張正瀅+杜子榮++鄒敏

摘 要 目的：采用高效液相色譜法測定洋參蟲草膠囊中人參皂苷Rb1的含量。方法：使用Intersil ODS-3色譜柱（4.6 mm x 250 mm, 5 μm）；乙腈-0.015%磷酸溶液（31∶69）為流動相；檢測波長為203 nm。結果：人參皂苷Rb1在0.426~21.3 μg線性關系良好（r=1.000 0），平均加樣回收率（n=5）為96.0%，RSD=1.03%，人參皂苷Rb1含量不少于0.7%。結論：本方法簡便、準確，重復性好，可用于洋參蟲草膠囊的質量控制。

關鍵詞洋參蟲草膠囊人參皂苷Rb1高效液相色譜法

中圖分類號：R927.2; O657.72文獻標識碼：A文章編號：1006-1533(2014)13-0077-04

Determination of ginsenoside Rb1 in Yangshen Chongcao capsule by HPLC

ZHANG Zhengying*, DU Zirong, ZHOU Min

(Shanghai Zhonghua Pharmaceutical(Group)Co. Ltd., shanghai 200052, China)

ABSTRACT Objective: To establish an HPLC method for determination of ginsenoside Rb1 in Yangshen Chongcao capsules. Methods: HPLC was performed by use of Intersil ODS-3 column (4.6 mm x 250 mm, 5 μm) with acetonitrile-0.015% phosphoric acid (31:69) as mobile phase and detection wavelength of 203 nm. Results: The standard curve of ginsenoside Rb1 was linear over the range of 0.426~21.3 μg (r=1.000 0). The average recovery rate (n=5) was 96.0% with RSD 1.03%. The content of ginsenoside Rb1 was not less than 0.7%. Conclusion: This method is simple, accurate, reproducible, and can be used for the quality control of Yangshen Chongcao capsule.

KEY WORDS Yangshen Chongcao capsule; ginsenoside Rb1; HPLC

洋參蟲草膠囊由西洋參、冬蟲夏草、紅景天、龜板膠組成，為益氣滋陰，填精補元佳品。西洋參屬五加科植物[1-2]，性味甘、微苦，涼，歸心、肺、腎經(jīng)，功能補氣養(yǎng)陰，清熱生津。用于氣虛陰虧，虛熱煩倦，咳喘痰血，內(nèi)熱消渴，口燥咽干。經(jīng)現(xiàn)代科學研究，西洋參中含有人參皂苷等多種補益物質，能增強抗病能力，強心，抗疲勞，延緩衰老及預防腫瘤功效。西洋參為本品之君藥，人參皂苷Rb1是其主要活性成分之一，本文采用高效液相色譜法測定洋參膠囊中人參皂苷Rb1的含量，為控制產(chǎn)品的內(nèi)在質量提供了實驗依據(jù)。

1儀器與試藥

Waters 510高效液相系統(tǒng)：Waters 2487 雙波長紫外檢測儀；人參皂苷Rb1（中國藥品生物制品檢定所，批號110704-200420）；洋參蟲草膠囊 （上海中華藥業(yè)有限公司，規(guī)格：每粒裝0.4 g，批號見表4）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件

Intersil ODS-3色譜柱（4.6 mm x 250 mm, 5 μm），流動相：乙腈-0.015%磷酸溶液（31∶69），流速為1.0 ml/min，檢測波長為203 nm。在此條件下，人參皂苷Rb1對照品的理論板數(shù)為4 336，故暫定色譜柱的理論塔板數(shù)按人參皂苷Rb1峰計算應不低于4 000。

2.2對照品溶液制備

精密稱取人參皂苷Rb1對照品適量，加甲醇制成含量為0.4 mg/ml的溶液。

2.3試品溶液制備

取本品內(nèi)容物約0.9 g，精密稱定，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減少的重量，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液20 ml，65 ℃水浴蒸干，殘余物用40 ml水飽和正丁醇分次溶解轉移至分液漏斗中，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次為20 ml，保留正丁醇液；合并二次水液，用水飽和的正丁醇萃取2次，分別為20 ml、15 ml，棄去水液；合并前后的正丁醇液，65 ℃減壓濃縮至干。殘余物加甲醇溶解，轉移至10 ml量瓶中，并加甲醇至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取過濾液作為供試品溶液。

