族（16.0%），檢出率最低為佤族（0.4%），其他民族檢出率為1%～10%。

3 討 論

本研究中，10個州（市）的兒童中有7個州（市）的兒童檢出異常Hb，共計70例，檢出率由高到低依次為德宏州（2.0%）、怒江州 （1.8%）、新平縣 （1.0%）、西雙版納州（0.7%）、滄源縣（0.4%）、麗江市（0.6%）、普洱市（0.3%），地區(qū)檢出患兒例數(shù)在所有患兒中的所占比依次為45.0%、21.3%、6.3%、18.8%、2.5%、3.8%和2.5%。80例患兒中，共檢出HbH 2例、HbJ 2例、HbCS 19例、HbD 1例、HbG 44例。各州（市）患兒均以HbG陽性較為多見。

Hb異常可沒有任何臨床癥狀，故疾病診斷依賴于實驗室檢查。Hb電泳是分離和鑒定Hb最有效方法，也是診斷Hb異常的主要手段［4－5］。Hb電泳根據(jù)支持物的不同分為濾紙電泳、醋酸纖維素薄膜電泳、瓊脂糖凝膠電泳、毛細(xì)管電泳、高效液相色譜法等，其中醋酸纖維素薄膜電泳為常規(guī)方法［6］，也曾被推薦用于異常Hb的初篩檢測［7］。HbF與HbA等電點接近，在醋酸纖維素膜電泳中難以分離，因此醋酸纖維素膜電泳對HbF的分辨率相對較低［8］。在進(jìn)行Hb分析時，需同時采用堿變性試驗檢測HbF水平，從而為β地貧血的診斷提供依據(jù)。此外，在堿性條件下，HbE與HbA2也因有相同的遷移率而難以分開［9－10］。毛細(xì)管電泳則具有敏感性高、分辨率高、高效快速、所需樣品少等優(yōu)點［11］。筆者曾對醋酸纖維膜電泳和毛細(xì)管電泳檢測結(jié)果進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)二者對HbH、HbJ、HbCS、HbD、HbG的檢測結(jié)果一致，但醋酸纖維膜電泳無法區(qū)分HbE。醋酸纖維膜電泳顯示HbA2＞10%時，可判為HbE陽性［12］。本次調(diào)查共檢出580例 HbE陽性患兒，占6.8%。16個民族的兒童均檢出HbE陽性患兒，基諾族未發(fā)現(xiàn)HbG，但HbE陽性率達(dá)24.7%，高于同地區(qū)的傣族和布朗族。HbE陽性率超過10%的民族包括景頗族（29.6%）、阿昌族和德昂族（27.1%）、基諾族（24.7%）、傣族（德宏州17.2%、西雙版納州5.3%、新平縣1.4%）和傈僳族（16.0%），陽性率最低的為佤族（0.4%）。

HbE是國內(nèi)最常見的異常Hb類型，包括純合子HbE（E＋E）、雜合子（E＋A）和 HbE－β地貧（E＋F），也可與α地貧、β地貧以及其他異常Hb合并存在。有研究顯示，東南亞地區(qū)為HbE高發(fā)區(qū)［12］，而在云南地區(qū) HbE檢出率可高達(dá)4.19%，其中傣族人群為11.67%［13］。本研究顯示，云南地區(qū)10個州（市）的22個縣均可檢出HbE陽性兒童，以傣族、阿昌族、德昂族、布朗族、怒族為主（16%～29%），佤族最低（0.4%）。有研究顯示 HbG、HbD多見于長江以北地區(qū)［14］。本研究檢出HbG陽性兒童44例，提示云南地區(qū)異常Hb具有明顯的遺傳多態(tài)性。同一地區(qū)不同民族兒童可見出不同的異常Hb，例如：西雙版納州、德宏州、怒江州不同民族兒童間具有不同的異常Hb檢出率；不同地區(qū)同一民族兒童間也有一定的差異，例如：西雙版納州、德宏州和玉溪市的傣族兒童具有不同的異常Hb檢出率，也提示云南地區(qū)異常Hb有明顯的遺傳多態(tài)性。80年代的調(diào)查結(jié)果顯示，云南傣族和傈僳族人群中，具有臨床癥狀的 HbE－β地貧發(fā)病率為0.61%及0.87%［15］，均低于本次調(diào)查的結(jié)果，說明其發(fā)病率有可能呈上升趨勢。

云南省地處祖國邊陲，邊境地區(qū)居民與多個東南亞國家的居民往來較為密切，各民族之間的通婚也較為普遍，有可能是導(dǎo)致云南省部分異常Hb檢出率較高的原因之一，需引起足夠的重視。雖然異常Hb不會導(dǎo)致較為嚴(yán)重的臨床癥狀和危害，但對人體發(fā)育過程中正常Hb的合成仍會造成一定的影響。因此，需加強對高危人群的篩查工作，提高人口出生素質(zhì)。

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