張俊君,成 翔,秦 龍,魏戰(zhàn)峰(陜西省咸陽市疾病預(yù)防控制中心 712000)
手足口?。℉FMD)好發(fā)于5歲以下兒童,可由多種病原體感染所致,包括柯薩奇病毒 A組(CoxA)的16、4、5、7、9、10型,B組(CoxB)的3、7型,以及??刹《竞湍c道病毒(EV)71型(EV71)等,其中以 CoxA16和 EV71最為常見[1]。近年來,HFMD病原體雖然仍以CoxA16和EV71為主,但其他EV型別的檢出率有所上升。多數(shù)HFMD患者癥狀輕微,以發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹或皰疹為主要。少數(shù)患者可出現(xiàn)無菌性腦膜炎、腦炎、急性弛緩性麻痹、神經(jīng)源性肺水腫和心肌炎等。個別重癥患者則病情進(jìn)展快,最終死亡。目前,HFMD尚無特異性治療方法,也缺乏特異性的疫苗[2]。陜西省咸陽市自2011年在陜西省HFMD防治項目專項資金的支持下,開展了HFMD病原學(xué)監(jiān)測工作,以了解HFMD病原體的分布變化以及影響病原學(xué)檢測結(jié)果的因素。現(xiàn)將咸陽市2012年HFMD病原學(xué)監(jiān)測結(jié)果報道如下。
1.1 一般資料 以縣為單位,由縣級疾病預(yù)防控制中心采集咽拭子標(biāo)本,包括常規(guī)監(jiān)測標(biāo)本、重癥病例標(biāo)本、聚集性疫情標(biāo)本、重癥密切接觸者標(biāo)本和死亡病例標(biāo)本。
1.2 儀器與試劑 四通道實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增儀(西安天隆科技有限公司);掌式離心機(jī)(珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司);微量振蕩器(常州市華普達(dá)教學(xué)儀器有限公司);自動核酸提取儀及配套 MagMAX-96病毒核酸抽提試劑盒(美國ABI公司);實(shí)時熒光逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)試劑盒(江蘇碩世生物科技有限公司、上海之江生物科技有限公司);cDNA合成試劑盒(美國Promega公司)
1.3 方法
1.3.1 核酸提取 所有標(biāo)本采集后浸入裝有3.5mL病毒保存液的采樣管中,冷藏送至咸陽市疾控中心綜合實(shí)驗室檢測。取50μL標(biāo)本,使用自動核酸提取儀及配套核酸抽提試劑盒提取病毒核酸。同時提取試劑盒陰性對照品和陽性對照品核酸。
1.3.2 EV通用型、CoxA16和EV71型核酸檢測 按照HFMD預(yù)防控制指南(2009年版)附件1的要求,采用EV通用型、CoxA16和EV71型病毒基因特異性引物和Taqman探針,以及實(shí)時熒光RT-PCR試劑盒進(jìn)行檢測,操作步驟嚴(yán)格參照說明書[2]。
1.3.3 其他型別病毒核酸檢測 取4μL病毒核酸提取液,使用cDNA合成試劑盒合成cDNA,選用CoxA6和CoxA10特異性引物和VP1區(qū)通用引物,參照文獻(xiàn)[3-6]的方法,通過RTPCR擴(kuò)增、核酸序列分析進(jìn)行病毒分型。PCR反應(yīng)條件:50℃30min;94℃3min;94℃30s,51℃30s,72℃30s,循環(huán)30次;72℃8min。
1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用Microsoft Excel 2003軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理,采用SPSS12.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料以百分率表示,組間比較采用卡方檢驗。P<0.05為比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2.1 疫情概況 2012年咸陽市13個縣、市、區(qū)共報告HFMD病例8 762 例,發(fā)病率約為179.03/10萬,重癥278例,死亡13例,死亡率約為0.27/10萬?;颊咭陨⒕觾和? 936例)和幼托兒童(1 462例)為主,占病例總數(shù)的95.85%。散居兒童占79.16%。8 762 例報告病例中,7 467 例為0~5歲兒童,占病例總數(shù)的85.22%。所有病例中,男5 460例、女3 302例,男女性別比例為1.65∶1。
2.2 總體檢測結(jié)果 2012年咸陽市疾病預(yù)防控制中心共計檢測臨床確診HFMD病例咽拭子標(biāo)本549份,EV陽性126份,陽性檢出率22.95%,其中EV71陽性77份(占61.11%)、CoxA16陽性10份(占7.94%)、CoxA10陽性9份(占7.14%)、其他未分型 EV 陽性30份(占23.81%),未檢出CoxA6陽性標(biāo)本。
