杜 昆（荊州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北荊州 434000）

手足口病是好發(fā)于嬰幼兒的感染性疾病，臨床癥狀主要表現(xiàn)為發(fā)熱和手足口部皰疹，少數(shù)患兒可出現(xiàn)無(wú)菌性腦膜炎、腦炎、心肌炎、肺水腫和呼吸循環(huán)衰竭等并發(fā)癥而導(dǎo)致死亡［1－3］。手足口病可由多種腸道病毒引起，主要包括腸道病毒71型（EV71）和柯薩奇病毒A16型（CA16），其中EV71感染是引起國(guó)內(nèi)手足口病患兒死亡的主要原因［4－5］。進(jìn)行EV71檢測(cè)不但有利于手足口病的早期診斷和早期治療，而且可以降低該病引起的并發(fā)癥發(fā)生率，具有重要的臨床價(jià)值。本研究采用免疫層析法（ICA）和酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)179例臨床標(biāo)本，以分析兩種方法檢測(cè)EV71的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年3～10月于本院兒科確診的手足口病患兒135例，男75例、女60例，年齡5個(gè)月至10歲，平均（3.02±2.51）歲，均符合衛(wèi)生部頒發(fā)的《手足口病診療指南（2008年版）》診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］。同期于本院排除手足口病診斷的患兒共44例，男25例、女19例，年齡6個(gè)月至9歲，平均（3.52±2.31）歲。

1.2 主要試劑 EV71IgM抗體ICA檢測(cè)試劑盒和ELISA檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司。

1.3 方法 采集所有受試患兒未抗凝靜脈外周血2mL，常規(guī)方法離心后分離血清標(biāo)本用于EV71IgM抗體檢測(cè)。（1）ICA檢測(cè)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作；結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：測(cè)試區(qū)和對(duì)照區(qū)內(nèi)同時(shí)出現(xiàn)條帶，判為陽(yáng)性；僅對(duì)照區(qū)內(nèi)出現(xiàn)條帶，判為陰性；測(cè)試區(qū)和對(duì)照區(qū)均無(wú)條帶，或只有測(cè)試區(qū)有條帶，均判為無(wú)效，需重新檢測(cè)。（2）ELISA檢測(cè)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。取標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)標(biāo)本各50μL，分別加入反應(yīng)孔內(nèi)，然后加入50μL生物素標(biāo)記抗體，輕輕振蕩混勻，37℃孵育1h；棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗滌4次，每孔加入80μL親和鏈霉素－辣根過(guò)氧化物酶，輕輕振蕩混勻，37℃孵育30min；用洗滌液洗滌4次，每孔加入底物A、B各50μL，輕輕振蕩混勻，37℃避光孵育15min；加入50μL終止液，450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的光密度值（OD值），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)標(biāo)本EV71IgM抗體濃度，并以說(shuō)明書給出的臨界值進(jìn)行陰、陽(yáng)性結(jié)果判斷。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)；P＜0.05為比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

135例手足口病患兒中，ICA檢出EV71IgM抗體陽(yáng)性29例，陽(yáng)性率為21.48%；44例非手足口病患兒中，ICA未檢出EV71IgM抗體陽(yáng)性患兒；兩組患兒EV71IgM抗體ICA檢測(cè)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝21.05，P＜0.05）。135例手足口病患兒中，ELISA檢出EV71IgM抗體陽(yáng)性27例，陽(yáng)性率為20.00%；44例非手足口病患兒中，ELISA未檢出EV71 IgM抗體陽(yáng)性患兒；兩組患兒EV71IgM抗體ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝18.36，P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組患兒EV71IgM抗體ICA及ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率比較［n（n）］

3 討 論

手足口病是由EV71等病毒引起的一種常見(jiàn)的傳染病。EV71屬小RNA病毒科腸道病毒屬。EV71主要通過(guò)接觸傳播及飛沫傳播，具有較強(qiáng)的傳染性，可在短期內(nèi)造成較大范圍的流行。EV71一年四季均可引起手足口病，其中以夏、秋季多見(jiàn)。癥狀較輕的感染患者臨床表現(xiàn)為發(fā)熱和手足口部皰疹，重者可累及神經(jīng)、呼吸、循環(huán)等系統(tǒng)，甚至引起死亡。目前對(duì)于手足口病尚無(wú)有效的治療措施，故早期診斷對(duì)于手足口病的預(yù)防和控制具有重要意義。