2.4空白試驗

去除西洋參的洋參蟲草膠囊空白樣品，同法制成空白對照供試液，進行HPLC分析，并與對照品和供試品比較，結果空白無干擾（圖1）。

2.5供試品提取方法的研究

2.5.1熱回流提取與超聲處理的比較

熱回流提取除65 ℃加熱回流1.5 h取代超聲處理30 min外，其它與2.3同。取過濾液作為熱回流提取供試品溶液。

將兩種方法獲得的溶液分別進行分析，結果表明：本品分別經(jīng)加熱回流法和超聲法提取，其中人參皂苷Rb1含量分別為1.015%和1.020%，可見超聲提取效果與加熱回流法相似，從操作方便角度考慮，選用超聲處理。

2.5.2超聲時間考察

取本品內(nèi)容物約0.9 g，共4份，除分別超聲處理10、20、30、45 min外，其余同2.3。進樣分析表明，供試品超聲30 min已基本提取完全（表1）。

2.6線性范圍

取濃度為426 μg/ml的人參皂苷Rb1對照品溶液，分別進樣10、20、50 μl分析；對照品溶液稀釋10倍后，再分別進樣10、20 μl分析。以峰面積為縱坐標(Y)，進樣量（μg）為橫坐標(X)進行線性回歸，得回歸方程為Y=235.30X-106 47, r=1.000 0。結果表明人參皂苷Rb1在0.426～21.3 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關系。

2.7精密度試驗

精密量取人參皂苷Rb1對照品溶液（0.353 mg/ml）10 μl，進樣分析6次，其峰面積的RSD為0.57%，符合要求。

2.8重復性試驗

取同批號樣品（批號011001）5份，按2.3制備供試品溶液，測定含量（表2）。

2.9加樣回收率測定

取已測定含量的洋參蟲草膠囊樣品（批號011001）約0.4 g，共5份，精密稱定，分別精密加入濃度約為0.88 mg/ml的對照品溶液5 ml，同2.3處理，進樣分析，計算加樣回收率（表3）。

2.10穩(wěn)定性試驗

精密吸取供試品溶液于0、2、4、6 h各進樣1次，人參皂苷Rb1含量分別為1.02%、1.01%、1.02%、1.02%，結果表明樣品溶液在6 h內(nèi)保持穩(wěn)定。

“百路達”銀杏葉膠囊獲加拿大注冊批準上海信誼百路達藥業(yè)有限公司主打產(chǎn)品“百路達”銀杏葉膠囊于2014年6月6日獲加拿大衛(wèi)生部天然藥品局批準（上市許可證號：202598，品種批準文號：NPN80051461），其產(chǎn)品實現(xiàn)年銷售額超億元，系國內(nèi)同類產(chǎn)品中品牌影響力排名第一位。作為“上海市高新技術企業(yè)”，上海信誼百路達藥業(yè)有限公司建立了以中國工程院侯惠民院士領銜的“院士專家企業(yè)工作站”，與第二軍醫(yī)大學、中國科學院昆明植物研究所等建立了聯(lián)合實驗室，并曾獲得“國家重點新產(chǎn)品”、“國家十五火炬計劃優(yōu)秀項目獎”、“上海市重點新產(chǎn)品”、“上海市專利新產(chǎn)品”等眾多獎項。（大公網(wǎng)）

2.11樣品檢測結果：

分別收集10批洋參蟲草膠囊樣品，按2.3操作，平行制備2份，分別精密吸取對照品溶液10 μl、供試品溶液10 μl，分別進行HPLC分析并計算含量（表4）。

2000年版中國藥典一部西洋參藥材[3]含量測定項下規(guī)定：本品含人參皂苷Rb1（C54H92O23）不得少于1.0%。本品處方（每1 000粒）中含西洋參量為266.7 g，其中人參皂苷Rb1占處方總量的0.67%。暫定每粒洋參蟲草膠囊內(nèi)含人參皂苷Rb1含量不得少于3.0 mg。

3討論

目前，有關西洋參及其制劑的含量測定方法[4-10]報道較多，其中多數(shù)是以梯度洗脫法測定其中人參皂苷Rg1、Re、Rb1等含量。洋參蟲草膠囊為上海中華藥業(yè)有限公司自主研發(fā)產(chǎn)品，其中西洋參為君藥，由于該處方中還含有冬蟲夏草、龜板膠動物藥材，對該品種的質量控制難度增加，為有效控制成品質量，在中國藥典等文獻基礎上，探討成品的含量測定方法。

