龔亞芳，薛 敏（中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院婦科，長沙 10013）

人乳頭瘤病毒（HPV）有多種基因型，由于HPV不同亞型致病性各有差異，故HPV分型檢測對宮頸病變的早期篩查，防治及預(yù)后判斷具有重要的臨床意義。許多國家已將HPV檢測納入婦女宮頸病變篩查計劃［1］，今年國家衛(wèi)計委在全國開展宮頸癌篩查，以HPV檢測為首檢技術(shù)，本院承擔(dān)了此項目，但HPV感染具有地域性、民族性且感染差異性大等特點［2］。因此，研究各地區(qū)HPV基因型有很大的現(xiàn)實意義。本次通過對長沙市女性進行HPV基因型的檢測，探討該地區(qū)女性人群HPV感染的基因譜，各亞型感染率及不同年齡段感染率情況?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年9月至2013年6月本院體檢的長沙市女性共11 625 例，年齡21～76歲，平均年齡（45.2±11.3）歲。

1.2 儀器與試劑 杭州博日BIOER life Express PCR儀；高速離心機（長沙湘儀離心機有限公司）；HybriMax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀和HPV分型檢測試劑盒均由凱普生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.3 方法 導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)能檢測21種HPV基因型別，其中16種高危亞型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304；5種低危亞型：6、11、42、43、44。

1.3.1 宮頸細胞DNA分離提取 取800μL標(biāo)本14 000 轉(zhuǎn)離心5min，去除上清液，加400μL溶液Ⅰ混勻，100℃金屬浴加熱15min，加400μL溶液Ⅱ震蕩混勻靜置2min，14 000 轉(zhuǎn)離心5min，去除上清液，加60μL溶液Ⅲ震蕩混勻，離心1min提取1μL上清液至PCR反應(yīng)管。

1.3.2 PCR擴增 取Premix液23.25μL，Taq酶0.75μL，待檢上清液1μL，PCR反應(yīng)總體積為25μL，按試劑盒說明書進行40個循環(huán)擴增。

1.3.3 PCR產(chǎn)物雜交 擴增產(chǎn)物95℃變性5min，迅速放入冰水浴，加800μL雜交液預(yù)雜交2～5min，把變性好的產(chǎn)物和500μL雜交液加入反應(yīng)池，雜交10min，沖洗，加500μL封阻液進行預(yù)封阻，預(yù)封阻完后加入500μL封阻液進行封阻7 min，排干封阻液加入500μL酶標(biāo)液，反應(yīng)3.5min，排干，溶液A沖洗4次，加入500μL顯色液，避光顯色5～10min，溶液B沖洗3次，判讀結(jié)果。

1.3.4 結(jié)果判定 雜交膜具體探針位置，其中Biotin為雜交反應(yīng)對照點，IC點為PCR擴增反應(yīng)對照點。正常結(jié)果這兩個點都會顯色，其他為陽性結(jié)果點。HPV單一感染時，在導(dǎo)流雜交膜芯片上相應(yīng)的HPV亞型探針位點處可見一黑色圓點，多亞型感染時，在膜上可見2個或2個以上的顯色斑點。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；以α＝0.05為檢驗水準(zhǔn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HPV總陽性率及各基因型陽性率 在11 625 例標(biāo)本中，HPV陽性共1 722 例，總陽性率為14.8%。在高危亞型中陽性檢出率最高的分別為52型（4.0%）、58型（2.4%）、CP8304型（2.1%）、16型（2.0%）、53型（1.7%），低危亞型中陽性檢出率最高的是6型（0.3%），各基因陽性率詳見表1。

表1 HPV總陽性率及不同亞型陽性率［n（%）］

2.2 HPV多亞型感染的比例 在1 722 例陽性結(jié)果中，單亞型感染1 379 例，占感染比例的80.1%，2型、3型、4型與5型感染分別為282例、46例、9例和6例，分別占總感染率的16.4%、2.7%、0.5%和0.3%。

2.3 HPV感染與年齡分布 HPV感染在50～60歲組陽性率最高，為16.0%，各年齡段的HPV陽性率之間比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2＝16.48，P＜0.01）。見表2。

