周紅玲，石 雕，王智穎，劉 陽，丁 楠

（湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校附屬第一醫(yī)院，湖南 株洲 412000）

高效液相色譜法測定復(fù)方咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿的含量

周紅玲，石 雕，王智穎，劉 陽，丁 楠

（湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校附屬第一醫(yī)院，湖南 株洲 412000）

目的建立高效液相色譜法測定復(fù)方咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿含量的方法。方法采用色譜柱為Agilent Extend-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（含 0.1%三乙胺）（4∶96）：流速為 1 mL/min；柱溫為25℃；檢測波長為260 nm；進(jìn)樣量為10 μL。結(jié)果鹽酸麻黃堿在0.24～2.4 μg內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程Y=4 118X－36.3，r=0.999 8（n=6），平均加樣回收率為98.2%，RSD為0.5%(n=6)。結(jié)論本法快速簡便、重復(fù)性好、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于測定復(fù)方咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿的含量。

復(fù)方咳喘顆粒；鹽酸麻黃堿；高效液相色譜法；含量測定

復(fù)方咳喘顆粒為我院創(chuàng)新制劑，由麻黃、苦杏仁、石膏、茯苓等組成，具有鎮(zhèn)咳、祛痰、抗炎作用，臨床用于治療咳喘，具有良好的療效。該方由五虎湯加減化裁而來，研究證實(shí)五虎湯具有抑制哮喘患兒輔助性T細(xì)胞2（Th2）類細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-4（IL-4）、白細(xì)胞介素-5（IL-5）的產(chǎn)生，從而調(diào)節(jié)輔助性T細(xì)胞1（Th1）/Th2失衡的作用[1]。處方中麻黃為君藥，具有宣肺平喘的功效，其主要有效成分為鹽酸麻黃堿[2-4]，為了有效的控制制劑的質(zhì)量，本研究采用高效液相色譜法測定鹽酸麻黃堿含量，建立復(fù)方咳喘顆粒的含量測定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀 （DAD檢測器G1315B等，美國）；KQ-300DE型超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）；AR2140電子分析天平（美國奧豪斯公司）。

1.2 試藥

鹽酸麻黃堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：171241-201007）；乙腈為色譜純；水為雙蒸水；其他試劑均為分析純；復(fù)方咳喘顆粒（規(guī)格8 g/袋，為本院自制，批號：121201、121202、121203）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

色譜柱：Agilent Extend-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（含 0.1%三乙胺）（4∶96）；流速：1 mL/min，柱溫：25 ℃； 檢測波長：260 nm；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿色譜峰計算應(yīng)不低于3 000。在上述色譜條件下，鹽酸麻黃堿色譜峰與其他組分色譜峰達(dá)基線分離，且分離度＞1.5；陰性對照品測定無干擾，對照品、樣品及陰性樣品色譜圖，見圖1。

2.2 溶液的制備

圖1 鹽酸麻黃堿對照品和供試品高效液相色譜圖

2.2.1 對照品溶液的制備 取105℃干燥3 h的鹽酸麻黃堿對照品 12 mg，精密稱定，置于25 mL量瓶中，加甲醇制成 0.48 mg/mL的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取復(fù)方咳喘顆粒適量，研成細(xì)粉，取約1.0 g，精密稱定，置于100 mL具塞錐形瓶中，加入0.1 mol/L鹽酸溶液50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，冷卻后用0.1 mol/L鹽酸溶液補(bǔ)足減失重，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，滴加氨水調(diào)節(jié)pH 11～12，用乙醚萃取3次，每次30 mL，合并乙醚萃取液，加5%鹽酸乙醇溶液1 mL，搖勻，低溫蒸干，殘渣用流動相溶解至10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，過0.22 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按復(fù)方咳喘顆粒制備工藝制備缺麻黃的陰性樣品顆粒，依照“2.2.2”項下方法制得陰性樣品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

取對照品溶液適量，用甲醇依次稀釋成每1 mL含鹽酸麻黃堿 0.24、0.192、0.144、0.048、0.024 mg 的溶液。依次量取各溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄鹽酸麻黃堿色譜峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X，μg）、以峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為 Y=4 118X－36.3，r=0.999 8，結(jié)果表明鹽酸麻黃堿在0.24～2.4 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