首先，按照中國藥典西洋參藥材[3]含量測定項下的流動相要求，適當調節(jié)比例，結果樣品不能達到基線分離，后加入適量磷酸，改善了這一情況；其次，對樣品前處理方法進行了摸索，比較了加熱回流法和超聲法，確定用超聲法進行處理，使操作更簡單，便于控制，亦不影響樣品中人參皂苷Rb1的提取和含量測定。結果表明本試驗建立的人參皂苷Rb1含量測定方法穩(wěn)定、簡便、精密度高、重復性好，便于質量標準執(zhí)行，為洋參蟲草膠囊的質量控制提供了依據(jù)。

參考文獻

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[10] 曾祥基. 人參皂苷的分離和定量測定[J]. 成都大學學報(自然科學版), 2003, 22(2): 1-9.

（收稿日期：2014-03-27）

“百路達”銀杏葉膠囊獲加拿大注冊批準上海信誼百路達藥業(yè)有限公司主打產(chǎn)品“百路達”銀杏葉膠囊于2014年6月6日獲加拿大衛(wèi)生部天然藥品局批準（上市許可證號：202598，品種批準文號：NPN80051461），其產(chǎn)品實現(xiàn)年銷售額超億元，系國內(nèi)同類產(chǎn)品中品牌影響力排名第一位。作為“上海市高新技術企業(yè)”，上海信誼百路達藥業(yè)有限公司建立了以中國工程院侯惠民院士領銜的“院士專家企業(yè)工作站”，與第二軍醫(yī)大學、中國科學院昆明植物研究所等建立了聯(lián)合實驗室，并曾獲得“國家重點新產(chǎn)品”、“國家十五火炬計劃優(yōu)秀項目獎”、“上海市重點新產(chǎn)品”、“上海市專利新產(chǎn)品”等眾多獎項。（大公網(wǎng)）

2.11樣品檢測結果：

分別收集10批洋參蟲草膠囊樣品，按2.3操作，平行制備2份，分別精密吸取對照品溶液10 μl、供試品溶液10 μl，分別進行HPLC分析并計算含量（表4）。

2000年版中國藥典一部西洋參藥材[3]含量測定項下規(guī)定：本品含人參皂苷Rb1（C54H92O23）不得少于1.0%。本品處方（每1 000粒）中含西洋參量為266.7 g，其中人參皂苷Rb1占處方總量的0.67%。暫定每粒洋參蟲草膠囊內(nèi)含人參皂苷Rb1含量不得少于3.0 mg。

3討論

目前，有關西洋參及其制劑的含量測定方法[4-10]報道較多，其中多數(shù)是以梯度洗脫法測定其中人參皂苷Rg1、Re、Rb1等含量。洋參蟲草膠囊為上海中華藥業(yè)有限公司自主研發(fā)產(chǎn)品，其中西洋參為君藥，由于該處方中還含有冬蟲夏草、龜板膠動物藥材，對該品種的質量控制難度增加，為有效控制成品質量，在中國藥典等文獻基礎上，探討成品的含量測定方法。

首先，按照中國藥典西洋參藥材[3]含量測定項下的流動相要求，適當調節(jié)比例，結果樣品不能達到基線分離，后加入適量磷酸，改善了這一情況；其次，對樣品前處理方法進行了摸索，比較了加熱回流法和超聲法，確定用超聲法進行處理，使操作更簡單，便于控制，亦不影響樣品中人參皂苷Rb1的提取和含量測定。結果表明本試驗建立的人參皂苷Rb1含量測定方法穩(wěn)定、簡便、精密度高、重復性好，便于質量標準執(zhí)行，為洋參蟲草膠囊的質量控制提供了依據(jù)。

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[8] 沈嵐, 馮怡, 徐德生, 等. 反相高效液相色譜法測定三七花中人參皂苷Rb1的含量[J]. 時珍國醫(yī)國藥, 2009, 20(6): 1482-1483.

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[10] 曾祥基. 人參皂苷的分離和定量測定[J]. 成都大學學報(自然科學版), 2003, 22(2): 1-9.