表2 HPV感染與年齡分布［n（%）］

2.4 高感染率HPV亞型與年齡分布 根據(jù)上述HPV感染不同亞型的感染率分析結(jié)果排序，選取高危亞型中感染率最高的前5種HPV，進行年齡分層分析，其中52型和58型在50～60歲感染率較高，分別為5.1%和3.1%，但16型感染率最高的年齡在21～30歲，為2.4%，見表3。

表3 HPV常見亞型與年齡分布［n（%）］

3 討 論

HPV是定向感染人體皮膚及黏膜復(fù)層鱗狀上皮細胞的一類乳頭瘤病毒，其在女性生殖道中具有較高的感染率，目前大量研究已證實持續(xù)感染同一亞型HPV是宮頸癌發(fā)生的重要條件［3］。HPV篩查近年成了宮頸癌篩查的重要手段，但大多數(shù)病毒感染者并不進展為癌，有報導(dǎo)稱從持續(xù)高危險HPV感染開始至宮頸癌的發(fā)生時間大約為15年［4］，單一的HPV陽性可能導(dǎo)致一過性HPV感染者過度關(guān)注和憂慮，頻繁檢查，甚至接受不必要的治療。如何從這些感染者中篩選出高?；颊呔惋@得更為重要，找到更敏感、更有效的檢測指標(biāo)以提高罹患宮頸癌的風(fēng)險預(yù)測就更有意義了。

本研究結(jié)果顯示，長沙市女性人群HPV感染率為14.8%，低于國內(nèi)報道的一般門診感染率，如聶妹芳等［5］陽性總檢出率為44.5%，海南地區(qū)陽性率為59.2%［6］，侯萌等［7］調(diào)查的感染率為37.2%，張東紅和林美珊［8］的平均感染率為46.5%。這可能與地域差異有關(guān)，而且也與本研究選擇的是體檢人群而不是門診或住院患者有關(guān)。在本研究中，排在前5位的HPV亞型分別是52、58、CP8304、16和53型。武漢常見的亞型是16、58、52、33型［9］；浙江省感染率最高的5種型別是HPV52、16、58、68和81型［10］，在東莞地區(qū)主要以l6、52和53型感染為主［11］。鮑彥平報道 HPV16、58、52型在亞洲（尤其是中國高發(fā)區(qū)）人群中具有重要的意義［12］。這說明在各個地區(qū)HPV流行的亞型是有差異的，這對疫苗的研發(fā)具有指導(dǎo)意義。目前第一代疫苗只針對HPV16和18型，在新一代的疫苗研發(fā)中，世界衛(wèi)生組織專家提出如果增加 HPV31，33，35，45，52和58型，可以在預(yù)防70%的子宮頸癌基礎(chǔ)上增加約20%的預(yù)防能力［12］，與此同時我國HPV疫苗的研發(fā)還應(yīng)該對HPV58和52型予以足夠重視。這次對長沙市女性人群的篩查發(fā)現(xiàn)，感染率最高的是52型，其次是58型、CP8304型，感染類型以單一亞型感染為主，占總感染數(shù)的80.1%，這表明不同人群感染HPV亞型不同，如對于普通人群實施疫苗接種首先考慮52型，這樣有人群針對性的接種，可以提高疫苗使用效率，也可節(jié)約國家醫(yī)療資源。

HPV在年輕女性中感染率最高，認為這和年輕女性性活躍有關(guān)。但也有研究認為HPV在20歲以下和50歲以上的患者陽性檢出率最高［13］。在本研究中，隨著年齡增長感染率增加，表明不同研究結(jié)果的差異可能是由于所選擇人群的年齡不同所導(dǎo)致。

綜上所述，長沙市女性人群中HPV感染率不高，50～60歲的感染率稍高。以單一亞型感染為主，其中HPV52為高危型HPV。應(yīng)該加強篩查工作，對減少宮頸癌的發(fā)生有著重要作用。

［1］鐘偉明，黃善忠，韋干芬.HPV病毒與宮頸癌的研究進展［J］.中國社區(qū)醫(yī)師：醫(yī)學(xué)專業(yè)，2011（17）：95.

［2］趙蓉，張為遠，張淞文，等.2006～2008年北京地區(qū)25～54歲育齡婦女HPV亞型感染狀況的調(diào)查［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2011，46（3）：184－187.

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