李青 金紅梅

(復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院青浦分院婦產(chǎn)科，上海 201700)

人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一種小雙鏈閉合環(huán)狀DNA病毒，可特異性感染人皮膚黏膜的鱗狀上皮細(xì)胞，引起上皮組織的增生性病變［1-2］。99.7%的宮頸癌患者有 HPV 感染［3-4］。目前已確定的HPV型別有120多種，不同的HPV亞型可引起不同類型的腫瘤，其中有多種HPV與人類宮頸腫瘤相關(guān)［4］。根據(jù)致病能力強(qiáng)弱，將HPV分為低危型和高危型，低危型主要引發(fā)良性增生(如尖銳濕疣)，而高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌的主要致病因素［5］。孕期婦女由于受胎盤(pán)激素、免疫及循環(huán)系統(tǒng)變化的影響，HPV感染率高于非孕期［6］。孕期HPV可通過(guò)母嬰傳播導(dǎo)致嬰兒感染，引起新生兒喉乳頭瘤等疾病，嚴(yán)重時(shí)可致死。因此，孕期HPV感染會(huì)影響孕期女性和新生兒的健康。本研究采用核酸分子快速導(dǎo)流雜交分型技術(shù)(HybriMax)檢測(cè)了500例感染HPV的孕期婦女及102名新生兒的HPV-DNA分型，研究妊娠期HPV感染情況及其與母嬰垂直傳播的關(guān)系，旨在為早期篩查妊娠期女性宮頸病變及防治新生兒感染HPV提供依據(jù)［6］。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2011年1月—2012年12月復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院青浦分院產(chǎn)科門(mén)診收治自愿接受HPV-DNA分型檢測(cè)的500例妊娠期女性患者，年齡20～35歲，平均年齡27歲，按年齡分為＜25歲、25～30歲、＞30歲3個(gè)年齡段;按孕期分為孕早期(14周以下)，孕中期(14～28周)和孕晚期(28周以上)。孕8～36周首次檢測(cè)HPV，陽(yáng)性患者于孕36～37周進(jìn)行復(fù)查。HPV陽(yáng)性患者的新生兒出生后也同樣進(jìn)行HPV檢測(cè)。

1.2 主要試劑與儀器 HPV DNA抽提試劑盒［羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司］，Roche LightCycler 480熒光定量PCR擴(kuò)增儀［羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司］，HPV基因分型檢測(cè)試劑盒(廣東深圳亞能生物技術(shù)有限公司)，可檢測(cè)23種HPV亞型，包括18 種高危亞型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83 和 MM4 型)以及 5 種低危亞型(6、11、42、43 和44 型)。

1.3 標(biāo)本采集 HPV標(biāo)本取樣方法為:用窺陰器暴露宮頸后，于宮頸口用宮頸刷順時(shí)針旋轉(zhuǎn)3～5圈取樣。兒科醫(yī)師于新生兒產(chǎn)后24 h內(nèi)刷取其口咽部和生殖器黏膜(女?huà)胗谛￡幋教?，男嬰于包皮?細(xì)胞。所取樣品于4℃保存，1周內(nèi)完成檢測(cè)。

1.4 檢測(cè)方法 應(yīng)用HybriMax檢測(cè)HPV基因分型(1)HPV-DNA提取;(2)HPVPCR擴(kuò)增;(3)核酸分子快速導(dǎo)流雜交;(4)顯色HPV分型;(5)出具結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以率的形式表示，多組間比較采用Pearson χ2檢驗(yàn)，以 P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 孕婦HPV感染狀況 102例HPV感染孕婦中，單型別感染88例(86.27%);多重型別感染14例(13.73%)，其中二重感染11例、三重感染3例。見(jiàn)表1。

2.2 各年齡段孕婦的HPV感染狀況 各年齡段孕婦HPV感染率不同，＜25歲者感染9例(7.96%)，25～30歲者感染78例(29.89%)，＞30者感染15例(11.9%)。25～30歲者感染較高，P ＜0.05。見(jiàn)表2。

2.3 不同孕期孕婦HPV的感染情況 孕早期感染12 例(19.4%)，孕中期感染66 例(20.8%)，孕晚期感染24例(19.8%)，經(jīng)兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表3。

表1 500例孕婦HPV感染情況

表2 不同年齡段孕婦HPV感染情況

表3 不同孕期HPV感染情況

2.4 新生兒HPV感染狀況 102例HPV感染孕婦所分娩的新生兒中，HPV感染者7例，母嬰垂直傳播率為6.86%(7/102)，7例母親均為雙重或多重型別HPV感染者。