（收稿日期：2014-03-27）

“百路達”銀杏葉膠囊獲加拿大注冊批準上海信誼百路達藥業(yè)有限公司主打產(chǎn)品“百路達”銀杏葉膠囊于2014年6月6日獲加拿大衛(wèi)生部天然藥品局批準（上市許可證號：202598，品種批準文號：NPN80051461），其產(chǎn)品實現(xiàn)年銷售額超億元，系國內(nèi)同類產(chǎn)品中品牌影響力排名第一位。作為“上海市高新技術企業(yè)”，上海信誼百路達藥業(yè)有限公司建立了以中國工程院侯惠民院士領銜的“院士專家企業(yè)工作站”，與第二軍醫(yī)大學、中國科學院昆明植物研究所等建立了聯(lián)合實驗室，并曾獲得“國家重點新產(chǎn)品”、“國家十五火炬計劃優(yōu)秀項目獎”、“上海市重點新產(chǎn)品”、“上海市專利新產(chǎn)品”等眾多獎項。（大公網(wǎng)）

2.11樣品檢測結果：

分別收集10批洋參蟲草膠囊樣品，按2.3操作，平行制備2份，分別精密吸取對照品溶液10 μl、供試品溶液10 μl，分別進行HPLC分析并計算含量（表4）。

2000年版中國藥典一部西洋參藥材[3]含量測定項下規(guī)定：本品含人參皂苷Rb1（C54H92O23）不得少于1.0%。本品處方（每1 000粒）中含西洋參量為266.7 g，其中人參皂苷Rb1占處方總量的0.67%。暫定每粒洋參蟲草膠囊內(nèi)含人參皂苷Rb1含量不得少于3.0 mg。

3討論

目前，有關西洋參及其制劑的含量測定方法[4-10]報道較多，其中多數(shù)是以梯度洗脫法測定其中人參皂苷Rg1、Re、Rb1等含量。洋參蟲草膠囊為上海中華藥業(yè)有限公司自主研發(fā)產(chǎn)品，其中西洋參為君藥，由于該處方中還含有冬蟲夏草、龜板膠動物藥材，對該品種的質量控制難度增加，為有效控制成品質量，在中國藥典等文獻基礎上，探討成品的含量測定方法。

首先，按照中國藥典西洋參藥材[3]含量測定項下的流動相要求，適當調節(jié)比例，結果樣品不能達到基線分離，后加入適量磷酸，改善了這一情況；其次，對樣品前處理方法進行了摸索，比較了加熱回流法和超聲法，確定用超聲法進行處理，使操作更簡單，便于控制，亦不影響樣品中人參皂苷Rb1的提取和含量測定。結果表明本試驗建立的人參皂苷Rb1含量測定方法穩(wěn)定、簡便、精密度高、重復性好，便于質量標準執(zhí)行，為洋參蟲草膠囊的質量控制提供了依據(jù)。

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[9] 沈志濱, 朱俊訪, 李博. HPLC法測定益氣復脈口服液中人參皂苷Rg1、Re、Rb1的含量[J]. 廣東藥學院學報, 2006, 22(3): 259-260, 267.

[10] 曾祥基. 人參皂苷的分離和定量測定[J]. 成都大學學報(自然科學版), 2003, 22(2): 1-9.

（收稿日期：2014-03-27）

“百路達”銀杏葉膠囊獲加拿大注冊批準上海信誼百路達藥業(yè)有限公司主打產(chǎn)品“百路達”銀杏葉膠囊于2014年6月6日獲加拿大衛(wèi)生部天然藥品局批準（上市許可證號：202598，品種批準文號：NPN80051461），其產(chǎn)品實現(xiàn)年銷售額超億元，系國內(nèi)同類產(chǎn)品中品牌影響力排名第一位。作為“上海市高新技術企業(yè)”，上海信誼百路達藥業(yè)有限公司建立了以中國工程院侯惠民院士領銜的“院士專家企業(yè)工作站”，與第二軍醫(yī)大學、中國科學院昆明植物研究所等建立了聯(lián)合實驗室，并曾獲得“國家重點新產(chǎn)品”、“國家十五火炬計劃優(yōu)秀項目獎”、“上海市重點新產(chǎn)品”、“上海市專利新產(chǎn)品”等眾多獎項。（大公網(wǎng)）