郭強(qiáng)

(河南省食品藥品檢驗(yàn)所，河南 鄭州 450003)

中藥工業(yè)

活血調(diào)經(jīng)丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

郭強(qiáng)*

(河南省食品藥品檢驗(yàn)所，河南 鄭州 450003)

目的：建立活血調(diào)經(jīng)丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜方法進(jìn)行定性鑒別，運(yùn)用高效液相色譜法測定丹皮酚的含量。結(jié)果：確立了制劑中延胡索的鑒別方法。通過方法學(xué)系統(tǒng)考察，建立了丹皮酚的含量測定方法，丹皮酚的線性范圍為0.112～0.896 μg，回歸方程Y=32 154X-15 567(r=0.999 8)，平均加樣回收率為100.35%，RSD=1.42%(n=6)。結(jié)論：建立的鑒別和含量測定方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適用于該制劑的質(zhì)量控制。

活血調(diào)經(jīng)丸；延胡索；丹皮酚；高效液相色譜

活血調(diào)經(jīng)丸收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第二冊，由延胡索、黃芩、牡丹皮、熟地黃、陳皮、川芎等19味中藥組成，具有活血理氣、行瘀調(diào)經(jīng)之功效。用于血瘀氣滯、月經(jīng)不調(diào)等癥[1]。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只有顯微鑒別項(xiàng)，無含量測定項(xiàng)，尚不能充分反映產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。延胡索是活血調(diào)經(jīng)丸的主要藥味，具有活血，行氣，止痛的功能[2]，延胡索乙素是延胡索的主要藥理活性成分，因此選定將延胡索對照藥材和延胡索乙素作為本品鑒別的指標(biāo)。牡丹皮是活血調(diào)經(jīng)丸的主要藥味，具有清熱涼血，活血化瘀的功能[2]，現(xiàn)代藥理研究證明，牡丹皮還具有抗過敏、抗炎、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、降壓、催眠、免疫調(diào)節(jié)以及抗內(nèi)毒素和解熱等作用[3-8]，丹皮酚是牡丹皮的主要藥理活性成分，藥理實(shí)驗(yàn)表明丹皮酚具有明顯的抗炎作用[9]，《中國藥典》也是將丹皮酚作為牡丹皮含量測定的指標(biāo)，因此選定牡丹皮的丹皮酚作為含量測定的檢測指標(biāo)。筆者通過實(shí)驗(yàn)研究建立了延胡索薄層色譜鑒別及丹皮酚的含量測定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters2695高效液相色譜儀(配四元泵、自動進(jìn)樣器、Waters2487紫外檢測器)；安捷倫1100高效液相色譜儀(配四元泵、自動進(jìn)樣器、VWD紫外檢測器)；KQ-300型超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥

活血調(diào)經(jīng)丸(河南禹州市藥王制藥有限公司，每袋裝9 g，批號：071012，071013，071014，071015，071016，071101，071102，071103，071104，071105)；延胡索乙素(中國食品藥品檢定研究院，批號：110726-200610)；延胡索對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號：120928-200604)；丹皮酚(中國食品藥品檢定研究院，批號：110708-200505，供含量測定用)；甲醇(德國Merck公司)為色譜醇，水為超純水，其余溶劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 延胡索的薄層色譜鑒別[2]

取本品9 g，研細(xì)，加甲醇50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，加濃氨試液調(diào)至堿性，用乙醚振搖提取3次，每次10 mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。再取延胡索乙素對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。按其處方比例制備不含延胡索的陰性樣品，照上述供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮(9∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置碘缸中約3 min后取出，揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對照無干擾。對照品Rf值為0.5，見圖1。

1.缺延胡索陰性對照品 2.延胡索乙素對照品 3.延胡索對照藥材 4～6.供試品圖1 活血調(diào)經(jīng)丸中延胡索及對照品TLC圖

2.2 丹皮酚的含量測定[2]

2.2.1 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取1.0 g精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理(功率300 W、頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取丹皮酚對照品適量，加甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液，即得。

2.2.3 陰性對照品溶液的制備 按處方取不含牡丹皮的其他藥材，照本制劑的制備工藝制成陰性對照制劑，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

2.2.4 色譜條件 用十八烷基硅烷基鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(50∶50)為流動相，檢測波長為274 nm，流速1.0 mL·min-1，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量10 μL，理論板數(shù)按丹皮酚峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

2.2.5 陰性干擾試驗(yàn) 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10 μL，注入液相色譜儀。結(jié)果表明，供試品色譜中在與對照品色譜相應(yīng)位置上有色譜峰，而陰性對照色譜中在與對照品色譜相應(yīng)位置上則未出現(xiàn)明顯色譜峰，表明在該HPLC測定條件下，丹皮酚的測定無明顯干擾，見圖2。