量取對照品溶液10 μL，注入色譜儀，記錄鹽酸麻黃堿對照品色譜峰面積，連續(xù)進(jìn)樣6次，計算峰面積RSD為0.5%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取復(fù)方咳喘顆粒 （批號：121201）適量，按照“2.2.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，進(jìn)樣10 μL，記錄供試品中鹽酸麻黃堿色譜峰面積，計算鹽酸麻黃堿的平均含量為0.654 9 mg/g，其RSD為1.0%，表明本方法的重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取復(fù)方咳喘顆粒（批號：121201）供試品溶液，分別于 0、1、2、4、8、24 h 測定供試品中鹽酸麻黃堿的含量，結(jié)果RSD為0.6%，表明復(fù)方咳喘顆粒供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 加樣回收試驗(yàn)

取已知含量的復(fù)方咳喘顆粒 （批號：121201）樣品6份，每份約 0.5 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，分別精密加入對照品溶液，依“2.2.2”項下方法制得供試液，測定鹽酸麻黃堿的含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

2.8 樣品含量測定

取復(fù)方咳喘顆粒樣品3批，依法測定鹽酸麻黃堿峰面積，計算樣品中鹽酸麻黃堿的含量，結(jié)果見表2。

表2 3批樣品中鹽酸麻黃堿含量測定結(jié)果 （mg/g）

3 討論

本實(shí)驗(yàn)參考《中華人民共和國藥典》[5]，選用了甲醇-0.1%磷酸溶液作為流動相，但發(fā)現(xiàn)色譜峰保留時間較長，所以改用乙腈-0.1%磷酸溶液作為流動相；在檢測波長的選擇中，藥典采用210 nm，考慮到樣品在210 nm處吸收峰復(fù)雜，而且色譜峰基線不穩(wěn)定，故采用DAD檢測器對供試品中的鹽酸麻黃堿峰進(jìn)行紫外掃描，發(fā)現(xiàn)二者的吸收光譜形狀一致，且在260 nm處有強(qiáng)吸收，因此我們采用260 nm作為檢測波長。

本試驗(yàn)建立了高效液相色譜法測定方咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿含量的方法，可有效控制復(fù)方咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿的含量。

[1]楊靜宜，王孟清，黃 婷，等.五虎湯對哮喘嬰幼兒DC刺激T淋巴細(xì)胞分泌IL-4、IL-5的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2009，29（2）：49-51.

[2]李佳蓮，方 磊，張永清，等.麻黃的化學(xué)成分和藥理活性的研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代中藥，2012，14(7)：21-27.

[3]劉 賾，石 倩，楊 洋.麻黃堿與偽麻黃堿平喘效果及機(jī)制比較研究[J].中草藥，2009(5)：771-774.

[4]鐘凌云，祝 婧，龔千鋒，等.炮制對麻黃發(fā)汗、平喘藥效影響研究[J].中藥藥理與臨床，2008，24(6)：53-56.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：300-301.

（本文編輯 徐愛良）

Determination Ephedrine Hydrochloride in Compound Cough Granules by HPLC

ZHOU Hongling,SHI Diao,WANG Zhiying,LIU Yang,DING Nan
(The First Affiliated Hospital of Hunan Traditional Chinese Medical College,Zhuzhou,Hunan 412000,China)

ObjectiveTo establish a HPLC method for determination of ephedrine hydrochloride in compound cough granules.MethodsAgilent Extend-C18 column(5 μm,4.6 mm×250 mm)was used and the mobile phase was acetonitrile-0.1% phosphoric acid (4:96).The flow rate was 1.0 mL/min,the column temperature was 25℃and the wavelength was 260 nm.The injection volume was10 μL.ResultsThe ephedrine hydrochloride waslineroverthe range of 0.24-2.49 μg.The regression equation Y=4 118.1X-36.278,correlation coefficient r=0.999 8(n=6).The average recovery was 98.2%with RSD=0.5%(n=6).Conclusions The method is rapid simple,reproducible,accurate,and can be used for the content determination of ephedrine hydrochloride in compound cough granules.

compound cough granules;phedrine hydrochloride;HPLC;content determination

周紅玲，女，副主任藥師，主要從事醫(yī)院新制劑開發(fā)研究。

R248.1

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2014.08.006.021.03

2014－06－26

湖南中醫(yī)藥管理局資助項目（2013144）。