2.3 不同年齡組病毒檢出情況 在所有送檢咽拭子標(biāo)本的病例中,年齡小于或等于3歲者EV陽性檢出率為25.41%,年齡大于3歲者陽性檢出率為19.92%,陽性檢出率組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.317,P>0.05)。兩個年齡組間不同病毒陽性構(gòu)成比比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.70,P>0.05),見表1。
表1 不同年齡組HMFD病原體陽性構(gòu)成比
2.4 不同時期標(biāo)本檢測結(jié)果 2012年咸陽市HFMD發(fā)病出現(xiàn)2個高峰,分別在5~7月和9~10月。按照咽拭子標(biāo)本送檢時間,將549份標(biāo)本分成高峰期組452份與非高峰期組97份,高峰期組檢出EV陽性標(biāo)本112份,陽性檢出率24.78%,非高峰期組檢出EV陽性標(biāo)本14例,陽性檢出率14.43%,陽性率比較差異有統(tǒng)統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.834,P<0.05)。
2.5 不同病情病例病原體檢出情況 普通病例和重癥病例EV71陽性檢出率分別為9.30%和21.16%,比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=14.953,P<0.05)。不同病情病例EV檢測結(jié)果見表2。
表2 不同病情病例EV檢測結(jié)果
2.6 不同試劑檢測結(jié)果 2012年,共采用2個廠家的試劑進(jìn)行檢測,不同試劑陽性檢出率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.499,P>0.05),見表3。
表3 不同試劑陽性檢出率[n或n(%)]
自2008年起,衛(wèi)生部將HFMD列入法定報告管理的丙類傳染病。咸陽市自2011年起,開展了HFMD的病原學(xué)監(jiān)測,為疫情監(jiān)測和報告提供了及時的實(shí)驗室數(shù)據(jù),疫情信息更加準(zhǔn)確。
咸陽市2012年HFMD疫情監(jiān)測結(jié)果顯示,HFMD病例以0~5歲為主。在送檢咽拭子標(biāo)本的549例病例中,年齡小于或等于3歲組與年齡大于3歲組EV陽性檢出率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,且不同年齡組間不同病毒的陽性構(gòu)成比比較差異也無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。所有報告病例中,男性所占比例高于女性,與類似研究報道一致[7]。2012年咸陽市HFMD病原體構(gòu)成情況顯示,EV71陽性構(gòu)成比高于CoxA16、Cox-A10和其他型別EV,但與2009~2011年咸陽市HFMD流行特征相比[8],其他EV陽性構(gòu)成比有所升高,并且在2012年首次檢出CoxA10,說明將CoxA6和CoxA10納入2013年HFMD監(jiān)測范圍十分必要。重癥病例EV71陽性檢出率高于普通病例(P<0.05),與深圳等地重癥病例的病原體檢測結(jié)果一致[9-10]。5例死亡病例中,4例為 EV71陽性。由此可見,EV71陽性HFMD病例更易發(fā)展至重癥病例或者死亡。這可能是因為EV71神經(jīng)毒力強(qiáng)及存在高變異性,更易導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)癥狀或肺水腫、肺出血,進(jìn)而導(dǎo)致病情加重甚至死亡。對549份HFMD臨床確診病例咽拭子標(biāo)本EV陽性檢出率為22.95%,比類似研究報道的陽性檢出率偏低[11]。這可能與采用的檢測方法、檢測試劑及標(biāo)本類型等存在差異有關(guān)[12]。本文的分析結(jié)果表明:在使用同一類型標(biāo)本、相同檢測方法和儀器時,試劑種類對檢測結(jié)果無影響。本文的分析結(jié)果也表明:是否在發(fā)病高峰期采樣對檢測結(jié)果有影響,發(fā)病高峰期采樣標(biāo)本陽性檢出率高于非高峰期采樣標(biāo)本(P<0.05)。有文獻(xiàn)報道,糞便標(biāo)本與咽拭子標(biāo)本陽性檢出率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義[13]。因此,在條件允許時,應(yīng)盡可能采集糞便或肛拭子標(biāo)本,以提高陽性檢出率,盡早明確HFMD病原體型別,為制訂針對性的防控措施提供依據(jù)。
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