傳統(tǒng)的病原學(xué)檢查是診斷手足口病的金標(biāo)準(zhǔn)，但該法對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備、技術(shù)要求較高，且檢測(cè)周期長(zhǎng)、靈敏度相對(duì)較低，主要用于實(shí)驗(yàn)室研究，并不適合臨床推廣應(yīng)用。目前，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT－PCR）技術(shù)已成為診斷EV71感染的一種常用方法，但該檢測(cè)方法造成的假陽(yáng)性率和假陰性率均較高。熒光定量PCR（FQ－PCR）檢測(cè)EV71不僅能大大降低假陽(yáng)性率和假陰性率，而且與常規(guī)RT－PCR技術(shù)相比，在敏感性和特異性等方面都更具有優(yōu)勢(shì)［7－11］。但由于FQ－PCR檢測(cè)需要的儀器昂貴，且對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件要求較高，不適宜在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)開(kāi)展。本研究比較了ICA和ELISA檢測(cè)EV71IgM抗體的陽(yáng)性率，結(jié)果表明，135例手足口病患兒，ICA、ELISA檢測(cè)EV71IgM抗體陽(yáng)性率分別為21.48%和20.74%，而44例非手足口病患兒，ICA、ELISA均未檢出EV71IgM抗體陽(yáng)性患兒，且兩種方法在手足口病患兒中的EV71IgM抗體檢測(cè)陽(yáng)性率明顯高于非手足口病患兒（P＜0.05）。另一方面，ICA、ELISA檢測(cè)手足口病患兒EV71IgM抗體陽(yáng)性率雖然較低，但對(duì)于非手足口病患兒，兩種方法均未出現(xiàn)EV71IgM抗體陽(yáng)性患兒，說(shuō)明兩種方法檢測(cè)假陽(yáng)性率較低，具有相對(duì)較高的特異度。

綜上所述，ICA或ELISA檢測(cè)EV71IgM抗體為陽(yáng)性者，均可確診為手足口病，但對(duì)于檢測(cè)結(jié)果為陰性者，不能排除手足口病的可能性，應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)進(jìn)行診斷。

［1］Lum LC，Wong KT，Lain SK，et al.Neurogenie pulmonary edema and enterovirus 71encephalomyelitis［J］.Lancet，1998，352（9137）：1391－1394.

［2］崔愛(ài)利，許文波，李秀珠.腸道病毒71型的RT－PCR診斷及基因特征［J］.病毒學(xué)報(bào)，2004，20（2）：160－165.

［3］張壽斌，廖華，黃呈輝，等.深圳237例手足口病腸道病毒血清型基因及臨床特征［J］.中國(guó)當(dāng)代兒科雜志，2008，10（1）：38－41.

［4］張育才，李興旺，朱曉東，等.兒童危重腸道病毒71型腦炎及神經(jīng)源性肺水腫的臨床特征與救治叨［J］.中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2008，17（12）：1250－1254.

［5］茹維平，康錯(cuò)，尤愛(ài)同，等.EV71感染重瘟病例的臨床表現(xiàn)及流行病學(xué)特征分析［J］.中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志，2010，24（6）：448－450.

［6］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.手足口病預(yù)防控制指南（2008年版）［Z］.北京：中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部，2009.

［7］陳宗波，董永綏，方峰，等.應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)腸道病毒感染［J］.中華兒科雜志，1997，35（11）：597－600.

［8］徐大鵬，劉建榮，宋淑娥，等.實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)在手足口病病毒核酸檢測(cè)中的應(yīng)用［J］.首都公共衛(wèi)生，2010，4（6）：243－245.

［9］謝欣城，張永樂(lè)，張思泉，等.腸道病毒71型核酸檢測(cè)在診斷手足口病中的意義［J］.國(guó)際流行病學(xué)傳染病學(xué)雜志，2010，37（5）：303－305.

［10］Tan EL，Yong LL，Quak SH，et al.Rapid detection of enterovirus 71by real－time Taqman RT－PCR［J］.J Clin Virol，2008，42（2）：203－206.

［11］張永樂(lè)，潘克女，徐岱，等.手足口病病原體實(shí)時(shí)熒光RTPCR反應(yīng)體系的建立與臨床應(yīng)用［J］.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2009，29（3）：276－278.