A.丹皮酚對照品 B.供試品 C.缺牡丹皮的陰性對照品 1.丹皮酚圖2 活血調(diào)經(jīng)丸及對照品HPLC圖

2.2.6 線性關(guān)系考察 精密取丹皮酚對照品，分別制成質(zhì)量濃度為11.2，22.4，44.8，67.2，89.6 μg·mL-1的樣品，進(jìn)樣量10 μL，測定峰面積，將樣品質(zhì)量濃度與峰面積進(jìn)行線性回歸處理，得線性方程為Y=32 154X-15 567，r=0.999 8，表明丹皮酚在0.112～0.896 μg呈良好的線性關(guān)系。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定峰面積積分值，結(jié)果RSD=1.64%，表明儀器精密度良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取本品供試品溶液(071012)10 μL，分別在0，1，3，6，9，12，24 h注入液相色譜儀中，測定丹皮酚峰面積，結(jié)果RSD=0.7%，表明本品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號樣品(071012)6份，按供試品溶液制備方法制備6份供試液，分別測定丹皮酚含量，結(jié)果平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.77 mg·g-1，RSD=0.8%，表明樣品的重復(fù)性良好。

2.2.10 加樣回收率試驗(yàn) 取本品已知含量的樣品(071012)6份，每份約0.5 g，精密加入丹皮酚對照品溶液(質(zhì)量濃度：7.23 μg·mL-1，配制方法：精密量取丹皮酚對照品9.04 mg，加入甲醇溶解并定容至50 mL，精密量取20 mL置500 mL量瓶中并定容至刻度，即得)50 mL，按上述含量測定方法進(jìn)行測定，結(jié)果見表1。

表1 活血調(diào)經(jīng)丸中丹皮酚回收率測定

注：丹皮酚對照品加入量均為361.264 μg

2.2.11 樣品測定 取10批樣品，按2.2.1供試品溶液制備方法制成供試品溶液，注入液相色譜儀，按2.2.4的色譜條件進(jìn)樣并按外標(biāo)一點(diǎn)法測定丹皮酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)，10批樣品測定結(jié)果見表2。

根據(jù)表2結(jié)果，10批樣品中丹皮酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定結(jié)果的平均值為0.78 mg·g-1，按結(jié)果平均值的80%作為含量測定的指標(biāo)，暫定本品含牡丹皮以丹皮酚(C9H10O3)計(jì)，每1 g不得少于0.62 mg。

表2 活血調(diào)經(jīng)丸中丹皮酚的測定

3 討論

3.1 薄層鑒別方法選定過程

薄層色譜研究中，最初選定對當(dāng)歸、川芎、赤芍進(jìn)行鑒別研究，結(jié)果供試品在與當(dāng)歸、川芎、赤芍對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，但是陰性對照樣品色譜在相應(yīng)位置處有干擾。對黃芩也同時進(jìn)行了薄層色譜研究，選擇用甲醇或丙酮直接提取點(diǎn)樣展開后，發(fā)現(xiàn)斑點(diǎn)背景干擾大，黃芩主斑點(diǎn)被背景覆蓋，且陰性也有干擾，故沒有增加黃芩的鑒別項(xiàng)。

3.2 含量測定方法的選擇

參照相關(guān)文獻(xiàn)，丹皮酚含量測定的方法主要有高效液相色譜紫外檢測法(HPLC-UV)[10-11]、氣相色譜法[12]、毛細(xì)管電泳法[13]、紅外光譜[14]和超微電極快速掃描法[15]等，由于HPLC-UV具有儀器設(shè)備廉價易得、操作簡單及應(yīng)用廣泛等特點(diǎn)，因此實(shí)驗(yàn)使用HPLC-UV作為丹皮酚含量測定的方法，方法簡便準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

3.3 含量測定提取方法選擇

含量測定中，對供試液提取選用了甲醇、70%甲醇、乙醇、95%乙醇4種溶劑，結(jié)果在超聲時間相同的情況下，用甲醇提取所得結(jié)果最高，參照《中國藥典》2010年版一部牡丹皮含量測定項(xiàng)下方法[2]，選用甲醇作為提取溶劑。提取方法比較了超聲提取和回流提取，結(jié)果接近，因超聲相對簡單易操作，且節(jié)省能源，故選用超聲提取。加入甲醇量比較了25，50，100 mL，超聲處理時間比較了15，30，45 min，結(jié)果加入甲醇50 mL、超聲處理30 min所得含量最高，故選用加入甲醇50 mL，超聲處理30 min作為本品的提取方法。

[1] 國家藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑[S].第二冊.1990：184.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：130-131，160-161.

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StudiesonQualityStandardofHuoxueTiaojingPills

Guo Qiang

(HenanInstituteforFoodandDrugControl，Zhengzhou450003，China)

Objective：To establish the quality standard of Huoxue Tiaojing Pills.Methods：The thin layer chromatography (TLC) was adopted for qualitative identification，paeonol was detected by HPLC.Results：The identifying method ofCorydalisyanhusuowas established.The determination method for the content of paeonol was established.The calibration curve of paeonol was liner in the range of 0.112-0.896 μg.The regression equation wasY=32154X-15567(r=0.999 8).The average recovery was 100.35% and RSD was 1.42%(n=6).Conclusion：The method is simple，accurate and reproducible.It can be used for the quality control of Huoxue Tiaojing Pills.

Huoxue Tiaojing Pills；Corydalisyanhusuo；Paeonol；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.08.011

2014-01-08)

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郭強(qiáng)，主管藥師，研究方向：藥品檢驗(yàn)及藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；E-mail：35451981@qq.com