3 討 論

3.1 孕期HPV亞臨床感染 女性HPV感染多見(jiàn)于育齡婦女，近年來(lái)其發(fā)生率逐年上升。HPV感染不僅嚴(yán)重影響孕婦健康，而且可經(jīng)母嬰傳播影響胎兒健康。多項(xiàng)研究［6-7］表明，孕期孕婦比非孕期婦女更容易感染HPV，且以高危型HPV感染為主，這可能與孕期盆腔、外生殖器血供豐富以及與體內(nèi)雌、孕激素水平增加有關(guān)。本研究采用HPV-DNA核酸分子快速雜交檢測(cè)系統(tǒng)，同時(shí)分析23種HPV亞型，結(jié)果顯示，孕期婦女HPV感染總陽(yáng)性率20.4%，最常見(jiàn)亞型為 HPV 16，其次為 52、58、33、18，均為 HPV高危型。但有研究［6］表明，HPV感染的型別可能具有人群與地域特點(diǎn)，鑒于本研究對(duì)象的區(qū)域分布不明，所以不能對(duì)此做深入剖析。

3.2 孕期HPV感染的相關(guān)因素 年齡和孕期是HPV感染的相關(guān)因素。研究［6］表明，在日本，小于25歲的妊娠婦女的HPV感染率高于25歲以上的婦女。但本研究顯示，25～30歲孕婦HPV感染率較高。引起上述差異的原因有待進(jìn)一步研究。研究［6，8］表明，不同孕期孕婦的HPV感染率也不同，但本研究中，孕早、中、晚期的HPV感染率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，有待擴(kuò)大樣本量進(jìn)行進(jìn)一步分析。

3.3 孕期HPV感染與母嬰垂直傳播 研究［6，9-10］表明，HPV感染存在母嬰垂直傳播。本研究顯示，HPV母嬰垂直傳播率為6.86%(7/102)，且母親均為雙重或多重型別HPV感染者。因此，對(duì)HPV感染孕婦，尤其是多型別HPV感染孕婦所分娩的新生兒，須進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪。孕期篩查HPV對(duì)于孕婦及新生兒健康都具有積極意義，可以通過(guò)預(yù)測(cè)及早期治療HPV感染而減少或控制孕婦宮頸癌的發(fā)生及降低新生兒的死亡率［6］。

［1］Del PM，Rodriguez-carunchio L，Alonso I，et a1.Clinical and colposcopic and pathological characteristics of cervical and vaginal high-grade lesions negative for HPV by Hybrid Capture 2［J］.Gynecol Oncol，2011，122(3):515-520.

［2］董學(xué)君，張國(guó)榮，蔡紅光，等.聚合酶鏈反應(yīng)微孔板雜交作為人乳頭狀瘤病毒新亞型的分子流行病學(xué)研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)雜志，2003，7(4):301.

［3］Wang Y，Liao YY，Xu YY，et al.Comparison of human papillom virus DNA in condylomata acuminata，cervical cancer and female genital tract［J］.China Journal of Modern Medicine，2006(21):3293-3297.

［4］金奇主編.醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)［M］.北京:科學(xué)出版社，2001:812-818.

［5］Silverberg MJ，Thorsen P，Lindeberg H，et al.Condyloma in pregnancy is strongly predictive of juvenile-onsetrecurrent respiratory papillomatosis［J］.Obstet Gynecol，2003，101:645.

［6］周蓓蓓，張麗娜，范燕燕，等.孕期人乳頭瘤病毒感染類型與母嬰垂直傳播的前瞻性研究［J］.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2012，21(3):208-214.

［7］姚恒，李靜文.妊娠期及產(chǎn)后婦女高危型人乳頭狀瘤病毒感染分析［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，10(4):28-29.

［8］Domza G，Gudleviien Z，DidiapetrienJ，et al.Human papillomavirus infection in pregnant women［J］.Arch Gynecol Obstet，2011，284(5):1105-1112.

［9］Smith EM，Parker MA，Rubenstein LM，et al.Evidence for vertical transmission of HPVfrom mothers to infants［J］.Infect Dis Obstet Gynecol，2010:326-369.

［10］Duray A，Descamps G，Bettonville M，et al.High prevalence of high-risk human papillomavirus in palatine tonsils from healthy children and adults［J］.Otolaryngol Head Neck Surg，2011，145(2):230-235.